專利名稱：非洲菊花托誘導(dǎo)方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及花卉培育方法，特別適用于非洲菊花托誘導(dǎo)方法。
背景技術(shù)：
非洲菊，學(xué)名Gerbera jamesonii Bolus，為菊科大丁草屬的多年生宿根草本植物，為世界五大切花之一，其花朵碩大，花枝挺拔，瓶插壽命長(zhǎng)，又有“扶持郎君，事業(yè)發(fā)達(dá)” 之意，因而備受消費(fèi)者的青睞。非洲菊可采用分株繁殖，但目前非洲菊種苗生產(chǎn)上大多采用組織培養(yǎng)進(jìn)行快繁，因?yàn)橛仔』ɡ倬哂休^強(qiáng)的再分化能力，常作為非洲菊種苗誘導(dǎo)的外植體。現(xiàn)有技術(shù)一般以非洲菊的幼小花蕾，剝?nèi)セㄝ嗉靶』ㄐ蚝罂v切為四塊，接種于誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，正常光照培養(yǎng)，該方法存在誘導(dǎo)率較低，不同品種間的誘導(dǎo)率存在很大的差異，嚴(yán)重制約了非洲菊種苗工廠化、規(guī)模化生產(chǎn)。有研究表明花托的發(fā)育期直接影響愈傷組織的分化，以處于顯蕾初期直徑為 0. 7cm以下的頭狀花序的花托誘導(dǎo)效果最好，隨著花序直徑的增大，分化誘導(dǎo)率降低，感染率增高。也有研究表明以花托為外植體，在MS+6-BA 2. 5mg/L+2，4-D 1. Omg/L+NAA 0. 2mg/ L的培養(yǎng)基上，愈傷組織誘導(dǎo)率最高，誘導(dǎo)率達(dá)到100%，這些愈傷組織可以分化出不定芽。 也有研究結(jié)果顯示以非洲菊幼花托為外植體，在l/2MSH+8mg/L 6-BA+O. 3mg/L NAA培養(yǎng)基上，不定芽再生率最高，達(dá)到15. 2%。現(xiàn)在花托誘導(dǎo)方法為A外植體的選擇；現(xiàn)有技術(shù)一般選擇非洲菊花蕾直徑大小在0. 7cm以下。非洲菊花序不同發(fā)育時(shí)期的花蕾對(duì)花托的誘導(dǎo)有很大的影響，B外植體的消毒；花托的消毒程序?yàn)橛梅试硭疀_洗一遍，自來(lái)水沖洗干凈后置于超凈工作臺(tái)上， 70%酒精消毒30s，無(wú)菌水沖洗3-4遍，0. 升汞消毒6min，無(wú)菌水沖洗5-7遍即可。外植體的消毒是建立非洲菊試管苗無(wú)菌體系的一個(gè)重要環(huán)節(jié)。C花托誘導(dǎo)培養(yǎng)基的選擇；非洲菊花托愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基配方為MS+6-BA 2. 5mg/L+2，4-D 1. Omg/L+NAA 0. 2mg/L+蔗糖30g/L+瓊脂7g/L，誘導(dǎo)率達(dá)到100% ；不定芽分化培養(yǎng)基為l/2MSH+8mg/L 6-BA+O. 3mg/L NAA+蔗糖30g/L+瓊脂7g/L，分化率為15. 2%，PH值控制在5. 8左右。D、培養(yǎng)條件及方式。花托的培養(yǎng)條件正常光照培養(yǎng)，光照強(qiáng)度為1500-20001x，光照時(shí)間14h/d，溫度 23- °C。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于克服上述缺陷，提供一種非洲菊花托誘導(dǎo)方法。本發(fā)明的方案是花托誘導(dǎo)方法包括外植體的選擇、外植體的消毒、花托誘導(dǎo)基的選擇、培養(yǎng)條件和方式，以非洲菊的幼小花蕾，剝?nèi)セㄝ嗉靶』ㄐ蚝罂v切為四塊，接種于誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，正常光照培養(yǎng)，其特征在于外植體的選擇以花蕾直徑大小在0. 5-0. 