專利名稱：一種系列優(yōu)質(zhì)蛋白加工專用型大豆種質(zhì)的創(chuàng)制新方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于作物遺傳育種和品質(zhì)改良與利用領(lǐng)域，涉及一種系列優(yōu)質(zhì)蛋白加工專用型大豆種質(zhì)的創(chuàng)制新方法。
背景技術(shù)：
大豆種子蛋白和油脂含量分別約占種子干重的40%和20%。大豆種子蛋白的利用不僅僅是利用其營養(yǎng)性，如其含有人體必需的8種氨基酸，具有抗腫瘤、增強(qiáng)免疫力、預(yù)防心血管病等功能，而更重要的是利用其加工特性-功能性，如凝膠性、乳化性、起泡性、持油性、持水性等來改善食品的質(zhì)構(gòu)和營養(yǎng)性。后者在食品加工業(yè)中尤為重要，如肉制品需利用大豆蛋白的持油性和持水性，蛋糕行業(yè)需利用大豆蛋白的起泡性、飲料行業(yè)需利用大豆蛋白的乳化性等等。因此，近年來具不同營養(yǎng)性和功能性的大豆蛋白產(chǎn)品已成為國內(nèi)外食品加工業(yè)重要配料或添加劑，需求量日增。 大豆種子貯藏蛋白主要由7S和IlS組分構(gòu)成，合計(jì)占種子貯藏蛋白80%以上。7S組分主要由α '、α和β三種亞基(β-伴大豆球蛋白)所構(gòu)成，IlS組分主要由AlaB2、A2Bla, AlbBlb、A5A4B3、A3B4等五個(gè)亞基(大豆球蛋白)組成。由于7S和IlS組分及其亞基在營養(yǎng)性和功能性方面存在較大差異，如HS組分含硫氨基酸含量比7S組分高，并含有豐富的二硫鍵及-SH，它所形成的凝膠硬度強(qiáng)；7S組分二硫鍵和-SH少，所以凝膠的硬度低，但因賴氨酸含量比IlS組分高，疏水性氨基酸多，表面活性強(qiáng)，因而乳化性好；蛋白的11S/7S比值愈低乳化性愈好，愈高則凝膠性愈好；、α和β不僅在氨基酸組成上不同，而且具不同的熱穩(wěn)定性；AlbBlb、AlbB2> A2Bla, A3B4, A5A4B3會不同程度地影響凝膠形成的速度、硬度和濁度；A3亞基有助于提高凝膠的硬度等等。因此，大豆蛋白產(chǎn)品營養(yǎng)性和功能性的多樣性和優(yōu)良程度，一方面取決于食品加工層次上的蛋白加工技術(shù)，而更重要的是取決于原料7S和IlS組分的亞基及其氨基酸構(gòu)成、比例(11S/7S比值)和特性，這種理念已成為國內(nèi)外大豆蛋白加工界和大豆育種界的共識。為了實(shí)現(xiàn)大豆優(yōu)良蛋白育種與加工利用的有機(jī)結(jié)合，多年來大豆蛋白加工發(fā)達(dá)國家都是從大豆育種界與大豆蛋白加工界的連接樞紐-大豆品種(原料)入手，通過發(fā)掘和創(chuàng)制各種類型的大豆主要貯藏蛋白亞基缺失種質(zhì)，經(jīng)聚合育種等方法來改變品種7S和IlS組分的亞基構(gòu)成，創(chuàng)制各種類型的亞基組合(具不同11S/7S比值)材料，如7S全缺(僅含IlS組分)、11S全缺(僅含7S組分)以及亞基單缺、雙缺、三缺、四缺等系列，同時(shí)圍繞這些材料展開相關(guān)分子、遺傳育種和加工利用等基礎(chǔ)研究；然后在此基礎(chǔ)上研發(fā)相應(yīng)的大豆蛋白精深加工技術(shù)，開發(fā)出了幾十種功能性(營養(yǎng)性)大類以及100多個(gè)功能性(營養(yǎng)性)亞類的大豆蛋白產(chǎn)品，實(shí)現(xiàn)了產(chǎn)品營養(yǎng)性和功能性的優(yōu)質(zhì)化、多樣化和應(yīng)用的專門化。