本發明涉及一種玫瑰紅鈉瓊脂培養基平板，特別涉及一種可輻照滅菌的玫瑰紅鈉瓊脂培養基平板。
背景技術：
用戶在使用成品培養基時需要在潔凈區內操作，而對于這類凈化級別要求較高的區域，除了要求遵循無菌操作外，對培養基本身無菌的要求也較高，防止培養基及包裝袋帶菌對工作臺及潔凈區域造成污染。對成品培養基平板進行滅菌處理是非常有必要的。
輻照滅菌操作方法，滅菌效果好，是現有最佳的三層無菌包裝成品培養基所能接受的終端滅菌方式。然而，輻照會造成過氧化物形成并積累而導致氧化損傷，會對培養基產生一定的有毒效應，特別是當培養基中含有敏感物質時。用于環境監測的TSA、SDA等培養基經過輻照后，由于不含敏感物質，低劑量(10KGy以下)對培養基的性能影響不大。
玫瑰紅鈉瓊脂培養基是一種選擇性培養基，用于藥品和生物制品霉菌和酵母的計數。玫瑰紅鈉瓊脂培養基中的玫瑰紅鈉對輻照較為敏感，輻照滅菌后顏色會變淺。性能測試表明輻照滅菌后的玫瑰紅鈉瓊脂培養基置于陰涼庫(20～25℃)貯存7d后，目標菌白色念珠菌CMCC(F)98001不生長，表明按標準配方配制的玫瑰紅鈉瓊脂平板(中華人民共和國藥典2010版)不適合輻照的終端滅菌。
現有的成品玫瑰紅鈉瓊脂培養基平板基本都采用其他更為復雜的方法滅菌，或臨用時配制并倒平板，使用極其不便。
開發出一種可輻照滅菌的玫瑰紅鈉瓊脂培養基平板，可以方便地獲得成品玫瑰紅鈉瓊脂培養基平板，利于后續的檢測。
技術實現要素：
本發明的目的在于提供一種可輻照滅菌的玫瑰紅鈉瓊脂培養基平板。
本發明所采取的技術方案是：
一種可輻照滅菌的玫瑰紅鈉瓊脂培養基平板，包括胨、玫瑰紅鈉、葡萄糖、瓊脂、磷酸二氫鉀、硫酸鎂和抗氧化劑。
作為上述玫瑰紅鈉瓊脂培養基平板的進一步改進，每1000ml培養基中含有胨5.0g、玫瑰紅鈉0.0133g、葡萄糖10.0g、瓊脂14.0g、磷酸二氫鉀1.0g、硫酸鎂0.5g。
作為上述玫瑰紅鈉瓊脂培養基平板的進一步改進，每1000ml培養基中含有抗氧化劑0.3～3.0g。
作為上述玫瑰紅鈉瓊脂培養基平板的進一步改進，抗氧化劑選自硫酸亞鐵、檸檬酸鈉、硫代硫酸鈉和亞硫酸氫鈉中的至少一種。
作為上述玫瑰紅鈉瓊脂培養基平板的進一步改進，抗氧化劑為硫代硫酸鈉和亞硫酸氫鈉的混合物。特別的，每1000ml培養基中含有硫代硫酸鈉0.4～0.6g，亞硫酸氫鈉0.5～0.7g。
作為上述玫瑰紅鈉瓊脂培養基平板的進一步改進，每1000ml培養基中含有胨5.0g、玫瑰紅鈉0.0133g、葡萄糖10.0g、瓊脂14.0g、磷酸二氫鉀1.0g、硫酸鎂0.5g、硫代硫酸鈉0.4～0.6g，亞硫酸氫鈉0.5～0.7g。
作為上述玫瑰紅鈉瓊脂培養基平板的進一步改進，每1000ml培養基含有胨5.0g、玫瑰紅鈉0.0133g、葡萄糖10.0g、瓊脂14.0g、磷酸二氫鉀1.0g、硫酸鎂0.5g，硫代硫酸鈉0.57g，亞硫酸氫鈉0.6g。
本發明的有益效果是：
本發明的玫瑰紅鈉瓊脂培養基平板經5KGy劑量輻照的最終滅菌，無菌保證程度高，避免了原有制備工藝的染菌風險；并且培養基本身顏色基本不變化，解決了標準配方配制的培養基輻照后顏色明顯變淺的問題；培養基性能依舊良好，白色念珠菌在陰涼庫(20～25℃)貯存30d后的平板上仍然生長良好，而在標準配方配制的瓊脂培養基平板上7d后即不生長。
附圖說明
圖1是不同培養基平板輻照滅菌后的顏色變化情況。
具體實施方式
下面結合實施例，進一步說明本發明的技術方案。
實施例1
一種可經輻照終端滅菌的玫瑰紅鈉瓊脂培養基平板，每1000ml培養基含有胨5.0g、玫瑰紅鈉0.0133g、葡萄糖10.0g、瓊脂14.0g、磷酸二氫鉀1.0g、硫酸鎂0.5g，硫代硫酸鈉0.57g，亞硫酸氫鈉0.6g。
