本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種高效擴增人骨髓間充質(zhì)干細胞并保持其干性的培養(yǎng)基及方法，可明顯提高干細胞擴增速率并能夠在增殖過程中保持良好的干細胞干性。

背景技術(shù)：

骨髓間充質(zhì)干細胞(bmscs)作為一種新的用途廣泛的種子細胞，具有較強增殖能力和多向分化潛能，能夠在特定誘導條件下向成骨細胞、成纖維細胞、網(wǎng)狀細胞、脂肪細胞和內(nèi)皮細胞等分化，可進行自體移植而不存在組織配型和免疫排斥，在細胞移植、基因治療、細胞治療和組織工程等領(lǐng)域具有廣泛的應用前景[tissueengregenmed.2016；13:465-74]。

骨髓間充質(zhì)干細胞在應用于臨床治療和組織工程中需要大量細胞，但從骨髓中獲取的干細胞數(shù)量有限，不能滿足實際應用所需的細胞量，同時干細胞在體外培養(yǎng)擴增過程中，極易分化、老化從而失去多向分化潛能，即干細胞的干性，因此本領(lǐng)域目前迫切需要研究骨髓間充質(zhì)干細胞快速擴增并保持干性的方法，以滿足科研及臨床應用的需要。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

針對上述問題，本發(fā)明的目的在于提供一種高效擴增人骨髓間充質(zhì)干細胞(hbmsc)并保持其干性的培養(yǎng)基和方法。

一方面，本發(fā)明提供一種能夠高效擴增人骨髓間充質(zhì)干細胞并保持其干性的培養(yǎng)基，其含有si離子和sr離子中的至少一種，優(yōu)選為含有si離子和sr離子，其中，si離子的濃度為1～10ppm，sr離子的濃度為2～50ppm。

使用本發(fā)明的培養(yǎng)基培養(yǎng)人骨髓間充質(zhì)干細胞時，能提高骨髓間充質(zhì)干細胞的擴增效率，同時保持良好的干細胞干性，可為科學研究及臨床應用提供大量的骨髓間充質(zhì)干細胞。例如，本發(fā)明的培養(yǎng)基促進hbmsc增殖百分比可為20％～50％。

較佳地，si離子的濃度為1.5～5ppm。

較佳地，sr離子的濃度為10.5～40ppm。

較佳地，所述培養(yǎng)基是人骨髓間充質(zhì)干細胞專用完全培養(yǎng)基對casio3粉體的浸提液、人骨髓間充質(zhì)干細胞專用完全培養(yǎng)基對sro粉體的浸提液、人骨髓間充質(zhì)干細胞專用完全培養(yǎng)基對srsio3粉體的浸提液、或其中任意兩種以上的混合。

另一方面，本發(fā)明提供一種高效擴增人骨髓間充質(zhì)干細胞并保持其干性的方法，用上述任意一種培養(yǎng)基培養(yǎng)人骨髓間充質(zhì)干細胞。

根據(jù)上述方法，可以高效擴增人骨髓間充質(zhì)干細胞并保持其干性，可以短時間內(nèi)獲得大量具有良好干性的骨髓間充質(zhì)干細胞，為科學實驗研究、臨床治療和骨組織工程快速擴增干細胞提供了可行的方法和依據(jù)。

附圖說明

圖1為本發(fā)明一實施方式的實驗探究步驟流程圖。由圖可見，首先制備了具有不同濃度si、sr以及si-sr組合的浸提液培養(yǎng)基，通過培養(yǎng)hbmsc篩選出了促進其快速擴增的最佳si-sr組合濃度，并進一步探究了此濃度對干細胞干性的影響；

圖2為含不同濃度單一si培養(yǎng)基對人骨髓間充質(zhì)干細胞增殖的影響。由圖可見，單一si在稀釋至1/16-1/64之間，對照表1，單一si濃度在1.259-5.18ppm能夠明顯促進hbmsc增殖，并且單一si在2.59ppm處具有極明顯的促進增殖效果；