相比較而言，我國在大豆蛋白育種和蛋白加工領(lǐng)域的落后不僅體現(xiàn)在大豆蛋白加工專用型品種選育和原料加工特性掌握上的落后，而且也體現(xiàn)在蛋白加工技術(shù)上的落后，從而導(dǎo)致①各種亞基組合類型的蛋白加工專用型大豆品種的缺乏；②我國自建、合資、獨(dú)資大豆蛋白企業(yè)產(chǎn)品品種單一、功能性差，許多產(chǎn)品類型還不能生產(chǎn)，難以滿足國內(nèi)食品工業(yè)的需求，需大量進(jìn)口 ；③傳統(tǒng)蛋白制品在進(jìn)一步提高營養(yǎng)性和功能性等方面開發(fā)上落后于國外等。因此，要想盡快突破此困境，必須借鑒發(fā)達(dá)國家在此領(lǐng)域的成功經(jīng)驗(yàn)，充分利用我國大豆種質(zhì)資源中蘊(yùn)藏的豐富蛋白亞基缺失體材料，首先從大豆育種界與大豆蛋白加工界的連接樞紐-大豆品種(原料)培育上入手來實(shí)現(xiàn)突破，創(chuàng)制和培育各種亞基組合類型的蛋白加工專用型大豆品種，從而推動我國大豆蛋白加工業(yè)的發(fā)展，這尤顯迫切和必要。大豆蛋白及其產(chǎn)品的營養(yǎng)性和功能性主要取決于7S和IlS組分的亞基及其氨基酸構(gòu)成、比例(11S/7S比值)和特性，因此，通過對7S和IlS組分不同亞基的缺失(形成不同亞基組合以及11S/7S比值)來改變大豆蛋白及其產(chǎn)品的營養(yǎng)性和功能性是最有效、最經(jīng)濟(jì)的途徑。為此，國外許多研究者對大豆籽粒7S和IlS組分亞基缺失體作了大量的篩選和創(chuàng)制。如日本的Kitamura等(1981)首先利用SDS-PAGE對1700份大豆種質(zhì)進(jìn)行鑒定分析， 發(fā)現(xiàn)毛振和公503不僅缺失β-伴大豆球蛋白的α '亞基，而且α和β亞基含量減半。隨后其它日本研究者通過從資源中篩選和利用輻射和誘變方法獲得了 7S和IlS組分不同亞基缺失的材料。利用這些缺失體材料，他們經(jīng)多年的努力，創(chuàng)制了一系列具不同亞基組合的材料，如7S和IlS全缺、7S缺失(僅含11S)、11S缺失(僅含7S)、單缺、雙缺、三缺、四缺等，獲得了具不同營養(yǎng)性和功能性的一系列蛋白原料。這些優(yōu)異的不同亞基組合的大豆材料的創(chuàng)制和掌握，有力地推動了這些國家優(yōu)異蛋白加工專用型大豆品種的培育。上世紀(jì)末，我國對大豆種質(zhì)資源貯藏蛋白的研究僅僅停留在對蛋白組分、氨基酸含量，或少量品種7S和IlS含量分析上。進(jìn)入本世紀(jì)后，國內(nèi)許多研究者開展了針對我國大豆種質(zhì)資源中7S和IlS組分含量變異的分析，也有許多研究者篩選獲得了多種蛋白亞基缺失體材料，如α '缺失、α缺失、β缺失、A5A4B3缺失、A3B4缺失等，說明我國大豆種質(zhì)資源中蘊(yùn)藏著豐富的蛋白亞基缺失體資源。