實施例2
一種可經輻照終端滅菌的玫瑰紅鈉瓊脂培養基平板，每1000ml培養基含有胨5.0g、玫瑰紅鈉0.0133g、葡萄糖10.0g、瓊脂14.0g、磷酸二氫鉀1.0g、硫酸鎂0.5g，硫酸亞鐵1.1g。
實施例3
一種可經輻照終端滅菌的玫瑰紅鈉瓊脂培養基平板，每1000ml培養基含有胨5.0g、玫瑰紅鈉0.0133g、葡萄糖10.0g、瓊脂14.0g、磷酸二氫鉀1.0g、硫酸鎂0.5g，檸檬酸鈉1.2g。
實施例4
一種可經輻照終端滅菌的玫瑰紅鈉瓊脂培養基平板，每1000ml培養基含有胨5.0g、玫瑰紅鈉0.0133g、葡萄糖10.0g、瓊脂14.0g、磷酸二氫鉀1.0g、硫酸鎂0.5g，硫代硫酸鈉0.4g，亞硫酸氫鈉0.7g。
實施例5
一種可經輻照終端滅菌的玫瑰紅鈉瓊脂培養基平板，每1000ml培養基含有胨5.0g、玫瑰紅鈉0.0133g、葡萄糖10.0g、瓊脂14.0g、磷酸二氫鉀1.0g、硫酸鎂0.5g，硫代硫酸鈉0.6g，亞硫酸氫鈉0.5g。
實施例6
一種可經輻照終端滅菌的玫瑰紅鈉瓊脂培養基平板，每1000ml培養基含有胨5.0g、玫瑰紅鈉0.0133g、葡萄糖10.0g、瓊脂14.0g、磷酸二氫鉀1.0g、硫酸鎂0.5g，亞硫酸氫鈉2.5g。
實施例7
一種可經輻照終端滅菌的玫瑰紅鈉瓊脂培養基平板，每1000ml培養基含有胨5.0g、玫瑰紅鈉0.0133g、葡萄糖10.0g、瓊脂14.0g、磷酸二氫鉀1.0g、硫酸鎂0.5g，硫代硫酸鈉0.3g。
實施例8
一種可經輻照終端滅菌的玫瑰紅鈉瓊脂培養基平板，每1000ml培養基含有胨5.0g、玫瑰紅鈉0.0133g、葡萄糖10.0g、瓊脂14.0g、磷酸二氫鉀1.0g、硫酸鎂0.5g，亞硫酸氫鈉3g。
平板性能測試：
1材料
1.1菌株
枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)CMCC(B)63501，釀酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)ATCC9763，白色念珠菌(Candida albicans)CMCC(F)98001，黑曲霉(Aspergillus niger)CMCC(F)98003，桔青霉(Penicillium citrinum)AS.2788由本實驗室保存。這些菌株可以使用其他公知的菌株替換。
1.2培養基及試劑
實施例1所述玫瑰紅鈉瓊脂培養基平板(簡稱玫瑰紅鈉平板1)、實施例2所述玫瑰紅鈉瓊脂培養基平板(簡稱玫瑰紅鈉平板2)、實施例3所述玫瑰紅鈉瓊脂培養基平板(簡稱玫瑰紅鈉平板3)、原配方玫瑰紅鈉瓊脂培養基平板、胰酪胨大豆瓊脂培養基平板(簡稱TSA平板)和沙氏葡萄糖瓊脂培養基平板(簡稱SDA平板)由廣東環凱微生物科技有限公司提供。玫瑰紅鈉瓊脂培養基標準品由中國食品藥品檢定研究院提供。
2方法
2.1輻照對培養基顏色和生物學的影響
2.1.1玫瑰紅鈉瓊脂培養基平板制備：按玫瑰紅鈉瓊脂培養基標準配方稱取各原料，并按比例加入抗氧化物硫代硫酸鈉和亞硫酸氫鈉(玫瑰紅鈉平板1)、或硫酸亞鐵(玫瑰紅鈉平板2)、或檸檬酸鈉(玫瑰紅鈉平板3)，調整pH值，煮沸溶解，121℃滅菌20min，冷卻至50℃傾注平板，備用。
2.1.2將制備好的玫瑰紅鈉平板1進行三層包裝，送交輻照中心進行5KGy劑量的電子束輻照，以不進行輻照的平板作為對照。輻照完成后觀察平板的色澤，并將兩種平板置于20～25℃陰涼庫中儲存，分別在0d、7d、15d、30d取樣，接種白色念珠菌CMCC(F)98001，觀察菌落生長情況并計數。接種方法見2.3。
