專利名稱：一種枯草芽孢桿菌Tpb55可濕性粉劑及其應用的制作方法
技術領域：
本發明涉及一種以枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)Tpb55為活性成分的可濕性粉劑，及其應用，屬于生物防治領域。
背景技術：
煙草赤星病、黑脛病等真菌病害分布廣、危害重。種植抗病品種、加強栽培管理以及化學防治是我國目前防治煙草赤星病的主要措施。但是，優良的抗性品種難以獲得，且容易喪失，而且生產上的主栽品種均抗性較差。利用地膜覆蓋，合理輪作，適時早移栽以及適宜的種植密度等措施，在一定程度上可以減輕病害的發生程度，但在病害選擇壓力大時往往效果并不明顯，只能發揮輔助作用。因此，化學藥劑的使用仍是主要手段，其中，菌核凈是使用最廣泛的藥劑。黑脛病的防治同樣以化學防治為主，常用藥劑主要有甲霜靈系列、乙磷鋁及乙磷鋁錳鋅、敵克松、惡霜靈錳鋅、代森鋅、福美雙、代森錳鋅等。這些化學藥劑多為苯基酰胺類及乙磷鋁等同一種或作用機制相同的幾種內吸性殺菌劑，很容易產生耐藥性，從而引起藥效下降。由上述描述可見，煙草黑脛病和赤星病的防治嚴重依賴化學防治，存在諸多弊端。 一是，造成環境污染和農藥殘留。二是產生抗藥性，防治效果下降，防治成本增加。三是藥劑的使用受環境影響大，防治效果不理想，如高溫多雨天氣利于煙草赤星病的爆發，化學藥劑難以使用。生物防治由于其所有的獨特的優越性，成為最具發展前景的領域，也是國內外科研工作者研究的熱點。因此，篩選一些新的殺菌劑防治是一項非常迫切的工作。但是，新的化學農藥研發不僅成本高，而且難度大，且有時使用效果不理想，而生物防治不僅環境友好，而且有時效果較為理想，成為近年來研究熱點。本申請的申請人在專利“一株枯草芽孢桿菌及其在真菌病害防治中的應用”(專利申請號201110093415. 4，申請日2011年4月14日)中公開一株新的枯草芽孢桿菌菌株Tpl355，它是從山東青州煙田煙草葉面生境中分離獲得的，已于 2008年12月四日由中國微生物保藏管理委員會普通微生物中心(地址北京市朝陽區大屯路，中國科學院微生物研究所)進行保藏，保藏編號為CGMCC No. 2843。該菌株對煙草具有防病促生效應，可用作生物肥料及生物農藥，并通過試驗驗證防治煙草赤星病效果顯著， 防治效果達到74. 22%，無藥害產生，對上部煙葉品質有一定改善作用。但是，單純的枯草芽孢桿菌Tpb55發酵液和枯草芽孢桿菌Tpb55原粉穩定性不好，不能長時間放置，也不適合生產大面積應用。劑型加工是生物農藥應用關鍵技術之一，便與使用和提高藥效，也便于標準化生產與管理。但生物農藥尤其是或體制劑必須獲得穩定的物理性狀，存活和防治效果要有一定時間。由于微生物制劑的特殊性，目前可選擇的有可濕性粉劑、可濕性片劑、水分散粒劑、 干拌種劑、顆粒劑等10種劑型。

發明內容
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針對上述現有技術，為克服枯草芽孢桿菌Tpb55發酵液和原粉不能長期放置以及不便與使用的缺點，本發明提供了一種穩定性好的枯草芽孢桿菌Tpb55可濕性粉劑。經實驗證明，這種制劑性質穩定，便于長期存放，且對煙草赤星病防治效果顯著，對煙草黑脛病有較好的防治效果。經檢索，在所有已申請的專利文獻中均沒有涉及本發明主題的文獻報道。本發明是通過以下技術方案實現的一種枯草芽孢桿菌Tpb55可濕性粉劑，是由以下重量份的組分組成的枯草芽孢桿菌Tpb55原粉40 80份，白炭黑10 50份，乳化劑十二烷基硫酸鈉1 3份，磷酸二氫鉀0. 5 2份，磷酸氫二鉀0. 5 2份，分散劑NNO 1 3份，分散劑MF 1 3份。所述分散劑NNO的化學組成為亞甲基雙荼磺酸鈉，分子式CH2 (C10H6S03Na) 2或 C21H1406S2Na2, CAS號36290-04_7，可從市場上買到。性狀分散劑NNO米棕色粉狀，易溶于任何硬度的水中，陰離子型，耐酸、耐堿、耐熱、耐硬水、耐無機鹽，易溶于任何硬度的水中；分散劑NNO具有優良擴散性和保護膠體性能，但無滲透起泡等表面活性，對蛋白質及聚酰胺纖維有親和力，對棉、麻等纖維無親和力。所述分散劑MF的化學組成為亞甲基雙甲基萘磺酸鈉(亞甲基二甲基二萘磺酸鈉)，分子式:C23H1806S2Na2 或(C10H803S · CH20) χ · xNa, CAS 號:9084-06_4，可從市場上買到。