本發明涉及一種測定古代絲織品方法，更具體的說是涉及一種基于蛋白質組學測定古代絲織品的方法。
背景技術：
絲綢是中國古老文化的象征，絲綢文物是中華民族數千年文明史、科技發展史的珍貴實物見證，解決我國絲綢起源的問題不僅僅是探索華夏文明起源的需要，而且也是為“我國是世界上公認的絲綢起源地”這一說法提供更加信服的證據，目前對絲織品檢測常用的方法如傅里葉紅外光譜，拉曼光譜，X-射線衍射等檢測靈敏度低，受雜質干擾較大，主要適用于保存較好的絲織品分析。如果絲織品受到氧氣，水，微生物等因素影響而發生降解，常用的檢測方法即便能為絲織品殘留物鑒定提供一些有用的信息但也很難對其做出準確的判斷。
技術實現要素：
本發明的目的在于克服現有技術存在的不足，而提供一種快速，直觀，簡便的古代絲織品檢測方法。
為實現上述目的，本發明提供了如下技術方案：一種基于蛋白質組學測定古代絲織品的方法，該方法采用如下步驟：
a)取古代文物樣品A，B，C三組各2～8g，分析前將其用去離子水漂洗，去除表面殘留的雜質后，在50～60℃的烘箱中烘干；
b)分別將古代文物樣品以1:100的浴比在質量分數為0.4～0.6％的Na2CO3水溶液中沸煮20～40min進行脫膠，反復4～6次，然后將三組樣品溶液分別和絲素分離，待絲素用去離子水沖洗絞干后，再在50～80ml質量分數為1％的鹽酸溶液，于室溫下浸放50～70min，用溫水洗至溶液呈中性，在60～80℃的烘箱中烘干；
c)將由步驟b)脫鹽烘干的絲素繼續脫色和脫油蠟質，先在50～70℃溫度下，放入90～110ml的質量分數為60～80％甲醇溶液中浸100～120min,再在50～70℃溫度下，放入90～110ml無水乙醇中浸60～80min，接著在30～50℃溫度下，放入90～110ml的丙酮溶液中浸60～80min,最后絞干浸入90～110ml的乙醚中50～70min，使用吹風機吹干；
d)將由步驟c)得到的絲素在96～98℃下煮50～70min，反復4～6次，在60～80℃的烘箱中烘干；
e)將由步驟d)處理之后的三組絲素樣品分別放入質量分數為68％的硫氰酸鋰溶液中，浴比為1：35，50～60℃下超聲波振蕩溶解2～3h,獲得蠶絲溶液，冷卻過濾之后用截留分子量為8000～14000的透析袋透析，透析開始的11～13h內每隔1～3h左右換一次水，11～13h后每隔3～5h換一次水，23～25h后每隔7～9h換一次水，46～50h后得到絲素蛋白溶液,使用聚乙二醇6000濃縮至原體積的1/3～2/3；
f)向步驟e)得到的三組溶液分別加入質量分數為1.5～2％的二硫蘇糖醇溶液2～3ml和質量分數為2.2～2.8％的碘乙酰胺溶液4～5ml平衡緩沖液平衡，然后分別向三組溶液中加入50～80ul的胰凝乳蛋白酶溶液酶解，采用LC-ESI-MS/MS對其進行質譜分析，將通過質譜分析得到的A,B,C三組樣品的氨基酸序列與氨基酸序列數據庫對比，具有柞蠶絲素蛋白的特征序列的古代文物樣品C來源于柞蠶絲。
一種基于蛋白質組學測定古代絲織品的方法，該方法采用如下步驟：
a)取古代文物樣品A，B，C三組各5g，分析前將其用去離子水漂洗，去除表面殘留的雜質后，在55℃的烘箱中烘干；
b)分別將古代文物樣品以1:100的浴比在質量分數為0.5％的Na2CO3水溶液中沸煮30min進行脫膠，反復5次，然后將三組樣品溶液分別和絲素分離，待絲素用去離子水沖洗絞干后，再在65ml質量分數為1％的鹽酸溶液，于室溫下浸放60min，用溫水洗至溶液呈中性，在70℃的烘箱中烘干；
