專利名稱：利用CdTe量子點和AuNPs之間熒光內濾效應檢測牛奶中三聚氰胺的制作方法
技術領域：
基于巰基乙酸(TGA)修飾的CdTe量子點和檸檬酸配體包覆的金納米粒子(AuNPs) 之間的熒光內濾效應(IFE)而建立的牛奶中三聚氰胺的檢測方法，屬于分析化學技術領域。
背景技術：
三聚氰胺(melamine)的化學名稱為2，4，6_三氨基-I，3，5_三嗪，其結構式如下它是一種重要的氮雜環有機化工原料，可以用來生產三聚氰胺甲醛樹脂。由于它含氮量高達66%，而食品檢測中通常所采用的凱氏定氮法無法對氮元素的來源進行識別，因此它經常被人為地添加到食品和動物飼料中以提高蛋白質含量。三聚氰胺的急性口服毒性不強，但三聚氰胺和其共存物三聚氰酸可以在腎臟內形成不溶性結晶。長期攝入高濃度的三聚氰胺能導致腎衰竭甚至死亡，尤其對兒童和青少年危害甚大。2008年9月，甘肅、江蘇等多個省市集中出現嬰兒結石事件，隨后調查發現患兒多有食用三鹿牌嬰幼兒配方奶粉的歷史，經相關部門調查，發現該公司生產的三鹿牌嬰幼兒配方奶粉存在嚴重質量問題，隨后三鹿集團發出召回，聲稱奶粉受到三聚氰胺的污染，并決定立即召回2008年8月6日以前生產的三鹿牌嬰幼兒奶粉。而后，一些國內生產的其他品牌奶粉和部分有奶粉成分的食品中也陸續檢出了三聚氰胺，導致中國乳制品行業的誠信危機，也給人們的日常生活帶來巨大的負面影響。目前，檢測三聚氰胺的方法主要有高效液相色譜法、液相色譜串聯質譜法、氣相色譜串聯質譜法、酶聯免疫吸附法(ELISA)和毛細管電泳法等。這些方法具有較高的靈敏度和較好的準確性，但其前處理步驟復雜、耗時，且需要昂貴的設備以及專業的操作技能，因此其廣泛應用受到了限制。近年來，電化學方法、表面增強拉曼光譜(SERS)、紅外光譜，基于聚乙二炔脂質體的比色傳感器等其他方法也被陸續用于檢測三聚氰胺，但這些方法也受限于復雜的化學合成、高成本或低靈敏度等。因此急需開發一種快速、簡便、靈敏、低成本的檢測方法用于檢測三聚氰胺。我國政府規定三聚氰胺在嬰幼兒奶粉和其它日常食品中的最大允許殘留量分別為 I. O 和 2. 5mg/kg
發明內容
本發明的目的是提供一種基于TGA修飾的CdTe量子點和檸檬酸配體包覆的AuNPs 之間的IFE而建立的方法，用于快速、簡單、靈敏地檢測牛奶中三聚氰胺的含量。技術問題基于TGA修飾的CdTe量子點和檸檬酸配體包覆的AuNPs之間的IFE而建立的牛奶中三聚氰胺的檢測方法，其特點在于AuNPs可以引起CdTe量子點的熒光猝滅， 而三聚氰胺可誘導AuNPs聚集，使CdTe量子點的熒光強度得到恢復，進而可通過觀察體系熒光強度的變化來檢測牛奶中的三聚氰胺。本發明的技術方案包括以下步驟=AuNPs的制備JGA-CdTe量子點的合成與純化；AuNPs和CdTe量子點的光譜表征；AuNPs透射電鏡表征；不同濃度AuNPs對CdTe量子點熒光強度的影響； AuNPs濃度的優化；檢測方法的建立；不同干擾物質對體系的干擾實驗；檢測牛奶中的三聚氰胺。(I)AuNPs 的制備實驗中所用的玻璃器皿都用王水浸泡24h，二次蒸餾水清洗，烘干備用，配制試劑所用蒸懼水需通過O. 45 μ m的濾膜過濾；制備時，向三口燒瓶中加入lmmol/L的氯金酸 50mL，在攪拌的情況下加熱使其沸騰，快速加入38. 8mmol/L的檸檬酸三鈉5mL，邊加熱邊攪拌，溶液由淡黃色變成酒紅色，反應持續lOmin，停止加熱，繼續攪拌lOmin，溶液冷卻至室溫后，用O. 45 μ m的微孔膜過濾，4°C保藏，所制得的AuNPs粒徑為13nm ;將制得的AuNPs用純凈水按體積比I : I稀釋待用，稀釋后的濃度為4. 7X 10_7mol/L。(2) TGA-CdTe量子點的合成與純化首先稱量O. 0256gTe粉和O. 