本發(fā)明屬于中藥檢測，具體涉及一種乳癖散結(jié)膠囊/顆粒的指紋圖譜構(gòu)建方法及其指紋圖譜。

背景技術(shù)：

1、乳癖散結(jié)膠囊和乳癖散結(jié)顆粒均是陜西白鹿制藥股份有限公司的獨家產(chǎn)品，由夏枯草、川芎、僵蠶、鱉甲、柴胡、赤芍、玫瑰花、莪術(shù)、當(dāng)歸、延胡索和牡蠣11味藥材加工而成的復(fù)方制劑，具有行氣活血、軟堅散結(jié)等功效，主要用于氣滯血瘀所致的乳腺增生病，癥見乳房疼痛、乳房腫塊、煩躁易怒、胸脅脹滿等。臨床常用于治療乳腺結(jié)節(jié)，療效顯著。

2、中藥質(zhì)量優(yōu)劣直接關(guān)系到其發(fā)展。近年來，中藥因其療效可靠，副作用極小、毒性低和罕見的耐藥性受到越來越多的關(guān)注，但中藥由于其化學(xué)成分復(fù)雜并且成分之間相互影響，導(dǎo)致中藥質(zhì)量控制難度加大。當(dāng)前，?針對乳癖散結(jié)膠囊/顆粒的質(zhì)量檢測技術(shù)尚顯不足，?多數(shù)研究僅聚焦于配方中單味藥的成分分析，?這種方法忽略了膠囊整體成分的綜合考量，?因此難以全面反映其質(zhì)量狀況。?

技術(shù)實現(xiàn)思路

1、為了克服上述現(xiàn)有技術(shù)的缺點，本發(fā)明的目的在于提供一種乳癖散結(jié)膠囊/顆粒的指紋圖譜構(gòu)建方法及其指紋圖譜，用以解決現(xiàn)有的檢測方法無法全面反映質(zhì)量的技術(shù)問題。

2、為了達(dá)到上述目的，本發(fā)明采用以下技術(shù)方案予以實現(xiàn)：

3、本發(fā)明的第一個方面，公開了一種乳癖散結(jié)膠囊/顆粒的指紋圖譜構(gòu)建方法，包括以下步驟：

4、s1、制備供試品溶液：分別稱取不同批次的乳癖散結(jié)膠囊細(xì)粉或乳癖散結(jié)顆粒，加甲醇水溶液，回流提取，得供試品溶液；

5、s2、制備對照品溶液：精密稱取沒食子酸、原兒茶醛、綠原酸、秦皮乙素、咖啡酸、木犀草素、東莨菪內(nèi)酯、迷迭香酸、姜黃素、莪術(shù)烯醇、苯甲酰芍藥苷、莪術(shù)二酮、鞣花酸、原阿片堿、延胡索乙素、對香豆酸、苯甲酸和芍藥苷對照品，溶解，得到單一對照品溶液；

6、s3、對s1中獲得的供試品溶液和s2中的對照品溶液進(jìn)行色譜分析，得到相應(yīng)的色譜圖；

7、s4、將s3中獲得的色譜圖導(dǎo)入中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統(tǒng)，選擇不同批次乳癖散結(jié)膠囊/顆粒的色譜圖中均存在的色譜峰作為共有峰，對供試品溶液的色譜圖分別經(jīng)過數(shù)據(jù)導(dǎo)入、多點矯正和數(shù)據(jù)匹配，進(jìn)行相似度分析；

8、s5、對s1中獲得的供試品溶液進(jìn)行高分辨質(zhì)譜分析，得到總離子流圖以及化學(xué)成分的質(zhì)譜結(jié)果圖，將檢測數(shù)據(jù)導(dǎo)入xcalibur軟件，進(jìn)入qual?browser界面，根據(jù)化學(xué)成分出峰情況進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，根據(jù)總離子流圖以及化學(xué)成分的質(zhì)譜結(jié)果圖結(jié)合對照品色譜圖確定供試品色譜圖中各峰的化學(xué)成分，得到乳癖散結(jié)膠囊/顆粒的指紋圖譜。

9、優(yōu)選地，s1中，所述甲醇水溶液為80%甲醇水溶液。

10、優(yōu)選地，s1中，回流提取30?min。

11、優(yōu)選地，s1中，乳癖散結(jié)膠囊與甲醇水溶液的用量比為：2.5?g:25?ml，乳癖散結(jié)顆粒與甲醇水溶液的用量比為：3.5?g:25?ml。

12、優(yōu)選地，s2中，對照品溶液的制備方法為：分別精密稱取各對照品后與純甲醇溶液混勻，制成每1?ml含沒食子酸84?μg、原兒茶醛90?μg、綠原酸96?μg、秦皮乙素46?μg、咖啡酸95?μg、木犀草素97?μg、東莨菪內(nèi)酯74?μg、迷迭香酸85?μg、姜黃素33?μg、莪術(shù)烯醇75?μg、苯甲酰芍藥苷28?μg、莪術(shù)二酮75?μg、鞣花酸13?μg、原阿片堿56?μg、延胡索乙素57?μg、對香豆酸27?μg、苯甲酸88?μg或芍藥苷99?μg的單一對照品溶液。

13、優(yōu)選地，s3中，色譜條件為：色譜柱型號hedera?ods-2-c18，4.6×250?nm×5?μm；流動相為乙腈-0.05%磷酸水溶液；采用紫外可見吸收檢測器，檢測波長為0~40?min：260nm；40~115?min：240?nm；流速：0.8?ml/min；進(jìn)樣量：10?μl。