圖3為si濃度為2.59ppm，添加不同濃度sr后si-sr組合以及對應相同濃度單一sr對人骨髓間充質(zhì)干細胞增殖的影響。由圖可見，單一sr濃度在0.32-40.39ppm均對hbmsc增殖有促進作用，si(2.59pm)與sr組合后，si(2.59ppm)-sr(2.52-40.39ppm)能夠更明顯的促進細胞增殖，其中si(2.59ppm)-sr(20.20ppm)促進效果最顯著。同時單一si(2.59ppm)促進細胞增殖率為11.10％，單一sr(20.20ppm)促進細胞增殖率為16.89％，兩者疊加起來仍小于實際si(2.59ppm)-sr(20.20ppm)組合促進細胞增殖率47.48％，說明si-sr組合對于促進hbmsc增殖存在協(xié)同效應；

圖4為單一si(2.59ppm)、單一sr(20.20ppm)和si(2.59ppm)-sr(20.20ppm)組合在促進干細胞增殖過程中對干細胞干性的影響。如圖可見，單一si(2.59ppm)和單一sr(20.20ppm)在維持干細胞干性方面均有作用，但是si(2.59ppm)-sr(20.20ppm)組合具有極其明顯的效果，對于四個干性相關(guān)基因，單一si(2.59ppm)相比對照組提高干性率與單一sr(20.20ppm)提高干性率兩者疊加起來仍明顯小于實際si(2.59ppm)-sr(20.20ppm)組合相比對照組提高干性率，說明si-sr組合對于維持hbmsc干性存在協(xié)同效應。

具體實施方式

以下結(jié)合附圖和下述實施方式進一步說明本發(fā)明，應理解，附圖及下述實施方式僅用于說明本發(fā)明，而非限制本發(fā)明。

本發(fā)明一實施方式提供一種能夠體外高效擴增人骨髓間充質(zhì)干細胞并保持其干性的培養(yǎng)基。該培養(yǎng)基含有si離子和sr離子中的至少一種。該培養(yǎng)基中，si離子的存在形式可為sio4^4-。sr離子的存在形式可為sr²⁺。

一個示例中，所述培養(yǎng)基含有單一si離子，其中si離子的濃度可為1～10ppm，優(yōu)選為1.259～5.18ppm，更優(yōu)選為1.5～5ppm，進一步優(yōu)選為2.59ppm。

另一示例中，所述培養(yǎng)基含有單一sr離子，其中sr離子的濃度可為2～50ppm，優(yōu)選為2.52～40.39ppm，更優(yōu)選為10.5～40ppm，進一步優(yōu)選為20.20ppm。

又一示例中，所述培養(yǎng)基同時含有si離子和sr離子，其中si離子的濃度可為1～10ppm，優(yōu)選為1.259～5.18ppm，更優(yōu)選為1.5～5ppm，進一步優(yōu)選為2.59ppm，sr離子的濃度可為2～50ppm，優(yōu)選為2.52～40.39ppm，更優(yōu)選為10.5～40ppm，進一步優(yōu)選為20.20ppm。培養(yǎng)基中同時含有si離子和sr離子時，si離子和sr離子對促進hbmsc增殖及保持其干性存在協(xié)同效應，即、其促進效果大于單一si離子和單一sr離子的疊加。si(2.59ppm)-sr(20.20ppm)在此濃度能明顯促進干細胞增殖，并在促進干細胞快速擴增過程中協(xié)同保持干細胞干性。在所述培養(yǎng)基中，如果si離子和/或sr離子的濃度過大，則會有一定細胞毒性；如果si離子和/或sr離子的濃度過小，則難以起到高效擴增人骨髓間充質(zhì)干細胞并保持其干性的作用。

所述培養(yǎng)基的基礎(chǔ)組分(除上述si離子和/或sr離子以外的組分)可為本領(lǐng)域公知的hbmsc培養(yǎng)基，例如hbmsc專用完全培養(yǎng)基。所述hbmsc專用完全培養(yǎng)基可購自商用，例如購自賽業(yè)生物科技有限公司，型號為huxma-03011-440。

