本發(fā)明涉及生殖醫(yī)學(xué)，具體涉及胚胎種植潛能無創(chuàng)性的聯(lián)合評估方法、系統(tǒng)、介質(zhì)和終端。

背景技術(shù)：

1、人類輔助生殖技術(shù)(art)是治療不孕不育患者的先進(jìn)技術(shù)。隨著輔助生殖技術(shù)的快速發(fā)展，越來越多的不孕不育患者實(shí)現(xiàn)了生育需求，但目前胚胎移植的成功率仍不能滿足醫(yī)患的期望。選擇高質(zhì)量胚胎移植是決定輔助生殖技術(shù)成功率的關(guān)鍵因素之一。為提高移植胚胎的種植率、活產(chǎn)率，同時(shí)降低多胎妊娠率，選擇更高發(fā)育潛能的單胚胎移植已逐漸成為趨勢。傳統(tǒng)的胚胎選擇主要是基于胚胎的形態(tài)學(xué)評分，這方法具有較強(qiáng)的主觀性，其反應(yīng)胚胎的質(zhì)量和著床能力有限。時(shí)差胚胎培養(yǎng)監(jiān)測分析系統(tǒng)(time-lapse)結(jié)合ai技術(shù)對胚胎進(jìn)行預(yù)測，但該方法對胚胎的評估效果仍存在一些爭議。另外選擇整倍體胚胎進(jìn)行移植，可能對胚胎的種植率有所提高，但這種侵入性技術(shù)(例如pgt-a)可能對胚胎造成損傷。因此，需要通過一種客觀、無創(chuàng)性的評估方法來預(yù)測胚胎種植潛能，以篩選更高質(zhì)量的胚胎進(jìn)行移植，提高移植胚胎的成功率。

2、眾多研究證據(jù)表明，胚胎能夠分泌各種蛋白，例如細(xì)胞因子、趨化因子、生長因子等，而這些分泌蛋白與胚胎發(fā)育或著床等功能密切相關(guān)。分泌蛋白可能通過自分泌的形式作用于自身起調(diào)節(jié)作用，也可能通過旁分泌形式作用于子宮內(nèi)膜，實(shí)現(xiàn)母胎對話。已有研究報(bào)道證明在胚胎2細(xì)胞至囊胚時(shí)期均有表達(dá)hcgβ，隨后在合胞體滋養(yǎng)層細(xì)胞時(shí)期大量合成及釋放。胚胎分泌的hcgβ可預(yù)測胚胎質(zhì)量，可能與胚胎種植潛能相關(guān)。另外有研究表明卵裂期胚胎分泌的il-8與臨床妊娠結(jié)局相關(guān)。前期本技術(shù)人的的研究發(fā)現(xiàn)，單囊胚條件培養(yǎng)液中rantes濃度與胚胎質(zhì)量和胚胎種植潛能有相關(guān)性。總體而言，胚胎分泌蛋白可能通過自分泌或旁分泌的形式作用于自身或內(nèi)膜，調(diào)節(jié)自身發(fā)育或胚胎著床等過程。

3、鑒于上述的分析，通過檢測胚胎條件培養(yǎng)液中的分泌蛋白來無創(chuàng)性預(yù)測胚胎種植潛能成為可能。因此，本發(fā)明提供了胚胎種植潛能無創(chuàng)性的聯(lián)合評估方法、系統(tǒng)、介質(zhì)和終端。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是提供胚胎種植潛能無創(chuàng)性的聯(lián)合評估方法、系統(tǒng)、介質(zhì)和終端。目的是通過檢測單囊胚條件培養(yǎng)液中il-8、hcgβ及rantes的水平，聯(lián)合胚胎形態(tài)學(xué)評分評估選擇具有更高發(fā)育潛能的胚胎用于移植，因此具有較高臨床妊娠結(jié)局的預(yù)測價(jià)值。

2、本發(fā)明解決上述技術(shù)問題的技術(shù)方案如下：

3、第一方面，一種胚胎種植潛能無創(chuàng)性的聯(lián)合評估方法，所述對胚胎種植潛能無創(chuàng)性的聯(lián)合評估方法不屬于疾病的治療和診斷，包括如下步驟：

4、(1)將培養(yǎng)到第三天卵裂期的單個(gè)胚胎轉(zhuǎn)移至囊胚培養(yǎng)液的培養(yǎng)體系中，培養(yǎng)至第五天或第六天，形成囊胚；從所述培養(yǎng)體系中收集囊胚培養(yǎng)液，獲得無細(xì)胞的經(jīng)培養(yǎng)的單囊胚條件培養(yǎng)液；

5、(2)收集gardner評分系統(tǒng)對形成的所述囊胚的形態(tài)學(xué)評分?jǐn)?shù)據(jù)和所述單囊胚條件培養(yǎng)液中il-8、hcgβ和rantes的含量檢測數(shù)據(jù)；

6、(3)使用邏輯回歸方程構(gòu)建含有所述囊胚形態(tài)學(xué)評分?jǐn)?shù)據(jù)和il-8、hcgβ和rantes的含量檢測數(shù)據(jù)的邏輯回歸預(yù)測模型；

7、(4)使用所述邏輯回歸預(yù)測模型對待評估囊胚進(jìn)行無創(chuàng)評估種植潛能或預(yù)測價(jià)值。

8、在上述技術(shù)方案的基礎(chǔ)上，本發(fā)明還可以做如下改進(jìn)。

9、進(jìn)一步，步驟(1)中所述培養(yǎng)體系的囊胚培養(yǎng)液含10％人血清白蛋白，所述培養(yǎng)體系的囊胚培養(yǎng)液為25μl。