0386gNaBH4加入到三口燒瓶中，用高純水配制pH=ll 的NaOH溶液IOOmL,向其中通入IOminN2，裝于一恒壓滴定漏斗①中，用高純水配制濃度為 4X l(T3mol/L 的 CdCl2 溶液 IOOmL,加入 67 μ LTGA,用 lmol/L 的 NaOH 溶液調節 pH =11， 向其中通入IOminN2，將得到的澄清透明溶液裝于另一恒壓滴定漏斗②中，將整個裝置與真空、N2系統連接起來，經歷幾次抽真空和通N2的步驟除去體系中的O2 ;略微加熱，打開漏斗 ①，加入3 5滴水，電磁攪拌，引發反應，待Te粉基本反應完全后(溶液為紅色并且黑色粉末消失)，將①中的水全部加入，得到透明淺紅色溶液，再將②中溶液全部加入，整個過程都進行N2保護；溶液全部加入后繼續攪拌lOmin，撤去N2保護，將得到的混合溶液用50%的微波功率輸出加熱進行晶體生長反應；得到的產物加入等體積的異丙醇洗滌，并離心除去過量前體，最后將其再分散在200mL的純凈水中；將制得的CdTe量子點用純凈水按體積比 I 9稀釋待用，稀釋后的濃度為3.60X10_6mol/L。(3) AuNPs和CdTe量子點的光譜表征采用UV-2550紫外.可見分光光度計(日本島津公司)分別測量AuNPs和CdTe 量子點的紫外可見吸收光譜；采用RF-5301熒光光度計(日本島津公司)測量激發波長為 450nm時的熒光光譜。(4) AuNPs透射電鏡表征將AuNPs和AuNPs-三聚氰胺分別滴于鍍有碳膜的銅網上，室溫晾干后，用TEcNAI F20透射電鏡觀察其尺寸和形貌，加速電壓為200kV。(5)不同濃度AuNPs對cdTe量子點熒光強度的影響在9個試管(5. OmL)中先依次加入不同量的AuNPs (a，O μ L ;b，100 μ L ;c，200 μ L ;d，300 μ L ；θ,400μ L ；f,500y L ；g,600y L ；h,700y L ;i，800 μ L)，再分別加入純凈水定容至2mL，使混合物在25°C下反應lOmin，最后加入3. 6 X 10_6mol/L的CdTe量子點lmL，測量其熒光光譜。(6) AuNPs濃度的優化取33個試管(5. OmL)分成3組，每組11個；向3組試管中分別加入500 μ L、 800yL,960uL AuNPs，再依次向各組①-O號試管中加入不同濃度的三聚氰胺，使其分另Ij 達到一定的最終濃度(a, O μ g/L ；b, 10 μ g/L ；c, 20 μ g/L ；d, 30 μ g/L ；e,40 μ g/L ；f, 50 μ g/L ；g, 60 μ g/L ；h, 70 μ g/L ； ,80μ g/L ；j, 90 μ g/L ;k，100y g/L)，使混合物在 25 °C 下反應lOmin，最后加入CdTe量子點lmL，測量其熒光光譜。(7)檢測方法的建立在11個試管(5. OmL)中先分別加入800 μ L AuNPs,再依次加入不同濃度的三聚氰胺，使其分別達到一定的最終濃度(a, O μ g/L ；b, 10 μ g/L ；c, 20 μ g/L ；d, 30 μ g/L ；e, 40 μ g/L ；f, 50 μ g/L ；g,60y/L ；h, 70 μ g/L ； ,80μ g/L ；j, 90 μ g/L ；k, 100 μ g/L),使混合物在25°C下反應lOmin，最后加入CdTe量子點lmL，測量其熒光光譜。(8)不同干擾物質對體系的干擾實驗分別將不同的干擾物質加入到含有50 μ g/L的三聚氰胺的AuNPs-CdTe體系中，按權利要求8所述檢測方法，測量熒光光譜各干擾物質的濃度分別為維生素B1 (O. 44g -L-1)， 葡萄糖(30g · L-1)，蘇氨酸(143g · L-1)，K+(143g · L-1)，Na+(43g · L-1)，Cr(141g · L-1)， N<V(150g · I71),色氨酸(7-5g · I71)，甘氨酸(7. 