8cm之間為選擇對(duì)象，并增加對(duì)選擇對(duì)象進(jìn)行48小時(shí)的溫度為4度的冷藏預(yù)處理；花托誘導(dǎo)基的選擇所選擇的培養(yǎng)基配方為l/2MS+6-BA 10mg/L+NAA 0. 5mg/L+蔗糖30g/L+瓊脂7g/L，PH 值控制在5. 8左右；培養(yǎng)條件及方式為先7天黑暗預(yù)培養(yǎng)后轉(zhuǎn)入正常光照培養(yǎng)，光照強(qiáng)度為 1500-20001x，光照時(shí)間14h/d，溫度23_25°C，直至育成種苗。本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)在于其一，通過(guò)本技術(shù)可明顯提高花托的愈傷組織的誘導(dǎo)率和不定芽的分化率，通過(guò)本發(fā)明技術(shù)可使花托愈傷組織誘導(dǎo)率達(dá)到100%，不定芽分化率達(dá)到 38%，降低生產(chǎn)成本；其二，通過(guò)本發(fā)明技術(shù)可消減不同品種之間誘導(dǎo)率的差異，為工廠化種苗生產(chǎn)提供可能。
具體實(shí)施例方式非洲菊花托誘導(dǎo)方法涉及到非洲菊的組織培養(yǎng)技術(shù)，具體包括A外植體的選擇及預(yù)處理(創(chuàng)新點(diǎn))；選擇非洲菊花蕾直徑大小在0. 5-0. 8cm之間，并進(jìn)行48h的4°C冷藏預(yù)處理。非洲菊花序不同發(fā)育時(shí)期的花蕾對(duì)花托的誘導(dǎo)有很大的影響，試驗(yàn)研究表明花蕾直徑大于 0. 8cm容易褐變，而且誘導(dǎo)愈傷組織能力差，分化不定芽能力亦差；花蕾直徑小于0. 5cm與 0. 5-0. 8cm的誘導(dǎo)率差異不顯著，但是直徑大小小于0. 5cm時(shí)增加了操作的難度。4 的 4°C冷藏預(yù)處理有利于降低褐變率和提前愈傷組織的誘導(dǎo)，并提高誘導(dǎo)率和不定芽分化率。B外植體的消毒；花蕾的消毒程序?yàn)橛梅试硭疀_洗一遍，自來(lái)水沖洗干凈后置于超凈工作臺(tái)上，先用無(wú)菌水沖洗5-7遍，70%酒精消毒30s，無(wú)菌水沖洗3-4遍，0. 1 %升汞消毒6min，無(wú)菌水沖洗5-7遍即可。外植體的消毒是建立非洲菊試管苗無(wú)菌體系的一個(gè)重要環(huán)節(jié)，通過(guò)以上的消毒程序，能控制污染率在3%以下。C花托誘導(dǎo)培養(yǎng)基的選擇；非洲菊花托誘導(dǎo)培養(yǎng)基配方為1/2MS+6-BA 10mg/L+NAA0. 5mg/L+蔗糖30g/L+瓊脂7g/L，PH值控制在5. 8左右。低濃度的無(wú)機(jī)鹽能減少花托的褐變率，高濃度的細(xì)胞分裂素(6-BA)可以提高不定芽的分化。D培養(yǎng)條件及方式。花托的培養(yǎng)條件為先7天黑暗預(yù)培養(yǎng)后轉(zhuǎn)入正常光照培養(yǎng)，光照強(qiáng)度為 1500-20001x，光照時(shí)間14h/d，溫度23-25°C。7天的暗培養(yǎng)可以減少外植體的褐變，同時(shí)有利于外植體愈傷組織的誘導(dǎo)。本發(fā)明花托誘導(dǎo)原理為非洲菊幼小花蕾作為一種再分化能力較強(qiáng)的材料，是用于非洲菊種苗生產(chǎn)的常用外植體。影響非洲菊花托誘導(dǎo)的因素很多，比如外植體大小，外植體切分方式、激素的種類及濃度、外植體接種前的預(yù)處理及接種后的不同光照處理都會(huì)影響大到非洲菊花托誘導(dǎo)的成功率。本專利在試驗(yàn)研究和統(tǒng)計(jì)分析的基礎(chǔ)上，分析了以上因素對(duì)非洲菊花托誘導(dǎo)率的影響。研究結(jié)果顯示花蕾直徑大小在0. 5-0. 8cm的誘導(dǎo)率顯著高于直徑大于0. 8cm的誘導(dǎo)率，誘導(dǎo)率達(dá)到35%，與直徑小于0. 