專利名稱：Sod芥菜的生產方法
技術領域：
本發明涉及生物技術領域，更具體地說涉及芥菜專用SOD(超氧化物歧化酶)制劑用到芥菜上，通過芽孢桿菌在芥菜植株體內繁殖、轉移，提高芥菜體內的SOD活性和含量的一種SOD芥菜的生產方法。
二.
背景技術：
超氧化物歧化酶(Superoxide Dismutase，簡稱SOD)是一種廣泛存在于動物、植物、微生物中的金屬酶，是生物體重要保護酶之一，能清除體內超氧自由基，增強機體抗輻射損傷能力、免疫力，延緩衰老，在一些疾病如腫瘤、炎癥及自身免疫疾病等治療中有良好的療效。SOD已進入化妝品、食品、醫藥等領域，SOD的應用與開發有不可估量的前景。目前，SOD大都從動物血液和人血液中提取，但血液中SOD含量低，血源收集不易，加上提取工藝復雜，所以，市場緊缺、價格昂貴。
經檢索，SOD在果樹、蔬菜及糧食等植物上應用的報道有多篇，尚未見SOD在芥菜上應用的報道。
三.

發明內容
本發明的目的是提供一種SOD芥菜的生產方法，提高芥菜的SOD酶活、耐熱性和品質。
本發明通過采用以下技術方法來實現上述目的將芥菜專用SOD制劑在芥菜播種至采收期之前施用，具體包括以下步驟(1)將芥菜專用SOD制劑與芥菜種子攪拌均勻；(2)芥菜苗移栽時使用專用制劑沾根；(3)芥菜生長期使用專用制劑噴霧；(4)采收前7-40天使用專用制劑噴霧。
所述的芥菜包括褐芥(Brassica juncea)、黑芥(Brassicanigra)、埃塞俄比亞芥(Brassica carinata)、白芥(Sinapis alba)等四個種。
本發明根據微生態學原理，將中國農業大學研制，獲中國發明專利的芽孢桿菌(菌株保藏號CGMCC0175，專利號93103774.3)植入芥菜，再經過特殊發酵工藝制備芥菜專用SOD制劑。該制劑為白色或灰色粉末，芽孢桿菌含量為3.0×1010cfu/g左右。用上述方法施用到芥菜后，通過芽孢桿菌在芥菜植株體內繁殖、轉移，能提高芥菜體內的SOD活性和含量，產生的SOD酶有較強的耐溫抗熱性和抗逆能力，在70℃條件下處理1小時，酶活為原酶活的50％以上；100℃條件下處理30分鐘，酶活為原酶活的40％以上，大大提高了芥菜的營養品質。
SOD芥菜的質量標準植株部位 指標(鮮品)(IU/g)葉 ≥150葉柄≥100
莖肉 ≥100莖皮 ≥100全株(去根) ≥100SOD酶活的測定方法SOD的測定采用NBT光化學法(1)設備752型分光光度計，臺式離心機，光照培養箱，冰箱，10ml小燒杯等。
(2)試劑氯化硝基氮藍四唑(NBT)——上海前進制劑廠生產L-甲硫氨酸(L-Met)-----上海康達氨基酸廠生產乙二胺四乙酸(EDTA)----北京化工廠生產核黃素(VB2)-----------北京西中化工廠生產(3)反應液的配制NBT反應液的制備配制PH7.8，50mmol/L的磷酸緩沖液1000ml，加入1.933mg的L-Met，待完全溶解后，放入45.8mg NBT，0.47mg核黃素(配成0.47mg/ml溶液，吸取1ml加入)和29.0mg EDTA，溶液終濃度Met為13mmol/L；NBT為6.3×10-3mmol/L；核黃素為1.3×10-3mmol/L；EDTA為0.1mmol/L，置于棕色試劑瓶中，用黑布罩遮光，于4℃冰箱中可保存1個月。
(4)材料的預處理按測定需要從芥菜植株相應部位取樣，用研缽研碎，按照樣品50ml磷酸緩沖液＝1∶2的比例加入緩沖液，1000rpm離心10分鐘，取上清液進行SOD酶活測定。
(5)測定方法吸取30μl樣品，放入10ml透明玻璃小燒杯中，加入3ml NBT反應液，混勻，在28℃SOD光化反應室中，2×15W日光燈光照20分鐘(光照為4000勒克司)在560nm處測定吸光度，以NBT反應液作空白對照，每組設3次重復，整個測定過程除光化反應外，均在避光或弱光條件下進行。同時測試過程中以美國“Sigma”公司、上海寶安公司的標準酶和貴州老來福藥業公司生產的SOD口服液作為測試對照。
(6)計算SOD酶活(IU/g)＝(OD對照-OD樣品)/(1/2OD對照)×稀釋倍數SOD芥菜中SOD酶活及抗熱性測定結果嚴格按照SOD芥菜的生產規程，僅用清水處理為對照，根據上述給出的SOD測定方法，測定SOD芥菜的SOD酶活性。(見下表)樣品 常規測定(IU/g)100℃處理30分鐘(IU/g)SOD芥菜(葉) 228.5 111.3芥菜(葉)139.6 13.5SOD芥菜(葉柄) 122.4 86.2芥菜(葉柄) 70.7 0.0SOD芥菜(莖肉) 104.0 71.4芥菜(莖肉) 53.1 0.0SOD芥菜(莖皮) 144.5 98.6芥菜(莖皮) 88.3 6.2測定結果表明，SOD芥菜中SOD酶活顯著高于普通芥菜，且差異顯著酶活提高150％以上，說明通過該技術可以生產出具有高含SOD酶活的SOD保健功能芥菜。
經過熱處理后，SOD芥菜中仍保持較高的SOD酶活，但對照中含有的SOD酶活極低。說明通過該技術生產的SOD芥菜，無論在常溫下保存還是進行深加工，都能保存較高的SOD活性。
四.