由于國外(特別是日本)大多數(shù)蛋白亞基缺失體材料是通過輻射和誘變等創(chuàng)造的，而通過輻射、誘變獲得的亞基缺失體材料往往受隱性基因控制，常伴隨有萎黃病、不育或致死等性狀，只能以異質(zhì)體形式保存。因此，我國大豆種質(zhì)資源中蘊(yùn)藏的自然突變產(chǎn)生的亞基缺失體材料愈顯彌足珍貴，但利用這些材料通過聚合育種，創(chuàng)制各種亞基組合類型的大豆材料(特別是僅含7S、僅含11S、亞基多缺或不同11S/7S比值類型等)目前國內(nèi)尚少報(bào)道。盡管劉珊珊等(2010)已創(chuàng)制了 α缺失、(a+AlaAlbA2)缺失、A3缺失、(a' +A4)缺失和(a ' + a )缺失的種質(zhì),但這些缺失亞基的基因引自日本,且距前述目標(biāo)還有一定距離。鑒于目前國外創(chuàng)制的一些珍稀的亞基缺失體及其聚合材料[如缺失β -伴大豆球蛋白(Scg-I)的材料、7S和IlS全缺材料、僅含IlS材料、僅含7S材料等]，往往是嚴(yán)防外泄的。而據(jù)本項(xiàng)目組對大豆蛋白加工企業(yè)(或公司)、研究所和育種單位等的調(diào)查，僅含HS、僅含7S、蛋白亞基多缺或不同11S/7S比值類型等材料，恰恰又是我國大豆蛋白加工界和大豆育種界迫切需要的優(yōu)異材料。對于我國大豆蛋白加工界來說，利用這些優(yōu)異材料，一來可省去分離7S、11S組分或某些亞基的繁瑣步驟以及組分或亞基間的相互污染，節(jié)約提取成本，提高效率，大量地制備7S和IlS組分及其亞基，進(jìn)而在工藝上通過組分配比獲得不同11S/7S比值的蛋白，生產(chǎn)出不同營養(yǎng)性和功能性的蛋白產(chǎn)品；二來通過直接提取就可獲得極高或極低11S/7S比值的蛋白。而目前，如華南理工大學(xué)Zheng等(2009)為了達(dá)到獲得高純度β_伴大豆球蛋白的目的，是采用陰離子交換層析法和固定化金屬離子親和層析(IMAC)來實(shí)現(xiàn)的，這既對設(shè)備要求高，也不能實(shí)現(xiàn)大量制備或生產(chǎn)。而對于我國大豆育種界來說，利用這些優(yōu)異材料作育種基礎(chǔ)材料，可加快優(yōu)異蛋白加工專用型新品種的培育步伐。因此，如何利用我國大豆種質(zhì)資源中豐富的亞基缺失體材料，自主創(chuàng)制適宜我國各大豆主產(chǎn)區(qū)系列蛋白亞基組合材料，為相應(yīng)加工專用型新品種的培育奠定種質(zhì)基礎(chǔ)，是重中之重之事。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種利用我國大豆種質(zhì)資源中存在的豐富的種子主要貯藏蛋白(7S和IlS組分)亞基缺失基因，通過聚合育種和雜交育種的方式并結(jié)合SDS-PAGE法鑒定和選擇，首先創(chuàng)制出7S組分蛋白亞基缺失種質(zhì)、IlS組分蛋白亞基缺失種質(zhì)以及7S+11S組分蛋白亞基全缺種質(zhì)，進(jìn)而再利用這些創(chuàng)制的特異性種質(zhì)，通過與我國各大豆主產(chǎn)區(qū)(東北春大豆區(qū)、黃海海夏大豆區(qū)、南方多熟制大豆主產(chǎn)區(qū))目前主推品種分別配置雜交組合，通過選擇和穩(wěn)定，最終獲得各種類型的、遺傳穩(wěn)定的7S和IlS組分蛋白亞基單缺、雙缺、三缺、四缺、五缺、六缺、七缺和全缺材料，并進(jìn)而培育成品系，從而加快我國蛋白加工專用型大豆品種的培育進(jìn)程，并彌補(bǔ)我國目前大豆蛋白加工專用型創(chuàng)新種質(zhì)的匱缺，為我國大豆蛋白加工利用提供優(yōu)質(zhì)原材料的新方法。 