5g · I71)，賴氨酸(14g · I71)，組氨酸(7. 5g · L—1)，維生素 C(lg · L—1)，Mg2+(lg · L—1)，Ca2+(5. 65g · L—1)，乳糖(25g · L—1)， PO43IlOg · L-1)。(9)檢測牛奶中的三聚氰胺將不同濃度的三聚氰胺加入到牛奶中，使其中的三聚氰胺分別達到一定的最終濃度(a, Omg/L ；b, O. lmg/L ；c, 0. 2mg/L ；d, 0. 3mg/L ；e, 0. 4mg/L ；f, 0. 5mg/L ；g, 0. 6mg/L ；h,
0.7mg/L ；i,0. 8mg/L ； j,0. 9mg/L ；k, I. Omg/L ；1,1. lmg/L);然后在 IOmL 的離心管中，向 2mL 的上述不同牛奶中分別加入2mL的水、ImL的氯乙酸和ImL的氯仿,鏇潤震蕩Imin,將蛋白質沉淀，并溶解基質中的有機物，然后超聲處理15min，12000rmp離心IOmin分離沉淀；將 2mL的上清液轉移到另一個離心管中，使用IM的Na2CO3調整pH為8. 0，溶液在IOOOOrmp再次離心IOmin除去沉淀；上清液用O. 45 μ m GTTP (聚碳酸酯濾膜)過濾，各取300 μ L最終溶液，按權利要求8所述檢測方法，加入到檢測體系中,測量各自的熒光光譜。本發明的有益效果本發明制備了一種檸檬酸配體包覆的AuNPs和一種TGA修飾的CdTe量子點，并建立了一種可快速、簡便、靈敏、低成本地檢測牛奶中三聚氰胺的方法， 為今后乳品行業的監管提供了方便。


圖la =AuNPs的紫外可見吸收光譜；b =TGA-CdTe量子點的熒光光譜；c =TGA-CdTe 量子點的紫外可見吸收光譜。圖2透射電鏡照片(A)AuNPs ； (B)AuNPs-三聚氰胺；A中插圖為標尺為20nm時的 AuNPs0圖3不同濃度AuNPs存在下CdTe量子點的熒光光譜。a_i中AuNPs濃度分別為0、0. 16、
0.32,0. 48,0. 6,0. 72,0. 88,1. 0,1. 25Xl(T7mol/L ；CdTe 量子點:1. 2Xl(T7mol/L。圖4CdTe量子點在含有不同濃度的AuNPs-三聚氰胺體系中的熒光響應值。 AuNPs · 0. 8X l(T7mol/L ■ :I. 25X l(T7mol/L ▲ :I. 5X l(T7mol/LCdTe I. 2X l(T7mol/L圖5不同濃度三聚氰胺對AuNPs-CdTe體系熒光強度的影響。a_k中三聚氰胺濃度分別為0、10、20、30、40、50、60、70、80、90、10(^8/1 ；AuNPs :1. 25Xl(T7mol/L ;CdTe 量子點
1.2Xl(T7mol/L。圖6(A)不同干擾物質存在時體系的熒光光譜；(B)不同干擾物質對體系的影響。 干擾物質維生素 B1 (O. 44g · L—1)，葡萄糖(30g · L—1)，蘇氨酸(143g · L-1)，K+(143g · L-1)， Na+ (43g · L—1)，Cl— (141g · L—1)，N03_ (150g · L—1)，色氨酸(7. 5g · L—1)，甘氨酸(7. 5g · L—1)，賴氨酸(14g · I71),組氨酸(7. 5g · I71),維生素 C(lg · I71)，Mg2+(lg · I71)，Ca2+ (5. 65g · I71)， 乳糖(25g · Γ1)，PO43IlOg · Γ1)。三聚氰胺50 μ g/L ；AuNPs :1. 25Xl(T7mol/ ；CdTe 量子點1. 2Xl(T7mol/L。圖7實際樣品檢測的標準曲線。a-Ι中三聚氰胺濃度分別為0、0. 1,0. 2,0. 3,0. 4、 O. 5,0. 6,0. 7,0. 8,0. 9、I. O、I. lmg/L ；AuNPs :1. 25Xl(T7mol/ ；CdTe 量子點:1. 2Xl(T7mol/ L。圖8加標回收實驗。