c)將由步驟b)脫鹽烘干的絲素繼續脫色和脫油蠟質，先在60℃溫度下，放入100ml的質量分數為70％甲醇溶液中浸110min,再在60℃溫度下，放入100ml無水乙醇中浸70min，接著在40℃溫度下，放入100ml的丙酮溶液中浸70min,最后絞干浸入100ml的乙醚中60min，使用吹風機吹干；
d)將由步驟c)得到的絲素在97℃下煮60min，反復5次，在70℃的烘箱中烘干；
e)將由步驟d)處理之后的三組絲素樣品分別放入質量分數為68％的硫氰酸鋰溶液中，浴比為1：35，55℃下超聲波振蕩溶解2.5h,獲得蠶絲溶液，冷卻過濾之后用截留分子量為11000的透析袋透析，透析開始的12h內每隔2h左右換一次水，12h后每隔4h換一次水，24h后每隔8h換一次水，48h后得到絲素蛋白溶液,使用聚乙二醇6000濃縮至原體積的1/2；
f)向步驟e)得到的三組溶液分別加入質量分數為1.7％的二硫蘇糖醇溶液2.5ml和質量分數為2.5％的碘乙酰胺溶液4.5ml平衡緩沖液平衡，然后分別向三組溶液中加入65ul的胰凝乳蛋白酶溶液酶解，采用LC-ESI-MS/MS對其進行質譜分析，將通過質譜分析得到的A,B,C三組樣品的氨基酸序列與氨基酸序列數據庫對比，具有柞蠶絲素蛋白的特征序列的古代文物樣品C來源于柞蠶絲。
本發明的有益效果是：1)采用蛋白質組學方法測定古代絲織品，克服了傳統檢測方法靈敏度低的問題，根據從絲織品中提取出的蛋白質氨基酸序列與數據庫的氨基酸序列比對，可以準確的得到絲織品的蛋白質種類；2)采用蛋白質組學方法測定古代絲織品，即便被測定絲織品受到環境影響材料結構發生了變化也可以被測出絲織品的材料來源；3)采用蛋白質組學測定古代絲織品，操作簡便，準確度高，樣品使用量少。
具體實施方式
以下結合具體實施例對本發明作詳細介紹：
一種基于蛋白質組學測定古代絲織品的方法，該方法采用如下步驟：
a)取古代文物樣品A，B，C三組各2～8g，分析前將其用去離子水漂洗，去除表面殘留的雜質后，在50～60℃的烘箱中烘干；
b)分別將古代文物樣品以1:100的浴比在質量分數為0.4～0.6％的Na2CO3水溶液中沸煮20～40min進行脫膠，反復4～6次，然后將三組樣品溶液分別和絲素分離，待絲素用去離子水沖洗絞干后，再在50～80ml質量分數為1％的鹽酸溶液，于室溫下浸放50～70min，用溫水洗至溶液呈中性，在60～80℃的烘箱中烘干；
c)將由步驟b)脫鹽烘干的絲素繼續脫色和脫油蠟質，先在50～70℃溫度下，放入90～110ml的質量分數為60～80％甲醇溶液中浸100～120min,再在50～70℃溫度下，放入90～110ml無水乙醇中浸60～80min，接著在30～50℃溫度下，放入90～110ml的丙酮溶液中浸60～80min,最后絞干浸入90～110ml的乙醚中50～70min，使用吹風機吹干；
d)將由步驟c)得到的絲素在96～98℃下煮50～70min，反復4～6次，在60～80℃的烘箱中烘干；
e)將由步驟d)處理之后的三組絲素樣品分別放入質量分數為68％的硫氰酸鋰溶液中，浴比為1：35，50～60℃下超聲波振蕩溶解2～3h,獲得蠶絲溶液，冷卻過濾之后用截留分子量為8000～14000的透析袋透析，透析開始的11～13h內每隔1～3h左右換一次水，11～13h后每隔3～5h換一次水，23～25h后每隔7～9h換一次水，46～50h后得到絲素蛋白溶液,使用聚乙二醇6000濃縮至原體積的1/3～2/3；