5cm的誘導(dǎo)率差異不顯著； 花蕾太小，容易干枯死亡且操作難度大，花蕾太大，則容易發(fā)生褐變；花蕾經(jīng)誘導(dǎo)前的4。C冷藏預(yù)處理可明顯降低褐變頻率和提高誘導(dǎo)率，原因可能是經(jīng)4°C冷藏預(yù)處理后，酚類物質(zhì)的活性受到抑制，同時(shí)調(diào)整了外植體內(nèi)部的激素水平。較高濃度的細(xì)胞分裂素及一定濃度的細(xì)胞生長(zhǎng)素有利于外植體的誘導(dǎo)和分化。接種后的一定時(shí)間(7天)的暗培養(yǎng)有利于減少外植體褐變率，并提早外植體的萌動(dòng)，縮短誘導(dǎo)周期。本發(fā)明英文名詞說(shuō)明MS 組培中用到的一種基本培養(yǎng)基(包含大量元素、微量元素、鐵鹽和有機(jī)成分)6-BA 6-芐氨基嘌呤，一種植物細(xì)胞分裂素NAA:萘乙酸，一種植物細(xì)胞生長(zhǎng)素cm 厘米mg/L:毫克每升2,4-D :2,4- 二氯苯氧乙酸，一種植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑S 秒Min 分鐘g/L:克每升h/d:小時(shí)每天MSH 一種組織培養(yǎng)基本培養(yǎng)基，MSH培養(yǎng)基的基本組分包括SH大量元素，MS微量元素及鐵鹽，l_2mg/L水解酪蛋白，9. 9mg/LVBl,9. 5mg/LVB6,4. 5mg/L尼克酸。
權(quán)利要求
1.非洲菊花托誘導(dǎo)方法，包括外植體的選擇、外植體的消毒、花托誘導(dǎo)基的選擇、培養(yǎng)條件和方式，以非洲菊的幼小花蕾，剝?nèi)セㄝ嗉靶』ㄐ蚝罂v切為四塊，接種于誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，正常光照培養(yǎng)，其特征在于外植體的選擇以花蕾直徑大小在0. 5-0. 8cm之間為選擇對(duì)象，并增加對(duì)選擇對(duì)象進(jìn)行48小時(shí)的溫度為4度的冷藏預(yù)處理；花托誘導(dǎo)基的選擇所選擇的培養(yǎng)基配方為l/2MS+6-BA 10mg/L+NAA 0. 5mg/L+蔗糖30g/L+瓊脂7g/L，PH值控制在5. 8左右；培養(yǎng)條件及方式為先7天黑暗預(yù)培養(yǎng)后轉(zhuǎn)入正常光照培養(yǎng)，光照強(qiáng)度為 1500-20001x，光照時(shí)間14h/d，溫度23_25°C，直至育成種苗。
全文摘要
非洲菊花托誘導(dǎo)方法，涉及涉及花卉培育方法。包括外植體的選擇、外植體的消毒、花托誘導(dǎo)基的選擇、培養(yǎng)條件和方式，以非洲菊的幼小花蕾，剝?nèi)セㄝ嗉靶』ㄐ蚝罂v切為四塊，接種于誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，正常光照培養(yǎng)，其特征在于外植體的選擇以花蕾直徑大小在0.5-0.8cm之間為選擇對(duì)象，并增加對(duì)選擇對(duì)象進(jìn)行48小時(shí)的溫度為4度的冷藏預(yù)處理；花托誘導(dǎo)基的選擇所選擇的培養(yǎng)基配方為1/2MS+6-BA 10mg/L+NAA 0.5mg/L+蔗糖30g/L+瓊脂7g/L，PH值控制在5.8左右；培養(yǎng)條件及方式為先7天黑暗預(yù)培養(yǎng)后轉(zhuǎn)入正常光照培養(yǎng)，光照強(qiáng)度為1500-2000lx，光照時(shí)間14h/d，溫度23-25℃直至育成種苗。提高花托的愈傷組織的誘導(dǎo)率和不定芽的分化率。
文檔編號(hào)A01H4/00GK102499081SQ20111032647
公開(kāi)日2012年6月20日 申請(qǐng)日期2011年10月24日 優(yōu)先權(quán)日2011年10月24日
發(fā)明者鐘海豐, 黃宇翔 申請(qǐng)人:清流縣鴻翔農(nóng)莊農(nóng)業(yè)發(fā)展有限公司