本發(fā)明的目的可通過如下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)I. 一種系列優(yōu)質(zhì)蛋白加工專用型大豆種質(zhì)的創(chuàng)制與應(yīng)用的新方法。其特征在于首先采用SDS-PAGE電泳方式從我國大豆種質(zhì)資源中篩選出種子主要貯藏蛋白(7S和IlS組分)亞基缺失種質(zhì)；其二，再利用篩選獲得的種子主要貯藏蛋白(7S和IlS組分)亞基缺失基因，通過聚合育種和雜交育種的方式并結(jié)合SDS-PAGE法鑒定和選擇，創(chuàng)制出7S組分蛋白亞基(α ' +α+β)缺失種質(zhì)、IlS組分蛋白亞基缺失種質(zhì)以及7S+11S組分蛋白亞基全缺種質(zhì)；其三，再以7S組分蛋白亞基(α ' +α+β)缺失種質(zhì)、IlS組分蛋白亞基缺失種質(zhì)以及7S+11S組分蛋白亞基全缺種質(zhì)為親本，與我國各大豆主產(chǎn)區(qū)(東北春大豆區(qū)、黃海海夏大豆區(qū)、南方多熟制大豆主產(chǎn)區(qū))目前主推品種分別配置雜交組合，通過選擇和穩(wěn)定，最終獲得各種類型的、遺傳穩(wěn)定的7S和IlS組分蛋白亞基單缺、雙缺、三缺、四缺、五缺、六缺、七缺和全缺材料，并進(jìn)而培育成品系，從而為大豆蛋白加工利用提供優(yōu)質(zhì)專用型加工原料。其中7S組分特指其中的β_伴大豆球蛋白成分(所含亞基為α '、α和0)，11S組分特指AlaB2、A2Bla' AlbBlb、A5A4B3 和 A3B4 亞基。2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的一種系列優(yōu)質(zhì)蛋白加工專用型大豆種質(zhì)的創(chuàng)制與應(yīng)用的新方法，其特征在于具體方法包括(I)大豆種子主要貯藏蛋白亞基缺失種質(zhì)的篩選①大豆脫脂豆粉的制備將從國內(nèi)各地方收集到的大豆種質(zhì)資源，分別播種收獲，種子曬干，磨碎成豆粉；用正乙烷(或乙醚、或丙酮)脫脂2-3次，每次所加溶劑的量以超過豆粉表面5-10mm為宜，加后攪拌均勻(5min)，抽濾、風(fēng)干，即得脫脂豆粉。②大豆忙藏蛋白的提取1. Og脫脂豆粉加20ml 50mmol/L的Tris-HCl (pH8. O,含有O.Olmol/L 2-巰基乙醇)緩沖液，在室溫下提取I小時(shí)，離心(10000 X g, 20min, 4°C )后取上清用INHCl調(diào)pH至4. 50，再離心(2500 X g，15min，4°C )后棄上清，沉淀經(jīng)真空低溫干燥后即得大豆種子貯藏蛋白粉。