f)向步驟e)得到的三組溶液分別加入質量分數為1.5～2％的二硫蘇糖醇溶液2～3ml和質量分數為2.2～2.8％的碘乙酰胺溶液4～5ml平衡緩沖液平衡，然后分別向三組溶液中加入50～80ul的胰凝乳蛋白酶溶液酶解，采用LC-ESI-MS/MS對其進行質譜分析，將通過質譜分析得到的A,B,C三組樣品的氨基酸序列與氨基酸序列數據庫(見附件1)對比，具有柞蠶絲素蛋白的特征序列的古代文物樣品C來源于柞蠶絲。
實施例1：一種基于蛋白質組學測定古代絲織品的方法，該方法采用如下步驟：
a)取古代文物樣品A，B，C三組各2g，分析前將其用去離子水漂洗，去除表面殘留的雜質后，在50℃的烘箱中烘干；
b)分別將古代文物樣品以1:100的浴比在質量分數為0.4％的Na2CO3水溶液中沸煮20min進行脫膠，反復4次，然后將三組樣品溶液分別和絲素分離，待絲素用去離子水沖洗絞干后，再在50ml質量分數為1％的鹽酸溶液，于室溫下浸放50min，用溫水洗至溶液呈中性，在60℃的烘箱中烘干；
c)將由步驟b)脫鹽烘干的絲素繼續脫色和脫油蠟質，先在50℃溫度下，放入90ml的質量分數為60％甲醇溶液中浸100min,再在50℃溫度下，放入90ml無水乙醇中浸60min，接著在30℃溫度下，放入90ml的丙酮溶液中浸60min,最后絞干浸入90ml的乙醚中50min，使用吹風機吹干；
d)將由步驟c)得到的絲素在96℃下煮50min，反復4次，在60℃的烘箱中烘干；
e)將由步驟d)處理之后的三組絲素樣品分別放入質量分數為68％的硫氰酸鋰溶液中，浴比為1：35，50℃下超聲波振蕩溶解2h,獲得蠶絲溶液，冷卻過濾之后用截留分子量為8000的透析袋透析，透析開始的11h內每隔1h左右換一次水，11h后每隔3h換一次水，23h后每隔7h換一次水，46h后得到絲素蛋白溶液,使用聚乙二醇6000濃縮至原體積的1/3；
f)向步驟e)得到的三組溶液分別加入質量分數為1.5％的二硫蘇糖醇溶液2ml和質量分數為2.2％的碘乙酰胺溶液4ml平衡緩沖液平衡，然后分別向三組溶液中加入50ul的胰凝乳蛋白酶溶液酶解，采用LC-ESI-MS/MS對其進行質譜分析，將通過質譜分析得到的A,B,C三組樣品的氨基酸序列與氨基酸序列數據庫對比，具有柞蠶絲素蛋白的特征序列的古代文物樣品C來源于柞蠶絲。
實施例2:一種基于蛋白質組學測定古代絲織品的方法，該方法采用如下步驟：
a)取古代文物樣品A，B，C三組各5g，分析前將其用去離子水漂洗，去除表面殘留的雜質后，在55℃的烘箱中烘干；
b)分別將古代文物樣品以1:100的浴比在質量分數為0.5％的Na2CO3水溶液中沸煮30min進行脫膠，反復5次，然后將三組樣品溶液分別和絲素分離，待絲素用去離子水沖洗絞干后，再在65ml質量分數為1％的鹽酸溶液，于室溫下浸放60min，用溫水洗至溶液呈中性，在70℃的烘箱中烘干；
c)將由步驟b)脫鹽烘干的絲素繼續脫色和脫油蠟質，先在60℃溫度下，放入100ml的質量分數為70％甲醇溶液中浸110min,再在60℃溫度下，放入100ml無水乙醇中浸70min，接著在40℃溫度下，放入100ml的丙酮溶液中浸70min,最后絞干浸入100ml的乙醚中60min，使用吹風機吹干；