10、進(jìn)一步，步驟(2)中所述gardner評分系統(tǒng)包括1級、2級和3級；所述1級為aa、ab、ba、bb中的任一種，所述2級為ac、bc、cb、ca中的任一種，和所述3級為cc；所述1級定義為優(yōu)質(zhì)囊胚，1、2級定義為可利用囊胚。

11、進(jìn)一步，步驟(2)中收集所述單囊胚條件培養(yǎng)液中il-8、hcgβ和rantes的含量檢測數(shù)據(jù)采用如下具體的檢測方法：對所述單囊胚條件培養(yǎng)液進(jìn)行稀釋處理，采用單分子免疫檢測技術(shù)來檢測稀釋后的所述單囊胚條件培養(yǎng)液中il-8、hcgβ和rantes的含量。

12、進(jìn)一步，所述單分子免疫檢測技術(shù)采用的試劑包括捕獲抗體包被的磁珠、生物素化的檢測抗體、鏈霉親和素-β-半乳糖苷酶溶液和熒光底物溶液；所述捕獲抗體包被的磁珠包括il-8的捕獲抗體包被的磁珠，hcgβ的捕獲抗體包被的磁珠和rantes的捕獲抗體包被的磁珠；所述il-8的捕獲抗體包被的磁珠、所述hcgβ的捕獲抗體包被的磁珠和所述rantes的捕獲抗體包被的磁珠中的磁珠為不同熒光編碼的磁珠；所述生物素化的檢測抗體包括生物素化的il-8檢測抗體、生物素化的hcgβ檢測抗體、生物素化的rantes檢測抗體。

13、進(jìn)一步，步驟(3)中所述邏輯回歸預(yù)測模型的公式為：

14、logit(p＝臨床妊娠)＝0.570+0.987×il-8高濃度組+1.163×hcgβ高濃度組-1.378×rantes高濃度組-0.184×囊胚評分2+0.142×囊胚評分3-0.221×囊胚評分4-0.669×囊胚評分5；其中，所述il-8高濃度組為濃度大于0.341pg/ml，hcgβ高濃度組為濃度大于0.208miu/ml；rantes高濃度組為濃度大于9.87pg/ml。針對公式中“0.184×囊胚評分2+0.142×囊胚評分3-0.221×囊胚評分4-0.669×囊胚評分5”該部分的說明：囊胚評分為分類變量：aa定義為1，ab定義為2，ba定義為3，bb定義為4，ac、bc、ca或cb定義為5。

15、進(jìn)一步，步驟(4)具體為：使用所述邏輯回歸預(yù)測模型的公式對待評估囊胚進(jìn)行無創(chuàng)評估種植潛能或預(yù)測價(jià)值。

16、第二方面，一種對胚胎種植潛能無創(chuàng)性的聯(lián)合評估系統(tǒng)，基于所述的聯(lián)合評估方法采用的系統(tǒng)包括：

17、培養(yǎng)模塊：將培養(yǎng)到第三天卵裂期的單個(gè)胚胎轉(zhuǎn)移至囊胚培養(yǎng)液的培養(yǎng)體系中，培養(yǎng)至第五天或第六天，形成囊胚；從所述培養(yǎng)體系中收集囊胚培養(yǎng)液，獲得無細(xì)胞的經(jīng)培養(yǎng)的單囊胚條件培養(yǎng)液；

18、數(shù)據(jù)收集模塊：收集gardner評分系統(tǒng)對形成的所述囊胚的形態(tài)學(xué)評分?jǐn)?shù)據(jù)和所述單囊胚條件培養(yǎng)液中il-8、hcgβ和rantes的含量檢測數(shù)據(jù)；

19、無創(chuàng)評估預(yù)測模塊：使用構(gòu)建的邏輯回歸預(yù)測模型對待評估囊胚進(jìn)行無創(chuàng)評估的種植潛能或預(yù)測價(jià)值。

20、第三方面，一種計(jì)算機(jī)可讀存儲介質(zhì)，所述可讀存儲介質(zhì)上存儲有對胚胎種植潛能無創(chuàng)性的聯(lián)合評估程序，所述對胚胎種植潛能無創(chuàng)性的聯(lián)合評估程序被處理器執(zhí)行時(shí)實(shí)現(xiàn)所述的一種胚胎種植潛能無創(chuàng)性的聯(lián)合評估方法中的步驟(4)，對待評估的囊胚進(jìn)行無創(chuàng)性評估胚胎的種植潛能或預(yù)測價(jià)值。

21、第四方面，一種終端，包括：存儲器，用于存儲對胚胎種植潛能無創(chuàng)性的聯(lián)合評估程序；處理器，用于執(zhí)行所述對胚胎種植潛能無創(chuàng)性的聯(lián)合評估程序時(shí)實(shí)現(xiàn)所述的一種胚胎種植潛能無創(chuàng)性的聯(lián)合評估方法中的步驟(4)，對待評估的囊胚進(jìn)行無創(chuàng)性評估胚胎的種植潛能或預(yù)測價(jià)值。

22、本發(fā)明的有益效果是：

23、(1)本發(fā)明提供一種輔助生殖無創(chuàng)性評估、預(yù)測胚胎質(zhì)量及胚胎種植潛能的方法、系統(tǒng)、介質(zhì)和終端，提高了胚胎移植后的成功率。

24、(2)本發(fā)明通過研究提出單囊胚條件培養(yǎng)液中il-8、hcgβ及rantes的水平能夠聯(lián)合預(yù)測胚胎的種植潛能。

25、(3)本發(fā)明提供一種篩選輔助生殖移植胚胎的方法、系統(tǒng)、介質(zhì)和終端，使用il-8、hcgβ及rantes作為生物標(biāo)志物，通過預(yù)測模型可以篩選出具有更高發(fā)育潛能的胚胎。