專利名稱：一種非洲菊組培快繁方法
技術領域：
本發明涉及花卉培養技術領域，尤其是一種非洲菊組培快繁方法——非洲 菊"兩步成苗法"。
背景技術：
非洲菊(Ce/^era ^/zze^77j'j'力oAa )又名扶郎花、太陽菊等，是菊科大 丁草屬多年生常綠宿根草本花卉。非洲菊觀賞價值較高，其花朵碩大，花盤直 徑可達8-10cm，花枝挺拔，因有"扶持郎君，事業發達"之意而倍受消費之 青睞，目前已成為世界花卉市場中最為暢銷的花卉品種之一。非洲菊擴繁技術 落后是導致我國非洲菊發展緩慢的主要原因，非洲菊為異花授粉植物，自交不 孕，自然條件下結實率很低且種子壽命短極易喪失萌發力，同時其種子后代繁 殖容易失去原有種性，發生變異，導致花梗變細、變軟、花型變小等。分株繁 殖可以保持原有的種性特征，不發生變異，但在繁殖過程中種苗容易被病蟲侵 染，而且增殖速度比較慢，難以滿足旺盛的市場對生產用苗的迫切需求。因此 建立快速高效的非洲菊種苗生產技術體系對我國非洲菊花卉業的產業化發展 具有重大的現實意義。
非洲菊在國際花卉市場上正處于迅速發展的階段，生產上需要大量的良 種種苗，我國正處在推廣階段，良種種苗供不應求，種子和種苗全部從國外引 進，成本非常高。許多研究院(所)已通過組培的方法獲得了再生植株，但多采 用常規的"三步成苗"法，即從外殖體誘導出愈傷組織，再由愈傷組織誘導出 不定芽，然后進行不定芽生根誘導三個步驟，其繁殖種苗的周期在7個月以上， 因組培成本較高而導致非洲菊種苗價格貴。另外非洲菊品種多、種質類型復雜， 盡管以花托、花瓣、嫩葉、莖尖、葉莖為起始外殖體培養配方已經公布，但不同品種間的研究結果差異大，特別是利用同一種培養基配方難以實現非洲菊綠 蕊與黑蕊品種的植株再生，對于種苗生產企業來講，仍需要進一歩優化組培技 術。

發明內容
本發明的目的是提供一種針對不同非洲菊綠蕊品種和黑蕊品種可以共用 的植株再生培養基配方，簡化非洲菊的組培程序，降低組培成本。 為了達到上述目的，本發明采用的技術方案包括以下步驟
(1) 在超凈工作臺上剪取非洲菊試管苗葉片作為外殖體；
(2) 將所述的外殖體沿垂直中脈方向橫切成2-6mm的方塊，葉背朝下接 種于誘導培養基中，每瓶接種數10-25株，所述誘導培養基為加6-BA3.0-6.0 mg/L、 IAA 0.1-0.4 mg/L的MS培養基；
(3) 將接種在培養瓶中的外殖體先進行3天暗處理，然后在光照強度為 800-2000Lux、光照時間12-14 h/d、溫度為20-28° C的條件下置于綠色的濾 光膜下培養50-65天即得到誘導的不定芽；
(4) 將所述誘導的不定芽接種到生根培養基中，每瓶接種數為10-20株， 在光照強度為800-2000Lux、光照時間12-14h/d、溫度為20-28° C的條件下 培養60-70天即可生根，所述的生根培養基為加有IAA0.1-0.3 mg/L的MS培 養基。
本發明提供的非洲菊組培快繁方法，不僅解決了非洲菊黑蕊品種不定芽誘 導困難的難題，而且打破了非洲菊綠蕊品種和黑蕊品種的界限，可通過一種培 養基實現兩個品系的不定芽高效誘導；另外本發明通過以試管苗片為外殖體直 接誘導不定芽和生根培養兩步完成非洲菊組培苗生產全過程，簡化了組培程 序，不僅組培周期由原來的7個月縮短到4個月，而且減少了一次轉接過程， 組培成本節省了三分之一。
具體實施例方式
下面通過具體實施例對本發明進行詳細描述 實施例1
(1)在超凈工作臺上剪取非洲菊試管苗葉片作為外殖體； -切-將外殖體沿垂直中脈方向橫切3刀，切斷葉脈，切成2mm的方塊，葉 背朝下接種于加有6-BA3.0mg/L、 IAA0.1mg/L的MS培養基中，每瓶接種數 為25株；
(3) 將接種在該培養瓶中的外殖體先進行3天暗處理，然后在光照強度為 800Lux、光照時間14h/d、溫度為28° C的條件下置于綠色的濾光膜下培養 65天，得到誘導的長度為4cm的不定芽，其中綠蕊品種的誘導率為99.8%，黑 蕊品種的誘導率為91%;
(4) 將得到的不定芽接種到加有IAA0.3mg/L的MS培養基中，每瓶接種 數為10株，在光照強度為1500Lux、光照時間12h/d、溫度為24° C的條件 下培養60天，得到長度為7 cm的根，生根率為100%，每個植株平均生根8 個，呈粗短的雞爪狀，植株挺拔，平均高度在12cm，葉片為淡綠色。
