專利名稱：產高絲氨酸內酯的乙酸鈣不動桿菌ta221菌株及其應用的制作方法
技術領域：
本發明涉及生物技術領域，涉及一株分離至煙草葉際的能產生高絲氨酸內酯的乙酸鈣不動桿菌TA221，及其在生物防治領域中的應用。
背景技術：
在現代農業生產中大量施用化學農藥等手段防止植物病害的做法，已經造成嚴重的環境污染，以及隨之產生的生態風險足以引起人們的關注。食品蔬菜的高農藥殘留嚴重影響到人的健康，另外大量殘余農藥的面源污染造成嚴重的鏈式反應，帶來的生態環境污染是不可低估的。對有害生物進行可持續控制和無公害治理已日益受到人們的關注，并成為一個活躍的研究領域，為發展可持續農業奠定基礎。抗病害的轉基因植物的改造在一定程度上減少了對化學農藥的依賴，減少了化學農藥的環境污染。盡管有些轉基因作物已經進入大田試驗并逐步進入大規模商業化，但多 數國家和政府還是持較為謹慎的態度。在我國盡管批準了個別的轉基因作物的種植，但轉基因作物的生態風險，如基因的橫向轉移、生物多樣性的變化、轉基因作物的蔓延等一些問題，值得引起人們足夠的重視。微生物農藥是另一種控制植物等病害的有效方式之一，由于微生物農藥具有一定的環境效益和社會效益，各國政府持積極的支持態度，我國在控制植物病害的微生物資源開發、微生物農藥種類、生產技術和規模，特別是推廣應用方面已躋身世界先進水平。然而在微生物農藥的劑型和質量上，我們同國外相比尚有一定的差距，特別是在新型生物防治產品研制領域幾乎是空白。

發明內容
本發明的目的是提供一株產高絲氨酸內酯的葉際微生物資源，本發明的另一目的是公開該微生物資源在植物病害防治中的應用。本發明所述的乙酸鈣不動桿菌TA221菌株，分離篩選自煙草植物葉面。TA221菌株保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏編號為CGMCC No. 4895，分類命名為乙酸I丐不動桿菌(Acinetobacter calcoaceticus)。保藏日期為2011年05月25日，保藏地址為北京市朝陽區北辰西路I號院3號中國科學院微生物研究所。本發明所述的乙酸鈣不動桿菌TA221菌株的應用如下I、培養基配制I)菌種保藏培養基蛋白胨蛋白胨10g，酵母浸粉5g，氯化鈉5g，瓊脂20g，加水至1L, ρΗ7· 0-7. 5 ；2)發酵培養基蛋白胨蛋白胨10g，酵母浸粉5g，氯化鈉5g，瓊脂20g，加水至1L，ρΗ7· 0-7. 5 ;以上培養基均在121°C滅菌15_30min ；2、菌種活化挑取菌株CGMCC No. 4895至菌種保藏培養基，多次劃線，30°C培養過夜；挑取單菌落接種于發酵培養基，30°C，200r/min培養12_15h ；
3、菌劑制備將步驟2活化的菌種液體，按照10%的接種量接種發酵培養基，30°C，通氣培養12-20h，得到活菌培養物；加入質量份數在2% -5%范圍內的甘油，罐裝保藏；使用時用水稀釋100倍，噴灑植株。
具體實施例方式本發明使用的菌株，操作簡單，其可以很好的在植物表面定殖，表現出良好的穩定性和防治效果的延續性。以下將將結合具體實施例對本發明作進一步的說明，目的在于幫助讀者更好的理解本發明的精神實質，但不作為對本發明實施范圍的限定。實施例I :本發明所述的乙酸鈣不動桿菌TA221菌劑的生產I、培養基配制I)菌種保藏培養基蛋白胨蛋白胨10g，酵母浸粉5g，氯化鈉5g，瓊脂20g，加水至1L, ρΗ7· 0-7. 5 ； 2)發酵培養基蛋白胨蛋白胨10g，酵母浸粉5g，氯化鈉5g，瓊脂20g，加水至1L，ρΗ7· 0-7. 5 ；以上培養基均在121°C滅菌15_30min ;2、菌種活化挑取菌株CGMCC No. 4895至菌種保藏培養基，多次劃線，30°C培養過夜；挑取單菌落接種于發酵培養基，30°C，200r/min培養12_15h ；3、菌劑制備將步驟2活化的菌種液體，按照10%的接種量接種發酵培養基，30°C，通氣培養12-20h，得到活菌培養物；加入質量份數在2% -5%范圍內的甘油，罐裝保藏。實施例2 乙酸鈣不動桿菌TA221對煙草野火病害的防治乙酸鈣不動桿菌TA221制備成菌懸液(稀釋100倍的菌劑)噴灑在煙草葉片上，自然晾干。按照常規植物病原菌接種方法，接種不同濃度的丁香假單胞菌(Pseudomonassyringae pv. tabaci),每個處理3個重復,接種后記錄發病情況。實驗結果表明，接種丁香假單胞菌3天后，當接種劑量為105CFU/mL濃度時已經引起對照組煙草產生強烈的病變。而對于噴灑了乙酸鈣不動桿菌TA221的實驗組煙草，當丁香假單胞菌的接種量在107CFU/mL濃度時煙草表現出微弱的病變。實驗結果表明，乙酸鈣不動桿菌TA221對丁香假單菌的防治效果明顯。
權利要求
1.產高絲氨酸內酯的乙酸鈣不動桿菌TA221菌株，其特征在于，該菌株是一株乙酸鈣不動桿菌(Acinetobacter calcoaceticus),保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏編號=CGMCC No. 4895。
2.用權利要求I所述的乙酸鈣不動桿菌TA221菌株防治植物病害，其特征在于，利用生產的微生物菌劑防治植物病害，具體包括 (1)培養基配制 1)菌種保藏培養基蛋白胨蛋白胨10g，酵母浸粉5g，氯化鈉5g，瓊脂20g，加水至1L，ρΗ7· 0-7. 5 ； 2)發酵培養基蛋白胨蛋白胨10g，酵母浸粉5g，氯化鈉5g，瓊脂20g，加水至1L，ρΗ7· 0-7. 5 ;以上培養基均在121°C滅菌15_30min ； (2)菌種活化挑取菌株CGMCCNo. 4895至菌種保藏培養基，多次劃線，30°C培養過夜；挑取單菌落接種于發酵培養基，30°C，200r/min培養12_15h ； (3)菌劑制備將步驟(2)活化的菌種液體，按照10%的接種量接種發酵培養基，30°C，通氣培養12-20h，得到活菌培養物；加入質量分數在2% -5%范圍內的甘油，灌裝保藏；使用時用水稀釋100倍，噴灑植株。
全文摘要
本發明涉及一株從高等植物植株上分離得到的乙酸鈣不動桿菌TA221，該菌株可以產高絲氨酸內酯，防治植物病害，屬生物技術領域。經鑒定該菌株是一株乙酸鈣不動桿菌(Acinetobacter calcoaceticus)，保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏編號CGMCC No.4895。該菌株在施用過程中可以很好的在植物表面定殖，表現出良好的穩定性和防治效果的延續性，在植物病害防治上具有很好的應用前景。
文檔編號A01G13/00GK102864101SQ20121030603
公開日2013年1月9日 申請日期2012年8月24日 優先權日2012年8月24日
發明者馬安周, 呂迪, 鄧雪梅, 高婕, 莊國強 申請人:中國科學院生態環境研究中心