本發(fā)明涉及生物，更具體的說是涉及一種pt6g00980基因及其蛋白在判定油松種子萌發(fā)活力中的應用。

背景技術(shù)：

1、油松（pinus?tabulaeformis?carr.），松科松屬的一種常綠針葉喬木，是中國特有的樹種，廣泛分布于東北、中原、西北及西南等地區(qū)。油松不僅具有優(yōu)良的水土保持和涵養(yǎng)水源功能，還在改良土壤和防風固沙方面發(fā)揮著重要作用，是荒山綠化、植樹造林和城市綠化中不可或缺的關(guān)鍵樹種。此外，油松的木材堅硬且耐用，廣泛應用于建筑、橋梁、鐵路等行業(yè)。油松的枝葉、根皮、樹脂等部位也具有較高的藥用價值，常用于中藥材的提取，因此它的綜合經(jīng)濟價值非常可觀，具有重要的生態(tài)和經(jīng)濟意義。

2、然而，由于油松種子的萌發(fā)情況存在較大差異，且受到種子本身休眠程度的影響，常常出現(xiàn)種子萌發(fā)不均或部分種子無法成功發(fā)芽的現(xiàn)象。因此，傳統(tǒng)的油松種子萌發(fā)判定方法依賴于種子萌發(fā)率或生理指標的觀測，但這種方式在實際應用中存在不足，通常只能通過肉眼觀察種子的發(fā)芽情況，且受環(huán)境、氣候等外部因素的影響較大，導致評估結(jié)果的準確性和重復性差。所以傳統(tǒng)方法不僅耗時費力，而且無法高效、準確地評估油松種子的萌發(fā)，無法滿足現(xiàn)代林業(yè)生產(chǎn)和生態(tài)恢復的高效需求。

3、因此，開發(fā)一種高效率高準確率的油松種子萌發(fā)的判定方法是本領(lǐng)域技術(shù)人員亟需解決的問題。

技術(shù)實現(xiàn)思路

1、有鑒于此，本發(fā)明提供了一種pt6g00980基因及其蛋白在判定油松種子萌發(fā)活力中的應用。

2、為了實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案：

3、pt6g00980基因，所述pt6g00980基因的編碼的氨基酸序列如seq?id?no.2所示。

4、優(yōu)選的，所述pt6g00980基因的核苷酸序列如seq?id?no.1所示。

5、本發(fā)明的又一目的是，提供pt6g00980蛋白，所述pt6g00980蛋白的氨基酸序列如seq?id?no.2所示。

6、本發(fā)明的又一目的是，提供擴增上述pt6g00980基因的引物組，所述引物組的核苷酸序列如seq?id?no.3和seq?id?no.4所示。

7、優(yōu)選的，所述引物組的核苷酸序列還包括如5seq?id?no.5和seq?id?no.6所示的內(nèi)參引物。

8、本發(fā)明的又一目的是，提供擴增上述pt6g00980基因的試劑盒，所述試劑盒包括上述的引物組。

9、優(yōu)選的，所述試劑盒還包括抽提總rna所用試劑、和/或以總rna為模板逆轉(zhuǎn)錄為cdna所用試劑、和/或?qū)dna定量pcr所用試劑。

10、本發(fā)明的又一目的是，提供上述pt6g00980基因、或者上述pt6g00980蛋白、或者上述引物組、或者上述試劑盒在檢測油松種子萌發(fā)活力中的應用。

11、本發(fā)明的又一目的是，提供一種油松種子萌發(fā)活力的判定方法，包括如下步驟：

12、s1：以待測樣本的cdna和參考樣本的cdna為模板，利用上述引物組或者上述試劑盒對模板進行定量pcr擴增，并分別統(tǒng)計待測樣本和參考樣本中pt6g00980基因的表達量；

13、s2:當待測樣本中pt6g00980基因的表達量與參考樣本中pt6g00980基因的表達量無顯著差異時，則判定待測樣本的萌發(fā)活力與參考樣本的萌發(fā)活力相同；

14、當待測樣本中pt6g00980基因的表達量顯著低于參考樣本中pt6g00980基因的表達量時，則判定待測樣本的萌發(fā)活力高于參考樣本的萌發(fā)活力；

15、當待測樣本中pt6g00980基因的表達量顯著高于參考樣本中pt6g00980基因的表達量時，則判定待測樣本的萌發(fā)活力低于參考樣本的萌發(fā)活力；

