專利名稱：十三酸在防治南方根結線蟲方面的應用的制作方法
十三酸在防治南方根結線蟲方面的應用技術領域
本發明屬農業技術領域。涉及一種脂肪酸化合物一十三酸在防治南方根結線蟲方面的應用。
背景技術：
根結線蟲是世界范圍內的重要病原生物之一，它給世界農業生產帶來了嚴重損失，每年全世界因此而造成的農業經濟損失高達1570億(Abad, P, Gouzy, J, Aury, J. M., et al. Genome sequence of the metazoan plant-parasitic nematode Meloidogyne incognita. Nat. Biotechnol. 2008，26，909-915)。目前世界上已經報道的根結線蟲有90余種，而南方根結線蟲(Meloidogyne incognita)、爪睡根結線蟲(M. javanica),花生根結線蟲(M. arenaria)和北方根結線蟲(M. hap I a)占整個根結線蟲的95% (武揚,鄭經武,商晗武.根結線蟲分類和鑒定途徑及進展.浙江農業學報.2005，17:106-110)。南方根結線蟲造成設施生產的一系列問題并使其大量經濟作物減產。而在我國北方，以南方根結線蟲為主，根結線蟲的寄主植物范圍廣泛，超過3000中植物，包括單子葉植物，雙子葉植物，草本植物，木本植物，特別是蔬菜中的茄科、葫蘆科等經濟價值高的作物，尤其是番茄和黃瓜，受害后，一般可造成減產30% 40%，甚至絕收(彭德良.蔬菜線蟲病害的發生和防治.中國蔬菜.1998，4 57-58)。當前，根結線蟲的防治主要以化學藥品防治為主，但是，由于其對環境、人畜安全的危害，逐漸被立法部門取消。所以，安全有效、低毒的藥品及防治方法迫在眉睫。
根結線蟲主要包括六個生育期，而在線蟲的二齡期，利用發達的受神經支配的頭感器，通過頭部的嗅覺神經元(AWA，AffC)來感知根系散發出的信號物質，向寄主植物進行趨向性遷移，侵染植物，從而完成其生命周期(Cortese M R. The expression of the homologue of the Caenorhabditis elegans lin—45 raf is regulated in the motile stages of the plant parasitic nematode Meloidogyne artiellia. Molecular and Biochemical Parasitology，2006，149 :38 47)。因此，在根結線蟲的二齡期，可以通過干擾根結線蟲的趨向性迀移，起到線蟲防治的目的。十三酸，合成步驟簡單，而且制藥方面均有諸多應用，因此，十三酸作為有機酸，低毒，作為防治線蟲的材料，對環境、人畜友好。
《植物保護》2011年第37卷第2期99-102頁公開了名為“有機酸類化合物對南方根結線蟲的生物活性”的文章。該文章中采用室內離體測定方法，測試了 15種有機酸對南方根結線蟲(Meloidogyne incognita) 2齡幼蟲致死率和卵孵化抑制率。結果表明，甲酸和丙酸對2齡幼蟲和卵的生物活性最高，明顯優于其他供試有機酸，但是活性低于對照藥劑阿維菌素。對生物活性結果及有機酸化學結構進行比對發現，小分子量化合物對南方根結線蟲具有較高生物活性。然而，小分子的化合物雖然對南方根結線蟲具有較高的生物活性， 但是小分子的化合物及其不穩定，易揮發，對作物的生長造成極大的危害，而且加速土壤環境的酸化。而大分子的脂肪酸，例如，十三相對穩定，存在多種植物體，對人畜、環境相對安全，并且，對南方根結線蟲的運動表現出可調控性，并用致死的效應，因此，在南方根結線蟲防治方面表現出更多的潛力。發明內容
為克服上述缺陷，本發明的目的在于，提供一種十三酸在防治南方根結線蟲方面的應用。
所述應用為將十三酸溶于甲醇中，可作為驅避劑或弓I誘劑。
所述十三酸濃度在0. 50 4mM。
所述十三酸濃度范圍為I. OOmM至4. OOmM時，吸引南方根結線蟲的二齡幼蟲并造成致死，可作為引誘劑。
十三酸濃度范圍為0. 5mM時，對南方根結線蟲的二齡幼蟲具有趨避作用，可作為驅避劑。
本發明中，發現十三酸通過調節南方根結線蟲的二齡的趨向性運動，并對線蟲造成致死效應，十三酸具有材料來源豐富，合成方法簡單，低毒，對人畜、環境安全的優點，可用于有機合成，及藥物制備，并且，十三酸除驅避南方根結線蟲外，還可作為陷阱引誘劑，將線蟲吸引過來，并將其致死，具有加廣泛的用途及生態意義。
本發明，在實驗室的條件下，驗證十三酸通過調控南方根結線蟲的趨向性遷移來防治線蟲，并為南方根結線蟲防治效果提供強有力的數據支持。


圖I示出了十三酸對南方根結線蟲趨向性的影響。
圖2示出了不同濃度十三酸對南方根結線蟲死亡率的影響。
具體實施方式
下面結合具體實施例，進一步詳細描述本發明。應理解，這些實施例只是為了舉例說明本發明，而非以任何方式限制本發明的范圍。
實施例中使用的十三酸(CAS =638-53-9)購買自sigma公司，采用的甲醇為色譜純甲醇。
