專利名稱：利用葉柄獲得胭脂花體細胞再生植株的方法及其培養基的制作方法
技術領域：
本發明涉及一種利用葉柄獲得胭脂花體細胞再生植株的方法及其培養基。
背景技術：
胭脂花(Primula maximowiczii),別名段報春,蒙名為套日格-哈布日西勒-其其格，屬報春花科(Primulaceae)報春花屬(Primula),為一種早春開花的多年生草本野生花卉。主要分布于我國東北、華北至西北的亞高山草甸及較高山林地下、林緣和潮濕腐殖質豐富的地方，其觀賞價值高，是一種很有園林開發價值的野生花卉。胭脂花還是一種野生的蒙藥藥用植物，據《新華本草綱要》記載，全草可以入藥，有止痛、祛風的功能，可用于治療癲癇 頭痛。由于胭脂花分布海拔較高，入藥需求量較大，近年來已日益匱乏。目前，有關胭脂花的研究工作主要集中在種子萌發條件、不同條件對胭脂花生長發育的影響、染色體核型觀察及化學成分等，有關胭脂花的離體培養研究很少。

發明內容
本發明的一個目的是提供一種用于獲得胭脂花(Primula maximowiczii)體細胞再生植株的成套培養基，含有獨立包裝的培養基A ;所述培養基A為由MS培養基、2，4- 二氯苯氧乙酸和噻苯隆制成的固體培養基；所述2，4-二氯苯氧乙酸在所述培養基A中的含量為
I.Omg/L一2. Omg/L ;所述噻苯隆在所述培養基A中的含量為I. Omg/L一4. 0mg/L。在上述成套培養基中，所述2，4- 二氯苯氧乙酸在所述培養基A中的含量具體可為
1.0mg/L 或 2. 0mg/Lo在上述成套培養基中，所述噻苯隆在所述培養基A中的含量具體可為I. 0mg/L、
2.0mg/L 或 4. 0mg/Lo在上述成套培養基中，所述成套培養基還含有獨立包裝的培養基B ;所述培養基B為由MS培養基、2，4- 二氯苯氧乙酸和6-芐氨基腺嘌呤制成的固體培養基；所述2，4- 二氯苯氧乙酸在所述培養基B中的含量為4. 0mg/L,所述6-節氨基腺嘌呤在所述培養基B中的含量為2. 0mg/L。在上述成套培養基中，所述MS培養基為表I所不的培養基。本發明的另一個目的是提供一種獲得胭脂花(Primula maximowiczii)體細胞再生植株的方法，包括將所述胭脂花的葉柄用所述培養基A培養獲得所述胭脂花的不定芽，最后獲得所述胭脂花的再生植株。在上述方法中，所述胭脂花的葉柄取自株高為2_3cm的所述胭脂花實生苗。在上述方法中，還包括將所述胭脂花不定芽用所述培養基B進行擴繁培養的步驟。在上述方法中，還包括將所述胭脂花不定芽用不含植物生長調節劑的MS培養基進行生根培養的步驟。在上述方法中，所述培養的光照和溫度條件如下每天24小時中光照16小時，光照強度為1500-2000LUX，其余時間為黑暗，溫度為25°C。實驗證明,將胭脂花(Primula maximowiczii)葉柄外植體在含不同濃度植物生長調節劑2，4-D (I. 0-2. Omg/L)和TDZ (I. 0-4. Omg/L)組合的MS培養基中進行誘導，不定芽誘導率在19. 0%—52. 4%之間，明顯高于含單一的植物生長調節劑2，4-D (I. 0-4. Omg/L)或TDZ (I. 0-4. Omg/L)的MS培養基的不定芽誘導率2. 4% —19. 0%。在含2，4-D 4. 0mg/L和6-BA 2. 0mg/L的MS培養基中進行不定芽擴繁培養，擴增系數可達9. 2。本發明以胭脂花葉柄為外植體，建立了完整穩定的胭脂花體細胞再生體系，對有效保護和利用野生胭脂花資源具有重要價值。


圖I為本發明使用的胭脂花(Primula maximowiczii)無菌實生苗。圖2為胭脂花葉柄外植體在不定芽誘導培養基上培養14天產生的不定芽。圖3為胭脂花不定芽經擴繁培養14天產生的叢生不定芽。圖4為胭脂花不定芽經生根培養獲得的再生苗。圖5為移栽成活的胭脂花再生植株。
