技術(shù)特征：

1.用于實(shí)時熒光定量pcr的組合物，其特征在于，包括特異性正向引物、特異性反向引物和特異性探針，其中：

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的組合物，其特征在于，所述特異性正向引物與特異性反向引物的摩爾比大于等于3：1。

3.權(quán)利要求1或2所述的組合物的應(yīng)用，其特征在于，所述應(yīng)用為a1)-a4)中的至少一種：

4.一種基于實(shí)時熒光定量pcr進(jìn)行病原體檢測的方法，其特征在于，包括：

5.用于檢測人乳頭瘤病毒的組合物，其特征在于，包括用于檢測hpv?58型的第一組合物、用于檢測hpv?56型的第二組合物、用于檢測hpv?52型的第三組合物、用于檢測hpv?59型的第四組合物、用于檢測hpv?39型的第五組合物、用于檢測hpv?68型的第六組合物、用于檢測hpv?16型的第七組合物、用于檢測hpv?33型的第八組合物、用于檢測hpv?31型的第九組合物、用于檢測hpv?45型的第十組合物、用于檢測hpv?18型的第十一組合物、用于檢測hpv66型的第十二組合物、用于檢測hpv?35型的第十三組合物和用于檢測hpv?51型的第十四組合物中的至少一種；

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的組合物，其特征在于，所述組合物還包括用于檢測內(nèi)參基因的第十五組合物，所述第十五組合物包括用于檢測內(nèi)參基因的第十五正向引物、第十五反向引物和所述第一探針；

7.根據(jù)權(quán)利要求5或6所述的組合物，其特征在于，所述阻斷基團(tuán)為c3?spacer、c6spacer、c9?spacer、c12?spacer中的至少一種。

8.根據(jù)權(quán)利要求5或6所述的組合物，其特征在于，所述第一熒光基團(tuán)、第二熒光基團(tuán)、第三熒光基團(tuán)、第四熒光基團(tuán)獨(dú)立地選自fam、joe、tamra、rox、cy3、cy5、vic、hex中的一種，且所述第一熒光基團(tuán)、第二熒光基團(tuán)、第三熒光基團(tuán)、第四熒光基團(tuán)中的任意兩個均不相同；

9.用于檢測人乳頭瘤病毒的試劑盒，其特征在于，包括權(quán)利要求5-8任一項(xiàng)所述的組合物。

10.一種基于實(shí)時熒光定量pcr進(jìn)行人乳頭瘤病毒檢測的方法，其特征在于，包括：

技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明提供一種用于實(shí)時熒光定量PCR的組合物及其應(yīng)用，屬于核酸或微生物的測定或檢驗(yàn)領(lǐng)域。本發(fā)明提供的用于實(shí)時熒光定量PCR的組合物，包括特異性正向引物、特異性反向引物和特異性探針，其中，特異性正向引物和特異性反向引物用于擴(kuò)增靶DNA，特異性反向引物3’端起第i個核苷酸和第（i+1）個核苷酸之間添加阻斷基團(tuán)，4≤i≤8；特異性探針的兩端分別標(biāo)記有熒光基團(tuán)和第二淬滅基團(tuán)，中間標(biāo)記有第一淬滅基團(tuán)，且所述特異性探針的部分序列與所述反向引物的部分序列相同。基于上述組合物進(jìn)行實(shí)時熒光定量PCR，結(jié)合特異性探針?biāo)鶖y帶的熒光基團(tuán)類型與各靶標(biāo)PCR產(chǎn)物的不同熔解溫度，實(shí)現(xiàn)多重靶標(biāo)檢測。

技術(shù)研發(fā)人員：肖冰冰,趙雨航,陳超,唐羚容
受保護(hù)的技術(shù)使用者：北京大學(xué)第一醫(yī)院（北京大學(xué)第一臨床醫(yī)學(xué)院）
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2025/4/24