所述培養(yǎng)基可以是含有單一si、sr或si-sr組合的離子浸提液。一個實施方式中，以hbmsc專用完全培養(yǎng)基為提取溶劑，制備上述離子浸提液。制備含有單一si的離子浸提液時，可以對casio3粉體進行浸提，由于浸提過程中發(fā)生礦化導致浸提原液中ca離子濃度很低，而hbmsc專用完全培養(yǎng)基中ca離子濃度較高，浸提原液經(jīng)過hbmsc專用完全培養(yǎng)基稀釋后ca離子濃度均與hbmsc專用完全培養(yǎng)基中ca濃度一致，因此即可忽略ca離子的影響。casio3可由ca(no3)2·4h2o(例如購自國藥)和nasio3·9h2o(例如購自國藥)經(jīng)過沉淀法制備，經(jīng)800℃～1500℃煅燒。所得的casio3的純度為99％以上。casio3陶瓷可以是1μm-10mm的顆粒或陶瓷塊體，粒徑優(yōu)選為30μm-150μm，此粒徑范圍內(nèi)的casio3陶瓷易獲得，浸提較方便且浸提原液離子濃度適中便于后期原液稀釋。制備含有單一sr的離子浸提液時，可以對sro粉體(例如購自阿拉丁)進行浸提。sro粉體的純度優(yōu)選為99.7％以上，粒徑優(yōu)選為30μm-150μm，此粒徑范圍內(nèi)的sro粉體易獲得，浸提較方便且浸提原液離子濃度適中便于后期原液稀釋。制備含有si-sr組合的離子浸提液時，可以對srsio3粉體進行浸提，也可以將上述casio3浸提液、sro浸提液、srsio3浸提液中的任意兩種以上混合。srsio3可由sr(no3)2(例如購自國藥)和nasio3·9h2o(例如購自國藥)經(jīng)過沉淀法制備，經(jīng)800℃～1500℃煅燒。所得的srsio3陶瓷的純度為99％以上。srsio3陶瓷可以是1μm-10mm的顆粒或陶瓷塊體，粒徑優(yōu)選為30μm-150μm，此粒徑范圍內(nèi)的srsio3陶瓷易獲得，浸提較方便且浸提原液離子濃度適中便于后期原液稀釋。得到的浸提原液還可以通過hbmsc專用完全培養(yǎng)基進行稀釋以得到所需濃度。

一個示例中，含不同濃度單一si、sr和si-sr組合離子浸提液的制備方法為：按照iso10993-5標準制備粉體浸提液，所用培養(yǎng)基為hbmsc專用培養(yǎng)基，純casio3粉體用于制備含si浸提液，純sro粉體用于制備含sr浸提液，純srsio3粉體用于制備含si-sr浸提液，最后將浸提原液通過hbmsc專用完全培養(yǎng)基梯度配比稀釋。

在不影響本發(fā)明的目的的情況下，所述培養(yǎng)基中還可以含有其它組分。

以下，說明獲得si、sr離子的最優(yōu)作用濃度的步驟以及si、sr離子的濃度對干細胞干性的影響。

在此，通過含si、sr離子浸提液培養(yǎng)細胞的方法，探究了si-sr離子組合促進骨髓間充質(zhì)干細胞增殖的最優(yōu)濃度組合，并發(fā)現(xiàn)si-sr離子組合在此濃度下不僅能促進干細胞快速擴增，還能保持干細胞的干性。該體外擴增干細胞方法簡單易行、低成本、可規(guī)模化獲得大量具有良好干性的骨髓間充質(zhì)干細胞。

一個實施方式中，如圖1所示，獲得si、sr離子的最優(yōu)作用濃度的步驟以及si、sr離子的濃度對干細胞干性的影響包括以下步驟：(1)含不同濃度單一si、sr和si-sr組合離子浸提液的制備；(2)將步驟(1)中獲得的含單一si、sr和si-sr組合的離子浸提液hbmsc專用完全培養(yǎng)基培養(yǎng)hbmsc，并將hbmsc專用完全培養(yǎng)基作為空白對照組，采用cck8法檢測細胞增殖性能，篩選促進人骨髓間充質(zhì)干細胞增殖的最優(yōu)si-sr組合濃度；(3)將步驟(2)中獲得的促進人骨髓間充質(zhì)干細胞增殖的最優(yōu)si-sr組合濃度及其對應的相同濃度的單一si、sr離子浸提液hbmsc專用完全培養(yǎng)基培養(yǎng)人骨髓間充質(zhì)干細胞，并將hbmsc專用完全培養(yǎng)基作為空白對照組，采用sybrgreen熒光實時定量pcr來檢測干細胞干性相關(guān)因子mrna的表達。