14、進(jìn)一步優(yōu)選地，s3中，色譜條件為：梯度洗脫程序為：0~5?min，乙腈體積2%；5~55min，乙腈體積2%~25%；55~80?min，乙腈體積25%~40%；80~100?min，乙腈體積40%~75%；100~115?min，乙腈體積75%~2%。

15、優(yōu)選地，s5中，高分辨質(zhì)譜檢測條件為：電噴霧電離，噴霧電壓3500?v，鞘氣流速40arb，輔助氣流速10?arb，毛細(xì)管溫度300℃，輔助氣溫度300℃，掃描模式為全掃描模式，質(zhì)荷比掃描范圍m/z為100-1500。

16、優(yōu)選地，s5中，根據(jù)質(zhì)譜結(jié)果圖，確定供試品色譜圖中各峰的化學(xué)成分，分別為：4號峰為沒食子酸，7號峰為原兒茶醛，8號峰為綠原酸，9號峰為秦皮乙素，10號峰為咖啡酸，12號峰為原阿片堿，13號峰為芍藥苷，14號峰為對香豆酸，15號峰為延胡索乙素，16號峰為迷迭香酸，17號峰為鞣花酸，19號峰為苯甲酸，22號峰為東莨菪內(nèi)酯，23號峰為木犀草素，24號峰為苯甲酰芍藥苷，27號峰為莪術(shù)烯醇，28號峰為姜黃素，29號峰為莪術(shù)二酮，得到乳癖散結(jié)膠囊/顆粒的指紋圖譜。

17、本發(fā)明的第二個方面，公開了上述構(gòu)建方法得到的乳癖散結(jié)膠囊/顆粒指紋圖譜。

18、與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有以下有益效果：

19、本發(fā)明提供的一種乳癖散結(jié)膠囊/顆粒的指紋圖譜構(gòu)建方法，1）供試品溶液制備過程中，選擇回流提取的方式進(jìn)行提取，所得的色譜圖成分比較全面，分離度較好，取效果較好，峰信息較多。2）以沒食子酸、原兒茶醛、綠原酸、秦皮乙素、咖啡酸、木犀草素、東莨菪內(nèi)酯、迷迭香酸、姜黃素、莪術(shù)烯醇、苯甲酰芍藥苷、莪術(shù)二酮、鞣花酸、原阿片堿、延胡索乙素、對香豆酸、苯甲酸和芍藥苷作為對照品，能夠確定參照峰的位置和豐度，確保指紋圖譜的穩(wěn)定性、重現(xiàn)性和專屬性。3）通過對多個批次的樣品進(jìn)行系統(tǒng)分析，能更加全面、科學(xué)的評價乳癖散結(jié)膠囊/顆粒的質(zhì)量，從而使產(chǎn)品的質(zhì)量和療效得到保證。4）將色譜圖導(dǎo)入中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統(tǒng)進(jìn)行相似度分析，能夠提高該方法的準(zhǔn)確性和客觀性。5）聯(lián)合色譜分析與高分辨質(zhì)譜分析進(jìn)行指紋圖譜的構(gòu)建，能夠全面反映乳癖散結(jié)膠囊/顆粒的質(zhì)量狀況。該方法建立的乳癖散結(jié)膠囊/顆粒的指紋圖譜得到了29個共有峰，并指認(rèn)其中18個特征峰，極大豐富了圖譜信息，所得到的指紋圖譜特征性明顯，可從總體上反映乳癖散結(jié)膠囊/顆粒中所含化學(xué)成分的信息；且得到的色譜圖基線平穩(wěn)，峰型好，為全面檢測乳癖散結(jié)膠囊/顆粒的質(zhì)量提供依據(jù)。通過以其相對保留時間和相對峰面積計算穩(wěn)定性、重復(fù)性和精密度，結(jié)果顯示相對保留時間和相對峰面積的rsd值均小于4.0%，表明該方法具有良好的重現(xiàn)性和可靠性。因此，該構(gòu)建方法能夠?qū)θ轳鄙⒔Y(jié)膠囊/顆粒的質(zhì)量進(jìn)行準(zhǔn)確、?清晰、?客觀評估，?對于有效控制乳癖散結(jié)膠囊/顆粒質(zhì)量、?確保臨床療效具有顯著的重要性和實用價值。?

20、進(jìn)一步地，供試品溶液制備過程中，選擇80%水甲醇溶液作為提取溶劑，提取物色譜圖信息量最多，成分含量最高，提取效果佳。

21、進(jìn)一步地，供試品溶液制備過程中，選擇回流提取30?min，所得到的色譜圖信息量較優(yōu)，時間和成本低。

22、進(jìn)一步地，色譜分析過程中，選擇流動相為乙腈-0.05%磷酸，出峰數(shù)目較多，峰型和分離效果較好。選擇波長為0~40?min：260?nm；40~115?min：240?nm，色譜圖所包含的信息量最全面且基線平穩(wěn)。選擇柱溫為35℃，各成分分離效果較好。

23、進(jìn)一步地，色譜分析過程中，選擇0~5?min，乙腈體積2%；5~55?min，乙腈體積2%~25%；55~80?min，乙腈體積25%~40%；80~100?min，乙腈體積40%~75%；100~115?min，乙腈體積75%~2%的梯度洗脫程序，分離度良好，峰高較高，色譜信息完整。