③電泳樣品的準(zhǔn)備稱取I. 5mg大豆種子貯藏蛋白粉，加入500 μ I樣品緩沖液(I % SDS,O. lmol/LTris-HCl,O. 01mol/L β -巰基乙醇,0. lg/L 溴酌·藍(lán)，150g/L 鹿糖，pH8. 0)，4°C下過夜，點(diǎn)樣前渦旋混勻。④SDS-PAGE法采用不連續(xù)垂直板狀凝膠電泳。凝膠厚度1mm，濃縮膠濃度為5 %，分離膠濃度為12%，電極緩沖液為Tris-甘氨酸系統(tǒng)(O. 025 M Tris-HCl，O. 192M甘氨酸，
O.I % SDS)。電泳在4°C下進(jìn)行，電泳開始設(shè)置為恒流20mA/膠，待溴酚藍(lán)帶進(jìn)入分離膠時(shí)，電流加倍。當(dāng)溴酚藍(lán)帶指示劑距玻璃板下沿Icm處時(shí)，結(jié)束電泳。采用O. 2%考馬斯亮藍(lán)R-250染色液(水甲醇醋酸=50 43 7)染色30min，脫色液(水甲醇醋酸=17 : 2 : I)中脫色過夜。⑤大豆種子主要貯藏蛋白亞基缺失種質(zhì)的識別依據(jù)大豆種子主要貯藏蛋白亞基標(biāo)準(zhǔn)電泳圖譜，從收集到的大豆種質(zhì)資源中鑒定出主要 貯藏蛋白(7S和IlS組分)亞基缺失種質(zhì)，包括7S組分α '亞基缺失種質(zhì)、α亞基缺失種質(zhì)、β亞基缺失種質(zhì)，IlS組分AlaB2亞基缺失種質(zhì)、A2Bla亞基缺失種質(zhì)、AlbBlb亞基缺失種質(zhì)、A5A4B3亞基缺失種質(zhì)和A3B4亞基缺失種質(zhì)。⑥對從資源中鑒別出的主要貯藏蛋白(7S和IlS組分)亞基缺失種質(zhì)，采用多年(至少2年)多點(diǎn)(至少2個(gè)試驗(yàn)地點(diǎn))試驗(yàn)方式，觀察其蛋白亞基缺失的遺傳穩(wěn)定性。剔除生態(tài)和遺傳不穩(wěn)定的蛋白亞基缺失種質(zhì)，獲得遺傳穩(wěn)定的蛋白(7S和IlS組分)亞基缺失種質(zhì)。(2)大豆種子主要貯藏蛋白亞基缺失基因的聚合①7S組分蛋白亞基(α' +α+β)缺失種質(zhì)的創(chuàng)制Α.利用篩選獲得的遺傳穩(wěn)定的7S組分α丨亞基缺失種質(zhì)、a亞基缺失種質(zhì)以及β亞基缺失種質(zhì)做親本，采用兩兩雜交的方式，如配制成(a '亞基缺失種質(zhì)X a亞基缺失種質(zhì))、(a '亞基缺失種質(zhì)X β亞基缺失種質(zhì))、(α亞基缺失種質(zhì)X β亞基缺失種質(zhì))雜交組合，獲得雜交Fl代種子。播種Fl代，單株收獲，獲得F2代種子。對各雜交組合收獲的F2代種子，每粒分別取少量子葉(3-10mg，取時(shí)應(yīng)注意不要傷胚和保證種子剩余部分能發(fā)芽)，采用SDS-PAGE法鑒別其是否為7S蛋白亞基雙缺種子，從而獲得7S蛋白亞基雙缺材料a丨+a缺失、a丨+β缺失和α+β缺失種子。F2代種子也可不鑒定，播種種植，單株收獲，再單株內(nèi)種子采用SDS-PAGE鑒定(每株單粒鑒定至少10粒以上)是否為7S組分蛋白亞基雙缺單株或種子。所述的少量子葉SDS-PAGE法電泳樣品的準(zhǔn)備方法如下將所取樣品(3_10mg)磨碎，加入 100 μ I 樣品緩沖液(I % SDS, O. lmol/LTris-HCl, O. 01mol/L β-巰基乙醇，O. lg/L溴酚藍(lán)，150g/L蔗糖，pH8. O)，4°C下過夜，點(diǎn)樣前渦旋混勻。