具體實施例方式AuNPs 的制備材料/試劑購自北京化工廠的氯金酸和檸檬酸三鈉。方法實驗中所用的玻璃器皿都用王水浸泡24h，二次蒸餾水清洗，烘干備用，配制試劑所用蒸懼水需通過O. 45 μ m的濾膜過濾；制備時，向三口燒瓶中加入lmmol/L的氯金酸50mL，在攪拌的情況下加熱使其沸騰，快速加入38. 8mmol/L的檸檬酸三鈉5mL，邊加熱邊攪拌，溶液由淡黃色變成酒紅色，反應持續lOmin，停止加熱，繼續攪拌lOmin，溶液冷卻至室溫后，用O. 45 μ m的微孔膜過濾，4°C保藏，所制得的AuNPs粒徑為13nm ;將制得的AuNPs 用純凈水按體積比I : I稀釋待用，稀釋后的濃度為4. 7X 10_7mol/L。結果經透射電鏡表征，所制得的金納米粒子粒徑為13nm，且分散性良好，粒徑均勻。TGA-CdTe量子點的合成與純化材料/試劑購自國藥集團化學試劑有限公司的Te粉、NaBH4、TGA、CdCl2 ;購自北京化工廠的NaOH。方法首先稱量O. 0256gTe粉和O. 0386gNaBH4加入到三口燒瓶中，用高純水配制 PH=Il的NaOH溶液IOOmL,向其中通入IOminN2，裝于一恒壓滴定漏斗①中，用高純水配制濃度為 4X l(T3mol/L 的 CdCl2 溶液 IOOmL,加入 67 μ LTGA，用 lmol/L 的 NaOH 溶液調節 pH=ll， 向其中通入IOminN2，將得到的澄清透明溶液裝于另一恒壓滴定漏斗②中，將整個裝置與真空、N2系統連接起來，經歷幾次抽真空和通N2的步驟除去體系中的O2 ;略微加熱，打開漏斗 ①，加入3 5滴水，電磁攪拌，引發反應，待Te粉基本反應完全后(溶液為紅色并且黑色粉末消失)，將①中的水全部加入，得到透明淺紅色溶液，再將②中溶液全部加入，整個過程都進行N2保護；溶液全部加入后繼續攪拌lOmin，撤去N2保護，將得到的混合溶液用50%的微波功率輸出加熱進行晶體生長反應；得到的產物加入等體積的異丙醇洗滌，并離心除去過量前體，最后將其再分散在200mL的純凈水中；將制得的CdTe量子點用純凈水按體積比 I . 9稀釋待用。結果所制得的TGA-CdTe量子點粒徑為2. 6nm,濃度為3. 60 X 10_6mOl/L，且分散性良好，粒徑均勻。研究不同濃度AuNPs對CdTe量子點的熒光光譜的影響材料/試劑13nm的金納米粒子；CdTe量子點。方法在9個試管(5. OmL)中先依次加入不同量的AuNPs (a，O μ L ;b，100 μ L ;c， 200 μ L ；d,300y L ；e,400y L ；f,500y L ；g,600y L ；h,700y L ； ,800μ L)，再分別加入純凈水定容至2mL，使混合物在25 V下反應lOmin，最后加入3. 6 X 10_6mol/L的CdTe量子點 lmL，測量其熒光光譜。結果不同濃度的AuNPs可使CdTe量子點的熒光發生不同程度的猝滅。AuNJPs濃度的優化材料/試劑13nm的金納米粒子；CdTe量子點；三聚氰胺溶液。方法取33個試管(5. OmL)分成3組，每組11個；向3組試管中分別加入500 μ L、 800 μ L、960 μ LAuNPs,再依次向各組①-Θ號試管中加入不同濃度的三聚氰胺，使其分另Ij 達到一定的最終濃度(a, O μ g/L ；b, 10 μ g/L ；c, 20 μ g/L ；d, 30 μ g/L ；e,40 μ g/L ；f, 50 μ g/L ；g, 60 μ g/L ；h, 70 μ g/L ； ,80μ g/L ；j, 90 μ g/L ;k，100y g/L)，使混合物在 25 °C 下反應lOmin，最后加入CdTe量子點lmL，測量其熒光光譜。結果結果表明，最適AuNPs的濃度為I. 