性狀分散劑MF為棕色粉末，易溶于水，易吸潮，不燃，具有優良的擴散性和熱穩定性，無慘透性和起泡性，耐酸堿、硬水及無機鹽，對棉麻等纖維無親和力；對蛋白質和聚酰胺纖維有親和力；可與陰離子型和非離子型表面活性劑同時使用，但不能與陽離子型染料或表面活性劑混合使用；對分散還原染料顆粒受熱凝聚防止能力較分散劑NNO為佳。分散劑 MF屬陰離子表面活性劑。優選的，是由以下重量份的組分組成的枯草芽孢桿菌Tpb55原粉60份，白炭黑 32. 5份，乳化劑十二烷基硫酸鈉2份，磷酸二氫鉀0. 5份，磷酸氫二鉀1份，分散劑NNO 2 份，分散劑MF 2份。制備得到的枯草芽孢桿菌Tpb55可濕性粉劑，含菌量(cfu/g) ^ 101°,活菌率 (%)彡85%，干燥減量(％)彡3. 5，懸浮率>80%，潤濕時間(s) <30s，細度(通過50μπι 篩)> 98%，ρΗ值6-8，貯存穩定性20°C貯存12個月活菌率> 85%。樣品的檢測檢驗方法及數據公布如下表面張力的測定①稱取0. 05g制得的可濕性粉劑粉末，加入到50g水中，攪拌至均勻。②將表面張力儀連接好，調節液面高度，使毛細管口與水面相切，打開活塞抽氣。 調節使單個氣泡的形成時間為6s 10s。記錄絕對值最大的壓力差，共三次，取平均值。③由r = kp，計算得表面張力系數。表面張力測定結果如表1所示，最大壓強差為0.679kPa，表面張力系數、= k* Δ P = 0. 07469N/m,儀器常數為 k = 0. 11。表1表面張力測定結果
次數123平均值
權利要求
1.一種枯草芽孢桿菌Tpb55可濕性粉劑，其特征在于，是由以下重量份的組分組成的 枯草芽孢桿菌Tpb55原粉40 80份，白炭黑10 50份，十二烷基硫酸鈉1 3份，磷酸二氫鉀0. 5 2份，磷酸氫二鉀0. 5 2份，分散劑NNO 1 3份，分散劑MF 1 3份。
2.根據權利要求1所述的一種枯草芽孢桿菌Tpb55可濕性粉劑，其特征在于是由以下重量份的組分組成的枯草芽孢桿菌Tpb55原粉60份，白炭黑32. 5份，乳化劑十二烷基硫酸鈉2份，磷酸二氫鉀0. 5份，磷酸氫二鉀1份，分散劑NNO 2份，分散劑MF 2份。
3.根據權利要求1所述的一種枯草芽孢桿菌Tpb55可濕性粉劑，其特征在于所述枯草芽孢桿菌Tpb55原粉中枯草芽孢桿菌Tpb55含量為100 1000億活芽孢/克。
4.根據權利要求1所述的一種枯草芽孢桿菌Tpb55可濕性粉劑，其特征在于所述枯草芽孢桿菌Tpb55原粉是通過以下方法制備得到的(1)將枯草芽孢桿菌Bacillussubtilis Tpb55試管種接種于肉湯培養基搖瓶中，振蕩培養至對數期；(2)將上述培養好的菌種按種子罐培養基的體積比10%接種量接入30L種子罐，培養至對數生長期，種子罐所用的培養基配方為葡萄糖10g/L、蛋白胨3g/L、MgS040. 5g/L、酵母膏1. 5g/L，牛肉膏1. 5g/L ；培養條件溶氧量為15-18%，攪拌速度200rpm，發酵溫度31°C；(3)將種子液生產罐培養基的10%的接種量接入生產罐培養，生產罐培養基配方為 玉米粉 20g/L、豆餅粉 50g/L、MgSO4 · 7H20 0. 5g/L，MnSO4 · H2O 10g/L ；培養條件溶氧量為 15-18%，攪拌速度200rpm，發酵溫度31°C ；培養至最終生物量為109cfu/g，芽孢形成率達 97%以上，發酵完成；(4)發酵完成后，培養液出罐，過濾，噴霧干燥即得原粉。
5.權利要求1 4中任一項所述的一種枯草芽孢桿菌Tpb55可濕性粉劑的制備方法， 其特征在于將各組分混合均勻，控制加工溫度在0 50°C，在氣流粉碎機中粉碎，過150 目篩，即得。
6.權利要求1 4中任一項所述的一種枯草芽孢桿菌Tpb55可濕性粉劑在煙草赤星病、黑脛病防治中的應用。
全文摘要
本發明公開了一種以枯草芽孢桿菌Tpb55為活性成分的可濕性粉劑，是由枯草芽孢桿菌Tpb55原粉、白炭黑、KH2PO4、K2HPO4、乳化劑十二烷基硫酸鈉、分散劑MF和分散劑NNO組成的。本發明的枯草芽孢桿菌可濕性粉劑克服了枯草芽孢桿菌Tpb55發酵液和原粉不能長期放置以及不便與使用的缺點，經實驗證明，本發明的制劑性質穩定，便于長期存放，且對煙草赤星病防治效果顯著，對煙草黑脛病有較好的防治效果。可以預見，本發明在生物防治領域將有著廣闊的應用前景。
文檔編號A01P3/00GK102388921SQ20111023222
公開日2012年3月28日 申請日期2011年8月15日 優先權日2011年8月15日
發明者馮超, 周建, 孔凡玉, 張成省, 李霞, 牛柱峰, 王新偉, 王靜, 羅定棋, 陳雪 申請人:中國農業科學院煙草研究所