(1)、不同濃度si、sr和si-sr組合的浸提液的制備：

通過casio3、sro和srsio3粉體制備含單一si、單一sr和si-sr組合浸提液，以粉體和hbmsc專用培養(yǎng)基質(zhì)量體積比為200mgml^-1添加，密封至于37℃恒溫搖床中浸提24h。然后將浸提原液通過專用完全培養(yǎng)基梯度配比稀釋，獲得具有不同濃度si、sr和si-sr組合的浸提液，并通過電感耦合等離子體發(fā)射光譜儀(icp-oes)測得離子濃度。

(2)、促進人骨髓間充質(zhì)干細胞增殖的最優(yōu)si-sr組合濃度的篩選：

a)將步驟(1)中獲得的含不同si、sr和si-sr組合的hbmsc完全培養(yǎng)基培養(yǎng)人骨髓間充質(zhì)干細胞，并將hbmsc專用完全培養(yǎng)基作為空白對照組。其中，用于培養(yǎng)人骨髓間充質(zhì)干細胞增殖的培養(yǎng)液中單一si濃度范圍為0.162～41.44ppm，單一sr濃度范圍為0.32～40.39ppm，si-sr組合濃度范圍為si(2.59ppm)-sr(0.32～40.39ppm)。

b)以800個細胞/孔的密度將hbmsc接種到96孔細胞培養(yǎng)板中，每個濃度設(shè)置6個平行孔實驗，細胞貼壁24h后，將培養(yǎng)基換成100μl/孔的不同濃度的離子浸提液完全培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)，并隔天換液，到達預設(shè)的時間1、3和7天后，采用cck8法檢測細胞增殖性能。

c)首先篩選出單一si促進人骨髓間充質(zhì)干細胞增殖的最優(yōu)作用濃度，在此基礎(chǔ)上添加不同濃度的sr離子，進一步篩選促進人骨髓間充質(zhì)干細胞增殖的最優(yōu)si-sr組合濃度。篩選出的促進人骨髓間充質(zhì)干細胞增殖的最優(yōu)si-sr組合，si(2.59ppm)-sr(20.20ppm)在此濃度能明顯促進干細胞增殖。

(3)、最優(yōu)si-sr組合濃度對干細胞干性的影響：

a)將步驟(2)中得到的促進人骨髓間充質(zhì)干細胞增殖的最優(yōu)si-sr組合濃度及其對應的相同濃度的單一si、sr離子hbmsc專用完全培養(yǎng)基培養(yǎng)人骨髓間充質(zhì)干細胞，并將hbmsc專用完全培養(yǎng)基作為空白對照組。

b)以2.0*10^5個細胞/孔的密度將第四代hbmsc接種到6孔細胞培養(yǎng)板中，待12h細胞貼壁后，培養(yǎng)基換成2ml/孔含有最優(yōu)si-sr組合濃度及其對應相同濃度的單一si、sr離子的培養(yǎng)基和空白對照組培養(yǎng)基，48h后當細胞達到80％-90％的匯合度，收集部分細胞并以1:2比例傳代。

c)按照以上方法一直傳代到第八代，分別收集第4代、第6代和第8代細胞。

d)采用sybrgreen熒光實時定量pcr來檢測干細胞干性相關(guān)因子的表達。所述的促進人骨髓間充質(zhì)干細胞增殖最優(yōu)si-sr組合，si(2.59ppm)-sr(20.20ppm)在此濃度能在促進干細胞快速擴增過程中協(xié)同保持干細胞干性。

本發(fā)明利用hbmsc完全培養(yǎng)基與si、sr離子組合復配，找到了細胞生長的極佳環(huán)境，最終實現(xiàn)了快速擴增骨髓間充質(zhì)干細胞并保證其干性的目的。經(jīng)過反復實驗驗證，培養(yǎng)效果極佳。具體而言，制備具有不同si，sr濃度的浸提液，在不同si，sr以及si-sr組合濃度下培養(yǎng)hbmsc，檢測細胞增殖以及干性指標。實驗表明，si，sr對促進干細胞增殖存在協(xié)同效應，si-sr組合在適宜濃度能明顯促進干細胞增殖，并保持干細胞干性。