25 X l(T7mol/L。反應時間的優化材料/試劑13nm的金納米粒子；三聚氰胺溶液。方法將lmg/L三聚氰胺加入到I. 25 X 10^7mol/L的AuNPs溶液中，每隔30s掃描其吸收光譜。結果結果表明，最佳反應時間為lOmin。pH的優化材料/試劑13nm的金納米粒子；CdTe量子點；三聚氰胺溶液。方法在8個試管(5. OmL)中依次加入AuNPs、三聚氰胺和量子點，最終濃度分別為 I. 25Xl(T7mol/L、50y g/L、l. 2Xl(T6mol/L。用 O. lmol/L 的 HCl 或 NaOH 調節 pH 從 4 到 11，測量其熒光光譜。結果結果表明，最佳pH為8。檢測方法的建立材料/試劑13nm的金納米粒子；CdTe量子點；三聚氰胺溶液。方法在11個試管(5. OmL)中先分別加入800 μ L AuNPs,再依次加入不同濃度的三聚氰胺，使其分別達到一定的最終濃度(a, O μ g/L ；b, 10 μ g/L ；c, 20 μ g/L ；d, 30 μ g/L ； e,40 μ g/L ；f,50 μ g/L ；g,60 μ g/L ；h,70 μ g/L ；i,80 μ g/L ；j,90 μ g/L ；k, 100 μ g/L)，使混合物在25°C下反應lOmin，最后加入CdTe量子點lmL，測量其熒光光譜。結果不同濃度的三聚氰胺可使AuNPs-CdTe體系的熒光發生不同程度的恢復，該方法可用于三聚氰胺的定量檢測。不同干擾物質對體系的干擾實驗材料/試劑13nm的金納米粒子；CdTe量子點；三聚氰胺溶液。方法分別將不同的干擾物質加入到含有50 μ g/L的三聚氰胺的AuNPs-CdTe 體系中，按權利要求8所述檢測方法，測量熒光光譜；各干擾物質的濃度分別為維生素 B1 (O. 44g · L-1)，葡萄糖(30g · L-1)，蘇氨酸(143g · L-1)，K. (143g · L-1)，Na+ (43g · L-1)， Cr(141g .L-1)，N03_(150g 噸―1)，色氨酸(7. 5g 噸―1)，甘氨酸(7. 5g H，賴氨酸(14g .L-1)， 組氨酸(J. 5g · I71),維生素 C(lg · I71), Mg2+(lg · I71), Ca2+(5. 65g · I71),乳糖(25g · I71), PO43IlOg · L-1)。結果牛奶中可能存在的干擾物質對該檢測方法無影響。對牛奶實際樣品進行檢測。材料/試劑13nm的金納米粒子；CdTe量子點；三聚氰胺溶液；購自北京化工廠的氯乙酸、氯仿；本地市場上購買的牛奶。方法在IOmL的離心管中，向2mL的牛奶中分別加入2mL的水，ImL的氯乙酸和 ImL的氯仿,鏇潤震蕩Imin,將蛋白質沉淀,并溶解基質中的有機物,然后超聲處理15min, 12000rmp離心IOmin分離沉淀；將2mL的上清液轉移到另一個離心管中，使用IM的Na2CO3 調整pH為8. 0，溶液在IOOOOrmp再次離心IOmin除去沉淀；上清液用O. 45 μ m GTTP聚碳酸酯濾膜過濾獲得最終溶液，用于權利要求6中所述檢測方法；當將一定量的三聚氰胺加入到牛奶中時，也與前述過程采取相同的預處理和分析步驟。結果本發明中，三聚氰胺的檢出限為O. 02mg/L，線性范圍為O. I I. lmg/L，加標回收率為(103 104) % ο
權利要求
1.基于巰基乙酸(TGA)修飾的CdTe量子點和檸檬酸配體包覆的金納米粒子(AuNPs) 之間的熒光內濾效應(IFE)而建立的牛奶中三聚氰胺的檢測方法，其特點在于AuNPs可以引起CdTe量子點的熒光猝滅，而三聚氰胺可誘導AuNPs聚集，使CdTe量子點的熒光強度得到恢復，進而可利用以上原理檢測牛奶中的三聚氰胺，包括以下步驟=AuNPs的制備； TGA-CdTe量子點的合成與純化；AuNPs和CdTe量子點的光譜表征；AuNPs透射電鏡表征； 不同濃度AuNPs對CdTe量子點熒光強度的影響；AuNPs濃度的優化；不同濃度三聚氰胺對 AuNPs-CdTe體系熒光強度的影響；不同干擾物質對體系的干擾實驗；檢測牛奶中的三聚氰胺。