16、所述參考樣本為37℃熱脅迫15天的油松種子（命名為h15d）、4℃冷層積7天的油松種子（命名為c7d）和萌發(fā)露白時期的油松種子（命名為gw）。

17、優(yōu)選的，所述定量pcr擴增的反應體系以20μl計，包括：10μl的2×?superrealpremix?plus?（sybr?green）、cdna模板1μl、100μm的上游?引物0.8μl、100μm的下游引物0.8μl，無rna酶水補充至20μl；

18、所述定量pcr擴增的反應程序為：95?℃預變性2min，94℃變性5s，60℃退火30s，運行39個循環(huán)。

19、有益效果：

20、本發(fā)明提供了pt6g00980基因和其編碼的pt6g00980蛋白。該基因的表達量與萌發(fā)活力呈負相關(guān)，隨著油松種子的萌發(fā)而逐漸降低。基于上述技術(shù)優(yōu)勢，本發(fā)明提供了一種油松種子萌發(fā)活力的判定方法。通過使用本發(fā)明提供的引物組對待測樣本的cdna和參考樣本的cdna進行定量pcr擴增，并比較待測樣本和參考樣本中pt6g00980基因的表達量，能夠?qū)崿F(xiàn)對待測樣本萌發(fā)活力的準確判定。與傳統(tǒng)的依賴觀察種子萌發(fā)率及生理指標的分辨方法相比，本發(fā)明提供的技術(shù)方案可準確反映出油松種子的萌發(fā)活力，且精度更高，科學性更強，可重復性好。

技術(shù)特征：

1.pt6g00980基因，其特征在于，所述pt6g00980基因的編碼的氨基酸序列如seq?idno.2所示。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的pt6g00980基因，其特征在于，所述pt6g00980基因的核苷酸序列如seq?id?no.1所示。

3.pt6g00980蛋白，其特征在于，所述pt6g00980蛋白的氨基酸序列如seq?id?no.2所示。

4.擴增權(quán)利要求1或2所述pt6g00980基因的引物組，其特征在于，所述引物組的核苷酸序列如seq?id?no.3和seq?id?no.4所示。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的引物組，其特征在于，所述引物組的核苷酸序列還包括如5seqid?no.5和seq?id?no.6所示的內(nèi)參引物。

6.擴增權(quán)利要求1或2所述pt6g00980基因的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒包括權(quán)利要求4或5所述的引物組。

7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒還包括抽提總rna所用試劑、和/或以總rna為模板逆轉(zhuǎn)錄為cdna所用試劑、和/或?qū)dna定量pcr所用試劑。

8.權(quán)利要求1或2所述pt6g00980基因、或者權(quán)利要求3所述pt6g00980蛋白、或者權(quán)利要求4或5所述引物組、或者權(quán)利要求6或7所述試劑盒在檢測油松種子萌發(fā)活力中的應用。

9.一種油松種子萌發(fā)活力的判定方法，其特征在于，包括如下步驟：

10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的判定方法，所述定量pcr擴增的反應體系以20μl計，包括：10μl的2×?superreal?premix?plus?、cdna模板1μl、100μm的上游?引物0.8μl、100μm的下游引物0.8μl，無rna酶水補充至20μl；

技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明公開了一種Pt6G00980基因及其蛋白在判定油松種子萌發(fā)活力中的應用，涉及生物技術(shù)領(lǐng)域。該基因的表達量與萌發(fā)活力呈負相關(guān)，隨著油松種子的萌發(fā)而逐漸降低。本發(fā)明還提供檢測該基因的引物組，通過使用本發(fā)明提供的引物組對待測樣本的cDNA和參考樣本的cDNA進行定量PCR擴增，并比較待測樣本和參考樣本中Pt6G00980基因的表達量，能夠?qū)崿F(xiàn)對待測樣本萌發(fā)活力的準確判定。與傳統(tǒng)的依賴觀察種子萌發(fā)率及生理指標的分辨方法相比，本發(fā)明提供的技術(shù)方案可準確反映出油松種子的萌發(fā)活力，且精度更高，科學性更強，可重復性好。

技術(shù)研發(fā)人員：崔亞寧,王炳賀,耿若涵,左新秀,林金星,鈕世輝,張嚴妍
受保護的技術(shù)使用者：北京林業(yè)大學
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2025/4/24