d)將由步驟c)得到的絲素在97℃下煮60min，反復5次，在70℃的烘箱中烘干；
e)將由步驟d)處理之后的三組絲素樣品分別放入質量分數為68％的硫氰酸鋰溶液中，浴比為1：35，55℃下超聲波振蕩溶解2.5h,獲得蠶絲溶液，冷卻過濾之后用截留分子量為11000的透析袋透析，透析開始的12h內每隔2h左右換一次水，12h后每隔4h換一次水，24h后每隔8h換一次水，48h后得到絲素蛋白溶液,使用聚乙二醇6000濃縮至原體積的1/2；
f)向步驟e)得到的三組溶液分別加入質量分數為1.7％的二硫蘇糖醇溶液2.5ml和質量分數為2.5％的碘乙酰胺溶液4.5ml平衡緩沖液平衡，然后分別向三組溶液中加入65ul的胰凝乳蛋白酶溶液酶解，采用LC-ESI-MS/MS對其進行質譜分析，將通過質譜分析得到的A,B,C三組樣品的氨基酸序列與氨基酸序列數據庫對比，具有柞蠶絲素蛋白的特征序列的古代文物樣品C來源于柞蠶絲。
實施例3:一種基于蛋白質組學測定古代絲織品的方法，該方法采用如下步驟：
a)取古代文物樣品A，B，C三組各8g，分析前將其用去離子水漂洗，去除表面殘留的雜質后，在60℃的烘箱中烘干；
b)分別將古代文物樣品以1:100的浴比在質量分數為0.6％的Na2CO3水溶液中沸煮40min進行脫膠，反復6次，然后將三組樣品溶液分別和絲素分離，待絲素用去離子水沖洗絞干后，再在80ml質量分數為1％的鹽酸溶液，于室溫下浸放70min，用溫水洗至溶液呈中性，在80℃的烘箱中烘干；
c)將由步驟b)脫鹽烘干的絲素繼續脫色和脫油蠟質，先在70℃溫度下，放入110ml的質量分數為80％甲醇溶液中浸120min,再在70℃溫度下，放入110ml無水乙醇中浸80min，接著在50℃溫度下，放入110ml的丙酮溶液中浸80min,最后絞干浸入110ml的乙醚中70min，使用吹風機吹干；
d)將由步驟c)得到的絲素在98℃下煮70min，反復6次，在80℃的烘箱中烘干；
e)將由步驟d)處理之后的三組絲素樣品分別放入質量分數為68％的硫氰酸鋰溶液中，浴比為1：35，60℃下超聲波振蕩溶解3h,獲得蠶絲溶液，冷卻過濾之后用截留分子量為14000的透析袋透析，透析開始的13h內每隔3h左右換一次水，13h后每隔5h換一次水，25h后每隔9h換一次水，50h后得到絲素蛋白溶液,使用聚乙二醇6000濃縮至原體積的2/3；
f)向步驟e)得到的三組溶液分別加入質量分數為2％的二硫蘇糖醇溶液3ml和質量分數為2.8％的碘乙酰胺溶液5ml平衡緩沖液平衡，然后分別向三組溶液中加入80ul的胰凝乳蛋白酶溶液酶解，采用LC-ESI-MS/MS對其進行質譜分析，將通過質譜分析得到的A,B,C三組樣品的氨基酸序列與氨基酸序列數據庫對比，具有柞蠶絲素蛋白的特征序列的古代文物樣品C來源于柞蠶絲。
以上僅是本發明的優選實施方式，本發明的保護范圍并不僅局限于上述實施例，凡屬于本發明思路下的技術方案均屬于本發明的保護范圍。應當指出，對于本技術領域的普通技術人員來說，在不脫離本發明原理前提下的若干改進和潤飾，這些改進和潤飾也應視為本發明的保護范圍。
附件一
柞蠶： Antheraea pernyi (2639aa)
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