2.如權利要求I所述的方法，其中所述AuNPs的制備步驟如下實驗中所用的玻璃器皿都用王水浸泡24h，二次蒸餾水清洗，烘干備用，配制試劑所用蒸懼水需通過O. 45 μ m的濾膜過濾；制備時，向三口燒瓶中加入lmmol/L的氯金酸50mL,在攪拌的情況下加熱使其沸騰，快速加入38. 8mmol/L的朽1檬酸三鈉5mL,邊加熱邊攪拌,溶液由淡黃色變成酒紅色，反應持續lOmin，停止加熱，繼續攪拌lOmin，溶液冷卻至室溫后，用 O. 45 μ m的微孔膜過濾，4°C保藏，所制得的AuNPs粒徑為13nm ;將制得的AuNPs用純凈水按體積比I : I稀釋待用，稀釋后的濃度為4. 7X 10_7mol/L。
3.如權利要求I所述的方法，其中所述TGA-CdTe量子點的合成與純化步驟如下首先稱量O. 0256g Te粉和O. 0386gNaBH4加入到三口燒瓶中，用高純水配制pH = 11 的NaOH溶液IOOmL,向其中通入IOmin N2，裝于一恒壓滴定漏斗①中，用高純水配制濃度為 4X l(T3mol/L 的 CdCl2 溶液 IOOmL,加入 67 μ L TGA,用 lmol/L 的 NaOH 溶液調節 pH = 11， 向其中通入IOmin N2，將得到的澄清透明溶液裝于另一恒壓滴定漏斗②中，將整個裝置與真空、N2系統連接起來，經歷幾次抽真空和通N2的步驟除去體系中的O2 ;略微加熱，打開漏斗①，加入3 5滴水，電磁攪拌，引發反應，待Te粉基本反應完全后(溶液為紅色并且黑色粉末消失)，將①中的水全部加入，得到透明淺紅色溶液，再將②中溶液全部加入，整個過程都進行N2保護；溶液全部加入后繼續攪拌lOmin，撤去N2保護，將得到的混合溶液用50% 的微波功率輸出加熱進行晶體生長反應；得到的產物加入等體積的異丙醇洗滌，并離心除去過量前體，最后將其再分散在200mL的純凈水中；將制得的CdTe量子點用純凈水按體積比I : 9稀釋待用，稀釋后的濃度為3. 60X10_6mol/L。
4.如權利要求I所述的方法，其中所述AuNPs和CdTe量子點的光譜表征步驟如下采用UV-2550紫外-可見分光光度計(日本島津公司)分別測量AuNPs和CdTe量子點的紫外可見吸收光譜；采用RF-5301熒光光度計(日本島津公司)測量激發波長為450nm 時的突光光譜。
5.如權利要求I所述的方法，其中所述AuNPs透射電鏡表征的步驟如下將AuNPs和AuNPs-三聚氰胺分別滴于鍍有碳膜的銅網上，室溫晾干后，用TECNAI F20 透射電鏡觀察其尺寸和形貌，加速電壓為200kV。
6.如權利要求I所述的方法，其中所述觀察不同濃度AuNPs對CdTe量子點熒光強度的影響的步驟如下在9個試管(5. OmL)中先依次加入不同量的AuNPs (a，0 μ L ;b，100 μ L :c，200 μ L ;d， 300 μ L ;e，400 μ L ；f, 500 μ L ;g，600 μ L ；h, 700 μ L ;i，800 μ L)，再分別加入純凈水定容至 2mL，使混合物在25 V下反應lOmin，最后加入3. 6 X 10_6mol/L的CdTe量子點lmL，測量其突光光譜。
7.如權利要求I所述的方法，其中所述AuNPs濃度的優化步驟如下取33個試管(5. OmL)分成3組，每組11個；向3組試管中分別加入500 μ L、800 μ L、 960 μ L AuNPs，再依次向各組①-0號試管中加入不同濃度的三聚氰胺，使其分別達到一定的最終濃度(a, O μ g/L ；b, 10 μ g/L ；c, 20 μ g/L ；d, 30 μ g/L ；e,40 μ g/L ；f, 50 μ g/ L ；g, 60 μ g/L ；h, 70 μ g/L ； ,80μ g/L ；j, 90 μ g/L ;k，100 μ g/L)，使混合物在 25°C 下反應 lOmin，最后加入CdTe量子點lmL，測量其熒光光譜。