本發(fā)明的有益效果：

(1)制備工藝簡單易行；(2)成本低廉且便于推廣；(3)更高的體外擴增速率；(4)解決了體外培養(yǎng)骨髓間充質(zhì)干細胞易失去多向分化潛能的問題。

綜上所述，應用本發(fā)明方法能夠在體外短期內(nèi)獲得大量保持良好干性的骨髓間充質(zhì)干細胞，可以用于科學研究、臨床治療和組織工程等。

下面通過介紹本發(fā)明的實施例，以進一步闡明本發(fā)明實質(zhì)性特點和顯著的進步。應理解，這些實施例僅用于說明本發(fā)明而不用于限制本發(fā)明的范圍。除非另有定義或說明，本文中所使用的所有專業(yè)與科學用語與本領(lǐng)域技術(shù)熟練人員所熟悉的意義相同。此外任何與所記載內(nèi)容相似或均等的方法及材料皆可應用于本發(fā)明方法中。

以下實施例中，casio3以分析純ca(no3)2·4h2o(購自國藥)和na2sio3·9h2o(購自國藥)為原料，采用化學沉淀法制備casio3粉體。首先將na2sio3·9h2o，ca(no3)2·4h2o分別溶于去離子水中，配制成濃度均為0.5mol·l^-1的水溶液，再將ca(no3)2溶液緩慢滴入強烈攪拌的na2sio3溶液中，直到滴加完畢。繼續(xù)攪拌24小時，將反應所得沉淀過濾，用去離子水及無水乙醇各洗滌3次后置于60℃恒溫干燥箱內(nèi)干燥48小時。最后將所得的前驅(qū)體粉體在900℃煅燒2小時，再經(jīng)過研磨過200目篩，得到純度大于99％，粒徑小于70μm的casio3粉體。srsio3以分析純sr(no3)2(購自國藥)和na2sio3·9h2o(購自國藥)為原料，采用化學沉淀法制備srsio3粉體。首先將na2sio3·9h2o，sr(no3)2分別溶于去離子水中，配制成濃度均為0.5mol·l^-1的水溶液，再將sr(no3)2溶液緩慢滴入強烈攪拌的na2sio3溶液中，直到滴加完畢。繼續(xù)攪拌24小時，將反應所得沉淀過濾，用去離子水及無水乙醇各洗滌3次后置于60℃恒溫干燥箱內(nèi)干燥48小時。最后將所得的前驅(qū)體粉體在900℃煅燒2小時，再經(jīng)過研磨過200目篩，得到純度大于99％，粒徑小于70μm的srsio3粉體。sro購自上海阿拉丁生化科技股份有限公司，型號為1314-11-10，hbmsc專用培養(yǎng)基購自賽業(yè)生物科技有限公司，型號為huxma-03011-440。

實施例1：

單一si對人骨髓間充質(zhì)干細胞增殖的影響：

(1)按照iso10993-5標準制備casio3浸提液。以粉體和hbmsc專用培養(yǎng)基質(zhì)量體積比200mgml^-1將粉體添加到培養(yǎng)基中，密封置于37℃恒溫搖床中浸提24h，4000rpm離心10min，取上清液并經(jīng)過0.22μm濾菌膜過濾后得到200mgml^-1casio3浸提原液。將200mgml^-1的casio3浸提原液用hbmsc專用完全培養(yǎng)基稀釋至1/2、1/4、1/8、1/16、1/32、1/64、1/128以及1/256，置于4℃冰箱待用，并通過電感耦合等離子體發(fā)射光譜儀(icp-oes)測得離子濃度(見表1)；

(2)以800個細胞/孔的密度將hbmsc接種到96孔細胞培養(yǎng)板中，每個濃度設(shè)置6個平行孔實驗，使用hbmsc完全培養(yǎng)基培養(yǎng)的對照組作為空白對照(cont)，casio3浸提液作為實驗組。細胞貼壁24h后，將培養(yǎng)基換成100μl/孔的梯度稀釋的casio3浸提液完全培養(yǎng)基和空白對照組培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)，并隔天換液；

(3)到達預設(shè)時間的1、3和7天后，采用cck8法檢測細胞增殖活性。

表1梯度稀釋單一si浸提液培養(yǎng)基中的si濃度(μgml^-1)

圖2顯示，與空白對照組相比，casio3浸提液完全培養(yǎng)基在適宜si濃度范圍內(nèi)能夠明顯促進hbmsc增殖。稀釋casio3浸提原液至1/16-1/64，對應si濃度為5.18-1.295ppm能促進hbmsc增殖，其中稀釋至1/32，對應si濃度為2.59ppm具有更明顯的促進增殖效果。