2.2人工污染培養基輻照滅菌實驗
將白色念珠菌及黑曲霉3株菌的新鮮斜面培養物用0.85％的無菌生理鹽水制成102～103cfu/ml及10～102cfu/ml的菌懸液。分別取上述各菌液0.1ml用全自動螺旋接種儀接種至玫瑰紅鈉平板1上，同時接種參比培養基SDA平板。接種好的一半平板和參比培養基置于培養箱中培養，另一半放置室溫8h后送交輻照中心進行5KGy劑量的電子束輻照，后置于培養箱中培養。23-28℃培養3～5d。進行菌落計數。
2.3培養基性能評價實驗
生長率試驗：采用定量方法進行。將白色念珠菌、黑曲霉2株菌的新鮮斜面培養物制成約103cfu/ml的菌懸液。分別取上述各菌液0.1ml用全自動螺旋接種儀分別接種于經5KGy輻照的玫瑰紅鈉平板1、玫瑰紅鈉平板2、玫瑰紅鈉平板3及未經輻照作為對照的原配方平板和玫瑰紅鈉瓊脂培養基標準品上，白色念珠菌、黑曲霉的菌液同時接種參比培養基SDA平板，23-28℃培養3～5d。每種平板進行3個重復。觀察各株菌在培養基上的生長情況，并對其進行菌落計數。按下列公式計算生長率PR。PR＝NS/N0，NS：待測培養基平板上得到的平均菌落數；N0：參比培養基平板上獲得的平均菌落數。
釀酒酵母、桔青霉劃線于經5KGy輻照的玫瑰紅鈉平板1及未經輻照作為對照的原配方平板和玫瑰紅鈉瓊脂標準品上，23-28℃培養3～5d。觀察各株菌在培養基上的生長情況。
3結果
3.1感官
實施例1所描述的玫瑰紅鈉瓊脂培養基平板經5KGy輻照后，顏色基本不發生改變。而原配方經輻照后，平板顏色明顯變淺。結果見圖1，圖中，(A：原配方未經輻照；B：原配方5KGy輻照后；C：玫瑰紅鈉平板1未經輻照；D：玫瑰紅鈉平板1經5KGy輻照后。
3.2生物學
經5KGy輻照后置于陰涼庫(20～25℃)貯存，之后取貯存不同時期的平板，接種白色念珠菌，檢測白色念珠菌在平板上的生長率，結果見表1：
表1、兩種培養基平板陰涼庫儲存條件下白色念珠菌生長率比較
實驗數據顯示，原配方平板7d后白色念珠菌即不生長。而實施案例1所述的平板在放置30d后白色念珠菌在平板上仍然生長良好。
3.3人工污染培養基輻照滅菌實驗
實施案例1所述培養基接種一定量的白色念珠菌、黑曲霉經5KGy電子束輻照后，檢測其能否達到無菌要求，結果見表2：
表2、人工污染培養基輻照滅菌實驗
結果表明經5KGy電子束輻照后的平板均無菌落生長，表明實施案例1所述培養基經5KGy電子束輻照能達到無菌要求。
3.4培養基性能評價
取不同培養基平板進行性能評價，結果見表3：
表3、培養基性能評價實驗
結果表明，實施案例1所述培養基經5KGy輻照后與原配方和中檢所標準品相比，各目標菌的生長率無明顯差異。目標菌白色念珠菌CMCC(F)98001和黑曲霉CMCC(F)98003均能達到0.7的生長率，且目標菌的菌落大小和形態與對照一致。釀酒酵母ATCC9763、桔青霉AS.2788在實施案例1所述的平板上均生長良好，菌落特征明顯。但是實施案例2、3所述培養基經5KGy輻照后接種黑曲霉產孢子速度慢，培養3d后仍未見黑色孢子產生。
綜上所述，實施案例1的玫瑰紅鈉瓊脂培養基平板經5KGy劑量輻照的最終滅菌，無菌保證程度高，并且培養基本身顏色基本不變化，培養基性能依舊良好，為輻照培養基的商業應用提供了新的途徑。
雖然本發明對具體實施案例進行了描述，但是本發明并不局限于此。本行業技術人員應該意識到，在本發明所述原理下對本發明做的多種修飾和改變，均應認為是本發明的保護范圍。