具體實施例方式
下面以具體實例對本發明作進一步說明。
以褐芥作為本試驗用種。
播種育苗前，按每畝大田5克用量將芽孢桿菌含量為3.0×1010cfu/g的芥菜專用SOD制劑與芥菜種子攪拌均勻。芽孢桿菌含量較低時，可加大用量；反之，減少用量。以夠拌種為宜，多則增加成本。
育苗后移栽時，按每畝大田65克用量使用芥菜專用SOD制劑沾根。
生長期(莖用芥菜為肉質莖形成初期)按每畝大田65克用量將芥菜專用SOD制劑稀釋均勻，兌水25～50公斤，進行葉面噴霧。
采收前20天左右按上述用量和方法再進行葉面噴霧。
應當說明的是(1)芥菜專用SOD制劑可以與其它殺蟲劑、殺菌劑(殺細菌劑除外)、植物生長調節劑、葉面肥、化學肥料等農化物質混合使用，不影響使用效果，并可以與其它栽培管理措施結合實施。
(2)建議上午10點前或下午3點后噴施。噴后2小時內下雨，要重新噴施。
(3)芥菜專用SOD制劑使用時，至少提前4小時用涼水溶解開，便于噴施。
(4)其它生產栽培管理按正常進行。
下面用表格形式將16個實施例歸類進行比較說明表1為芥菜SOD測定結果表2為100℃加熱30分鐘的芥菜SOD測定結果其中“采收前天數”指采收前是否進行芥菜專用SOD制劑噴霧的天數。表2是對應表1進行熱處理的結果。
從表1可看出有拌種、沾根、生長期和采收期噴霧的實例1測定結果均高于缺少一個以上處理的其它實例的結果。其中采收前22天進行芥菜專用SOD制劑噴霧，所得到的結果最為理想；采收之前過晚、過早進行專用制劑噴霧，所得到的結果均不理想，較為適宜的天數為15～30天。處理越少，所得的結果就越差。而不拌種、不沾根、生長期和采收期不噴的實例16，所得SOD含量均較低。
從表2可看出實例1四個階段均有處理，經過熱處理后SOD酶活仍能保持50％以上；處理階段越少，經過熱處理后SOD酶活保存就越少；而未作任何處理的實例16，經過熱處理后SOD酶活幾乎喪失殆盡。可見，有經過芥菜專用SOD制劑處理的芥菜，其SOD酶活有較強的耐熱性，適宜多種深加工。
總之，根據本發明所提供的方法對芥菜生長四個階段進行處理，能夠生產出適宜多種加工、富含SOD的高品質功能芥菜。
表1 芥菜SOD測定結果(單位IU/g)
表2 100℃加熱30分鐘芥菜SOD測定結果(單位IU/g)
權利要求
1.一種SOD芥菜的生產方法，其特征在于將芥菜專用SOD制劑在芥菜播種至采收期之前施用。
2.根據權利要求1所述的SOD芥菜的生產方法，其特征在于以下步驟(1)將芥菜專用SOD制劑與芥菜種子攪拌均勻；(2)芥菜苗移栽時使用專用制劑沾根；(3)芥菜生長期使用專用制劑噴霧；(4)采收前7-40天使用專用制劑噴霧。
3.根據權利要求1或2所述的SOD芥菜的生產方法，其特征在于所述的芥菜包括褐芥、黑芥、埃塞俄比亞芥、白芥等四個種。
全文摘要
本發明公開的是一種SOD芥菜的生產方法，將芥菜專用SOD制劑用到芥菜上，通過芽孢桿菌在芥菜植株體內繁殖、轉移，提高芥菜體內的SOD活性和含量。該方法是使用芥菜專用SOD制劑在芥菜播種至采收期之前施用，具體包括拌種、沾根、生長期及采收前噴霧。經測定，通過該技術可生產出具有富含SOD的高品質功能芥菜，并適宜多種深加工。
文檔編號A01G7/00GK1596592SQ20041003551
公開日2005年3月23日 申請日期2004年8月4日 優先權日2004年8月4日
發明者李建生, 王 琦 申請人:李建生