實施例2：

si-sr組合以及對應相同濃度單一sr對人骨髓間充質(zhì)干細胞增殖的影響：

(1)按照iso10993-5標準制備casio3、srsio3和sro浸提液。以粉體和hbmsc專用培養(yǎng)基質(zhì)量體積比200mgml^-1將粉體添加到培養(yǎng)基中，密封置于37℃恒溫搖床中浸提24h，4000rpm離心10min，取上清液并經(jīng)過0.22μm濾菌膜過濾后得到200mgml^-1casio3、srsio3和sro浸提原液。通過電感耦合等離子體發(fā)射光譜儀(icp-oes)測得原液離子濃度；

(2)將casio3浸提原液用hbmsc專用完全培養(yǎng)基稀釋至si濃度為2.59ppm。通過casio3浸提原液和srsio3浸提原液混合，用hbmsc專用完全培養(yǎng)基稀釋si濃度為2.59ppm，同時sr濃度分別為40.39ppm、20.20ppm、10.10ppm并依次減半，直至sr濃度為0.32ppm(見表2)。將sro浸提原液用hbmsc專用完全培養(yǎng)基稀釋至sr濃度與si-sr組合中sr濃度分別相同(見表3)，置于4℃冰箱待用；

(3)以800個細胞/孔的密度將hbmsc接種到96孔細胞培養(yǎng)板中，每個濃度設(shè)置6個平行孔實驗，使用hbmsc完全培養(yǎng)基培養(yǎng)的對照組作為空白對照(cont)，單一sr浸提液作為實驗組對照，si-sr組合浸提液作為實驗組，待細胞貼壁24h后，將培養(yǎng)基換成100μl/孔的si-sr組合浸提液、單一sr浸提液完全培養(yǎng)基和空白對照組培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)，并隔天換液；

(4)到達預設(shè)時間的1、3和7天后，采用cck8法檢測細胞增殖活性。

表2梯度稀釋單一sr浸提液培養(yǎng)基中的sr濃度(μgml^-1)

表3不同濃度si-sr組合浸提液培養(yǎng)基中的si、sr濃度(μgml^-1)

圖3顯示，與空白對照組相比，單一sr浸提液完全培養(yǎng)基在sr濃度為0.32-40.39ppm能夠促進hbmsc增殖，si-sr組合固定si濃度為2.59ppm，梯度加不同濃度sr后發(fā)現(xiàn)，si(2.59ppm)-sr(2.52-40.39ppm)均能促進細胞增殖，其促進效果要高于對應單一si和單一sr。其中si(2.59ppm)-sr(20.20ppm)組合能夠更加明顯的促進hbmsc增殖。同時在此濃度單一si促進增殖百分比(11.10％)與單一sr促進增殖百分比(16.89％)疊加后仍小于si-sr組合促進增殖百分比(47.48％)，說明si-sr組合在促進增殖中具有協(xié)同效應。

實施例3：

(1)選取最優(yōu)si(2.59ppm)-sr(20.20ppm)組合浸提液完全培養(yǎng)基為實驗組，單一si(2.59ppm)和單一sr(20.20ppm)浸提液完全培養(yǎng)基為實驗對照組，hbmsc完全培養(yǎng)基為空白對照組；

(2)以2.0*10^5個細胞/孔的密度將第四代hbmsc接種到6孔細胞培養(yǎng)板中，待12h細胞貼壁后，培養(yǎng)基換成2ml/孔含有最優(yōu)si-sr組合濃度及其對應相同濃度的單一si、sr離子的浸提液完全培養(yǎng)基和空白對照組培養(yǎng)基，48h后當細胞達到80％-90％的匯合度，收集部分細胞并以1:2比例傳代；

(3)按照以上方法一直傳代到第八代，分別收集第4代、第6代和第8代細胞；

(4)采用sybrgreen熒光實時定量pcr來檢測干細胞干性相關(guān)因子(nanog、oct4、sox2、tert)的表達。

圖4顯示，與空白對照組相比，單一si(2.59ppm)和單一sr(20.20ppm)浸提液完全培養(yǎng)基能夠刺激hbmsc在增殖過程中維持部分干性，但是si(2.59ppm)-sr(20.20ppm)組合在維持干細胞干性中起到了更加明顯的作用，其維持干性效果要高于對應單一si和單一sr的疊加效果，說明si(2.59ppm)-sr(20.20ppm)組合能夠在協(xié)同刺激干細胞快速擴增過程中，進一步協(xié)同維持干細胞干性。