其余SDS-PAGE電泳方法同上。B.將鑒別為7S蛋白亞基雙缺(取樣鑒定分析后)種子夏播，開花期再兩兩雜交，如配制成(a ' +a缺失Xa' +β缺失)、(a' + a缺失X a + β缺失)、(a ' +β缺失X α+β缺失)雜交組合，獲得雜交Fl代種子。播種Fl代，單株收獲，獲得F2代種子。對各雜交組合收獲的F2代種子，每粒分別取少量子葉(取時(shí)應(yīng)注意不要傷胚和保證種子剩余部分能發(fā)芽)，采用SDS-PAGE法(方法同上)鑒別其是否為7S組分蛋白亞基三缺種子，獲得7S組分蛋白亞基a ' +α+β缺失種子。F2代種子也可不鑒定，播種種植，單株收獲，再單株內(nèi)種子采用SDS-PAGE鑒定(每株單粒鑒定至少10粒以上)是否為7S組分蛋白亞基三缺單株或種子。C.對獲得的7S組分蛋白亞基雙缺材料(a 1 +α缺失、a ' +β缺失、α+β缺失)和三缺(α ' +α+β缺失)材料，加代穩(wěn)定和擴(kuò)繁。在加代穩(wěn)定和擴(kuò)繁過程中，繼續(xù)采用SDS-PAGE法鑒定7S蛋白亞基缺失的遺傳穩(wěn)定情況,淘汰遺傳不穩(wěn)定株，留下遺傳穩(wěn)定株。同時(shí)配合脂肪氧合酶(Lox)缺失、產(chǎn)量和抗病性進(jìn)行選擇。D.最終通過聚合育種的方式獲得遺傳穩(wěn)定的7S組分蛋白亞基雙缺材料(α ' + α缺失、α ' + β缺失、α+β缺失)和二缺材料(α ' +α+β缺失)材料。②IlS組分蛋白亞基缺失種質(zhì)的創(chuàng)制利用篩選獲得的遺傳穩(wěn)定的IlS組分蛋白AlaB2亞基缺失種質(zhì)、A2Bla亞基缺失種質(zhì)、AlbBlb亞基缺失種質(zhì)、A5A4B3亞基缺失種質(zhì)和A3B4亞基缺失種質(zhì)做親本，采用兩兩雜交的方式，如配制成(AlaB2亞基缺失種質(zhì)XA2Bla亞基缺失種質(zhì))、(A2Bla亞基缺失種質(zhì)XAlbBlb亞基缺失種質(zhì))、(AlbBlb亞基缺失種質(zhì)XA5A4B3亞基缺失種質(zhì))、(A5A4B3亞基缺失種質(zhì)XA3B4亞基缺失種質(zhì))、(AlaB2亞基缺失種質(zhì)XA3B4亞基缺失種質(zhì))雜交組合，獲得雜交Fl代種子。播種Fl代，單株收獲，獲得F2代種子。對各雜交組合收獲的F2代種子，每粒分別取少量子 葉(取時(shí)應(yīng)注意不要傷胚和保證種子剩余部分能發(fā)芽)，采用SDS-PAGE法(方法同上)鑒別其是否為IlS組分蛋白亞基雙缺種子，從而獲得IlS組分蛋白亞基雙缺材料AlaB2+A2Bla缺失、AlaB2+AlbBlb 缺失、AlaB2+A5A4B3 缺失、AlaB2+A3B4 缺失、A2Bla+AlbBlb 缺失、A2Bla+A5A4B3 缺失、A2Bia+A3B4 缺失、AlbBlb+A5A4B3 缺失、AlbBlb+A3B4 缺失、A5A4B3+A3B4 缺失種子。F2 代種子也可不鑒定，播種種植，單株收獲，再單株內(nèi)種子采用SDS-PAGE鑒定(每株單粒鑒定至少10粒以上)是否為IlS組分蛋白亞基雙缺單株或種子。