具體實施例方式下述實施例中所使用的實驗方法如無特殊說明，均為常規方法。下述實施例中所用的材料、試劑等，如無特殊說明，均可從商業途徑得到。胭脂花(Primula maximowiczii):中央民族大學；參考文獻毛娟娟，潘會堂，唐明.光質對胭脂花幼苗成長的影響.安徽農業科學.2009, 37(17) :7961-7962.TDZ :中文名稱噻苯隆，化學名稱N-苯基-N’ _1，2，3_噻二唑_5_脲，北京普博欣生物科技有限責任公司生產，純度> 99%。2，4-D :化學名稱2，4_ 二氯苯氧乙酸，北京普博欣生物科技有限責任公司生產，純度 > 99%o6-BA :化學名稱6-芐氨基腺嘌呤，北京普博欣生物科技有限責任公司生產，純度> 99%。下述實施例中MS培養基的組成如表I所示表I. MS培養基組成(pH5. 8)
權利要求
1.用于獲得胭脂花(Primulamaximowiczii)體細胞再生植株的成套培養基,含有獨立包裝的培養基A ;所述培養基A為由MS培養基、2，4- 二氯苯氧乙酸和噻苯隆制成的固體培養基；所述2，4-二氯苯氧乙酸在所述培養基A中的含量為I. Omg/L—2. Omg/L ;所述噻苯隆在所述培養基A中的含量為I. Omg/L—4. Omg/L。
2.根據權利要求I所述的成套培養基，其特征在于所述2，4-二氯苯氧乙酸在所述培養基A中的含量為I. Omg/L或2. Omg/L。
3.根據權利要求I或2所述的成套培養基，其特征在于所述噻苯隆在所述培養基A中的含量為 I. Omg/L、2. Omg/L 或 4. Omg/L。
4.根據權利要求1-3中任一所述的成套培養基，其特征在于所述成套培養基中含有獨立包裝的培養基B ;所述培養基B為由MS培養基、2，4- 二氯苯氧乙酸和6-芐氨基腺嘌呤制成的固體培養基；所述2，4-二氯苯氧乙酸在所述培養基B中的含量為4. Omg/L，所述.6-芐氨基腺嘌呤在所述培養基B中的含量為2. Omg/L。
5.獲得胭脂花(Primulamaximowiczii)體細胞再生植株的方法,包括將所述胭脂花的葉柄用權利要求1-3中任一所述的培養基A培養獲得所述胭脂花不定芽，最后獲得所述胭脂花的再生植株。
6.根據權利要求5所述的方法，其特征在于所述胭脂花的葉柄取自株高為2-3cm的所述胭脂花實生苗。
7.根據權利要求5或6所述的方法，其特征在于所述方法包括將所述胭脂花不定芽用權利要求4所述的培養基B進行擴繁培養的步驟。
8.根據權利要求5-7中任一所述的方法，其特征在于所述方法包括將所述胭脂花不定芽用不含植物生長調節劑的MS培養基進行生根培養的步驟。
9.根據權利要求5-8中任一所述的方法，其特征在于所述培養的光照和溫度條件如下每天24小時中光照16小時，光照強度為1500-2000LUX，其余時間為黑暗，溫度為25°C。
全文摘要
本發明公開了一種利用葉柄獲得胭脂花體細胞再生植株的方法及其培養基。將胭脂花(Primula maximowiczii)葉柄外植體在含不同濃度植物生長調節劑2,4-D(1.0-2.0mg/L)和TDZ(1.0-4.0mg/L)組合的MS培養基中進行誘導的不定芽誘導率在19.0%—52.4%之間，明顯高于含不同單一的植物生長調節劑2，4-D(1.0-4.0mg/L)或TDZ(1.0-4.0mg/L)的MS培養基的不定芽誘導率2.4%—19.0%。在含2,4-D 4.0mg/L和6-BA 2.0mg/L的MS培養基中進行不定芽擴繁培養，擴增系數可達9.2。本發明以胭脂花葉柄為外植體，建立了完整穩定的胭脂花體細胞再生體系，對有效保護和利用野生胭脂花資源具有重要價值。
文檔編號A01H4/00GK102715083SQ20121018548
公開日2012年10月10日 申請日期2012年6月6日 優先權日2012年6月6日
發明者劉坤, 宋韻霏, 張璐, 李建飛, 畢凱麗, 王俊麗, 王前 申請人:中央民族大學