8.如權利要求I所述的方法，其中所述檢測方法的建立的步驟如下在11個試管(5. OmL)中先分別加入800 μ L AuNPs，再依次加入不同濃度的三聚氰胺， 使其分別達到一定的最終濃度(a, O μ g/L ；b, 10 μ g/L ；c, 20 μ g/L ；d, 30 μ g/L ；e,40 μ g/ L ；f, 50 μ g/L ；g, 60 μ g/L ；h, 70 μ g/L ； ,80μ g/L ；j, 90 μ g/L ；k, 100 μ g/L),使混合物在 25°C下反應lOmin，最后加入CdTe量子點lmL，測量其熒光光譜。
9.如權利要求I所述的方法，其中所述不同干擾物質對體系的干擾實驗步驟如下分別將不同的干擾物質加入到含有50 μ g/L的三聚氰胺的AuNPs-CdTe體系中，按權利要求8所述檢測方法，測量熒光光譜；各干擾物質的濃度分別為維生素B1 (O. 44g · L-1)， 葡萄糖(30g · L-1)，蘇氨酸(143g · L-1)，K+(143g · L-1)，Na+(43g · L-1)，Cr(141g · L-1)， N<V(150g · I71),色氨酸(7. 5g · I71),甘氨酸(7. 5g · I71),賴氨酸(14g · I71),組氨酸(7. 5g · L—1)，維生素 C(lg · L—1)，Mg2+(lg · L—1)，Ca2+(5. 65g · L—1)，乳糖(25g · L—1)， PO43IlOg · L-1)。
10.如權利要求I所述的方法，其中所述檢測牛奶中的三聚氰胺的步驟如下將不同濃度的三聚氰胺加入到牛奶中，使其中的三聚氰胺分別達到一定的最終濃度(a, Omg/L ；b, O. lmg/L ；c, 0. 2mg/L ；d, 0. 3mg/L ；e, 0. 4mg/L ；f, 0. 5mg/L ；g, 0. 6mg/L ；h, 0. 7mg/L ；i,0. 8mg/L ； j,0. 9mg/L ；k, I. Omg/L ；1,1. lmg/L);然后在 IOmL 的離心管中，向 2mL 的上述不同牛奶中分別加入2mL的水、ImL的氯乙酸和ImL的氯仿,鏇潤震蕩Imin,將蛋白質沉淀，并溶解基質中的有機物，然后超聲處理15min，12000rmp離心IOmin分離沉淀；將 2mL的上清液轉移到另一個離心管中，使用IM的Na2CO3調整pH為8. 0，溶液在IOOOOrmp再次離心IOmin除去沉淀；上清液用O. 45 μ m GTTP (聚碳酸酯濾膜)過濾，各取300 μ L最終溶液，按權利要求8所述檢測方法，加入到檢測體系中,測量各自的熒光光譜。
全文摘要
本發明涉及一種基于巰基乙酸(TGA)修飾的CdTe量子點和檸檬酸配體包覆的金納米粒子(AuNPs)之間的熒光內濾效應(IFE)而建立的牛奶中三聚氰胺的檢測方法，屬于分析化學領域。檢測步驟包括AuNPs的制備；TGA-CdTe量子點的合成與純化；牛奶樣品的前處理；檢測牛奶中的三聚氰胺。本發明根據AuNPs可以引起CdTe量子點的熒光猝滅，而三聚氰胺可誘導AuNPs聚集，使CdTe量子點的熒光強度得到恢復的原理，可簡單、快速、靈敏地檢測牛奶中的三聚氰胺，為以后乳品行業的監管提供了方便。
文檔編號G01N21/64GK102608086SQ20121000811
公開日2012年7月25日 申請日期2012年1月12日 優先權日2012年1月12日
發明者關豐睿, 孫春燕, 平紅, 張民偉, 曹先一, 李宏坤, 郭佳佳 申請人:吉林大學