下列實施例采用不同濃度的十三酸溶液處理南方根結線蟲的二齡幼蟲，利用趨向性指數，線蟲死亡率，從生理數據來說明十三酸作為南方根結線蟲驅避劑或引誘劑的效果。
實施例I
將色譜純甲醇配成濃度為4. OOmM的儲存液，并用色譜純甲醇稀釋成濃度為0.50mM的十三酸溶液，并保存于_20°C冰箱。
實驗室的模擬試驗，按照Ward (Ward Samuel. Chemotaxis by the nematode Caenorhabditis elegans -Identification of attractants and analysis of the response by use of mutants. Proc. Nat. Acad. Sci. USA. 1973，70，817-821)和 Bargmann 等(Bargmann C. I.，Hartweig E.，Horvitz H. R. Odorant selective genes and neurons mediate olfaction in C. elegans. Cell，1993，74，515-527)所提供的方法，米用直徑為 6cm的培養皿，于對角線位置，分別在距離邊緣Icm標記直徑為Icm的圓。每個培養皿中加入IOml 0.8%的瓊脂。在標記雙圈的培養皿中，一側圈內加入IOml的色譜純甲醇，另一側加入IOml的0. 5mM的十三酸溶液。加入化合物后的培養皿，放入25°C培養箱中避光孵化2h，在每個培養皿的中間部位，與兩側的圓等距的位置，加入50條剛孵化出的南方根結線蟲的二齡幼蟲，25°C培養箱避光孵化3h,按照Bargmann和Horvitz (Bargmann C. I., Horvitz H. R. Chemosensory neurons with overlapping functions direct chemotaxis to multiple chemicals in C. elegans. Neuron, 1991, 7, 729-742)的方法統計趨向性指數 (Chemotaxis Index),其計算方法為添加十三酸溶液圓中線蟲的數量與添加甲醇溶劑圓中線蟲數量的比值；趨向性指數> 0. 2時，為吸引；0彡趨向性指數< 0. 2時，為微弱吸引， 趨向性指數<-0. 02時，為排斥。并且，統計二齡幼蟲的死亡率，死亡率的計算方法為運動到添加不同濃度十三酸溶液圓中線蟲死亡數與圓中線蟲總數的比值。
實施例2
除了配制的十三酸溶液的濃度為ImM外，其余同實施例I。
實施例3
除了配制的十三酸溶液的濃度為2mM外，其余同實施例I。
實施例4
除了配制的十三酸溶液的濃度為4mM外,其余同實施例I。
由說明書附圖I中示出得結果表明，十三酸對南方根結線蟲的作用表現為低濃度趨避，隨著濃度的增加，微弱吸引線蟲。當十三酸濃度為0. 50mM時，十三酸對南方根結線蟲表現顯著的驅避作用，而隨著濃度的增加，十三酸對南方根結線蟲開始吸引，趨向性指數隨著濃度的增加而增大，指數范圍為0. 06-0. 13。
由說明書附圖2中示出得結果表明，在我們試驗濃度范圍內，南方根結線蟲的死亡率隨著十三酸濃度的增加而增加。十三酸濃度為0. 05mM時，十三酸對南方根結線蟲沒有致死的效應，而濃度I. OOmM至4. OOmM范圍，線蟲的死亡率范圍為0. 07-0. 62。
生理數據表明0. 50mM的十三酸作為驅避劑，趨避線蟲；而濃度范圍為I. OOmM至4.OOmM范圍內，十三酸為南方根結線蟲的引誘劑，吸引南方根結線蟲，并致死，致死率高達 62. 0%。
權利要求
1.十三酸在防治南方根結線蟲方面的應用。
2.根據權利要求I所述的十三酸在防治南方根結線蟲方面的應用，其特征在于，十三酸溶于甲醇中，作為驅避劑或弓I誘劑。
3.根據權利要求2所述的十三酸在防治南方根結線蟲方面的應用，其特征在于，所述十三酸濃度在0. 50 4mM。
4.根據權利要求2所述的十三酸在防治南方根結線蟲方面的應用，其特征在于，所述十三酸濃度范圍為I. OOmM至4. OOmM時，作為引誘劑。
5.如權利要求2所述的十三酸在防治南方根結線蟲方面的應用，其特征在于，十三酸濃度范圍為0. 5mM時，作為驅避劑。
全文摘要
本發明提供一種十三酸在防治南方根結線蟲方面的應用，其是將十三酸溶于甲醇中，所述十三酸濃度在0.50～4mM，所述十三酸濃度范圍為1.00mM至4.00mM時，吸引南方根結線蟲的二齡幼蟲并造成致死，可作為引誘劑；十三酸濃度范圍為0.5mM時，對南方根結線蟲的二齡幼蟲具有趨避作用，可作為驅避劑。本發明中使用的十三酸來源豐富，低毒，對人畜、環境安全，并且，防治效果顯著提高。
文檔編號A01N37/02GK102524254SQ20111044506
公開日2012年7月4日 申請日期2011年12月27日 優先權日2011年12月27日
發明者左元梅, 李曉林, 董林林, 陳清 申請人:中國農業大學