以上所述的MS培養基中均附加有30%的蔗糖、0.6%的瓊脂和300mg/L 的水解酪蛋白。 實施例2
(1) 在超凈工作臺上剪取非洲菊試管苗葉片作為外殖體；
(2) 將外殖體沿垂直中脈方向橫切3刀，切斷葉脈，切成4mm的方塊，葉 背朝下接種于加有6-BA5.0mg/L、 IAA0.3mg/L的MS培養基中，每瓶接種數 為IO株；
(3) 將接種在該培養瓶中的外殖體先進行3天暗處理，然后在光照強度為 1500Lux、光照時間13h/d、溫度為25° C的條件下置于綠色的濾光膜下培養
550天，得到誘導的長度為8cm的不定芽，其中綠蕊品種的誘導率為100%，黑 蕊品種的誘導率為97%;
(4)將得到的不定芽接種到加有IMO. 2mg/L的MS培養基中，每瓶接種 數為15株，在光照強度為800Lux、光照時間14h/d、溫度為28° C的條件下 培養65天，得到長度為5cm的根，生根率為100%，每不植株平均生根6個， 呈粗短的雞爪狀，植株挺拔，平均高度在10cm，葉片為淡綠色。
以上所述的MS培養基中均附加有30%的蔗糖、0.6%的瓊脂和300mg/L 的水解酪蛋白。
實施例3
(1) 在超凈工作臺上剪取非洲菊試管苗葉片作為外殖體；
(2) 將外殖體沿垂直中脈方向橫切3刀，切斷葉脈，切成6mm的方塊，葉 背朝下接種于加有6-BA6.0mg/L、 IAA0.4mg/L的MS培養基中，每瓶接種數 為15株；
(3) 將接種在該培養瓶中的外殖體先進行3天暗處理，然后在光照強度為 2000Lux、光照時間12h/d、溫度為20° C的條件下置于綠色的濾光膜下培養 50天，得到誘導的長度為7cm的不定芽，其中綠蕊品種的誘導率為100%，黑 蕊品種的誘導率為94%;
(4) 將得到的不定芽接種到加有IAAO. lmg/L的MS培養基中，每瓶接種 數為20株，在光照強度為2000Lux、光照時間14h/d、溫度為26° C的條件 下培養70天，得到長度為4cm的根，生根率為100%，每個植株平均生根4個， 呈粗短的雞爪狀，植株挺拔，平均高度在13cm，葉片為淡綠色。
以上所述的MS培養基中均附加有30%的蔗糖、0.6%的瓊脂和300mg/L 的水解酪蛋白。
綜上所述，本發明操作方法簡單，不僅簡化了組培程序，而且大大縮短了組培苗繁育周期，對非洲菊種苗產業化生產具有重大的現實意義。利用該發明 生產非洲菊種苗，不僅打破了非洲菊黑蕊品種和綠蕊品種的界限，而且解決了
生產中非洲菊黑蕊品種不定芽誘導率低的難題；此外,利用該方法生產非洲菊
種苗，能較好的保持原品種遺傳穩定性，即使是多代繁殖,也不易發生變異，因 其誘導的再生植株是未經脫分化的細胞形成，細胞無性系變異小，可較好的保 持受體植株的優良特性。
權利要求
1、一種非洲菊組培快繁方法，其特征在于，包括以下步驟(1)在超凈工作臺上剪取非洲菊試管苗葉片作為外殖體；(2)將所述的外殖體沿垂直中脈方向橫切成2-6mm的方塊，葉背朝下接種于誘導培養基中，每瓶接種數10-25株，所述誘導培養基為加6-BA3.0-6.0mg/L、IAA0.1-0.4mg/L的MS培養基；(3)將接種在培養瓶中的外殖體先進行3天暗處理，然后在光照強度為800-2000Lux、光照時間12-14h/d、溫度為20-28℃的條件下置于綠色的濾光膜下培養50-65天即得到誘導的不定芽；(4)將所述誘導的不定芽接種到生根培養基中，每瓶接種數為10-20株，在光照強度為800-2000Lx、光照時間12-14h/d、溫度為20-28℃的條件下培養60-70天即可生根，所述的生根培養基為加有IAA0.1-0.4mg/L的MS培養基。
全文摘要
本發明公開了一種非洲菊組培快繁方法，非洲菊“兩步成苗法”，通過以試管苗葉片為外殖體直接誘導不定芽和生根培養兩步完成非洲菊組培苗生產全過程。利用該方法生產非洲菊種苗，不僅解決了非洲菊黑蕊品種不定芽誘導困難和誘導率低的難題，而且打破了非洲菊綠蕊品種和黑蕊品種的界限，可通過一種培養基實現綠蕊品種98％以上及黑蕊品種90％以上的不定芽高效誘導；另外本發明簡化了組培程序，不僅組培周期由原來的7個月縮短到4個月，而且減少了一次轉接過程，組培成本節省了三分之一。
文檔編號A01H4/00GK101496496SQ20081001460
公開日2009年8月5日 申請日期2008年2月2日 優先權日2008年2月2日
發明者楊娟俠, 王之涵, 王家喜, 王少敏, 王江勇 申請人:山東省果樹研究所