B.將鑒別為IlS組分蛋白亞基雙缺(取樣鑒定分析后)的種子夏播，開花期再兩兩雜交，如配制成(AlaB2+A2Bla 缺失 XAlbBlb+A5A4B3 缺失)、(AlaB2+A5A4B3 缺失 XAlaB2+A3B4缺失)、(AlbBlb+A5A4B3 缺失 XAlbBlb+A3B4 缺失)、(AlbBlb+A3B4 缺失 XA5A4B3+A3B4 缺失)雜交組合，獲得雜交Fl代種子。播種Fl代，單株收獲，獲得F2代種子。對各雜交組合收獲的F2代種子，每粒分別取少量子葉(取時(shí)應(yīng)注意不要傷胚和保證種子剩余部分能發(fā)芽)，采用SDS-PAGE法(方法同上)鑒別其是否為11組分蛋白亞基三缺或四缺種子，從而獲得IlS組分蛋白亞基三缺材料AlaB2+A2Bla+AlbBlb 缺失、AlaB2+A2Bla+A5A4B3 缺失、AlaB2+A2Bla+A3B4 缺失、AiaB2+AibBib+A5A4B3 缺失、AlaB2+AlbBlb+A3B4 缺失、AlaB2+A5A4B3+A3B4 缺失、A2Bla+AlbBlb+A5A4B3缺失、A2Bla+AlbBlb+A3B4 缺失、A2Bla+A5A4B3+A3B4 缺失和 AlbBlb+A5A4B3+A3B4 缺失種子；四缺材料AlaB2+A2Bla+AlbBlb+A5A4B3 缺失、AlaB2+A2Bla+AlbBlb+A3B4 缺失、AlaB2+A2Bla+A5A4B3+A3B4 缺失、AlaB2+AlbBlb+A5A4B3+A3B4 缺失和 A2Bla+AlbBlb+A5A4B3+A3B4 缺失種子。F2 代種子也可不鑒定，播種種植，單株收獲，再單株內(nèi)種子采用SDS-PAGE鑒定(每株單粒鑒定至少10粒以上)是否為IlS組分蛋白亞基三缺、四缺單株或種子。C.對獲得的IlS組分蛋白亞基三缺、四缺材料，通過兩兩相互配制雜交組合，或蛋白亞基四缺材料與單缺材料配制雜交組合，或蛋白亞基三缺材料與兩缺材料配制雜交組合，獲得雜交Fl代種子。雜交組合配制的原則是每個(gè)配制的雜交組合雙親組合起來應(yīng)包含5個(gè)蛋白亞基(AlaB2> A2Bla' AlbBlb、A5A4B3和A3B4)缺失基因。播種Fl代，單株收獲，獲得F2代種子。對各雜交組合收獲的F2代種子，每粒分別取少量子葉(取時(shí)應(yīng)注意不要傷胚和保證種子剩余部分能發(fā)芽)，采用SDS-PAGE法(方法同上)鑒別其是否為11組分蛋白亞基全缺種子，從而獲得IlS組分蛋白亞基全缺材料AlaB2+A2Bla+AlbBlb+A5A4B3+A3B4全缺種子。F2代種子也可不鑒定，播種種植，單株收獲，再單株內(nèi)種子采用SDS-PAGE鑒定(每株單粒鑒定至少10粒以上)是否為IlS組分蛋白亞基全缺單株或種子。D.對獲得的IlS組分蛋白亞基雙缺、三缺、四缺和全缺材料，加代穩(wěn)定和擴(kuò)繁。在加代穩(wěn)定和擴(kuò)繁過程中，繼續(xù)采用SDS-PAGE法鑒定蛋白亞基缺失穩(wěn)定情況，淘汰遺傳不穩(wěn)定株，留下遺傳穩(wěn)定株。同時(shí)配合脂肪氧合酶(Lox)缺失、產(chǎn)量和抗病性進(jìn)行選擇。E.最終通過聚合育種的方式獲得遺傳穩(wěn)定的IlS組分蛋白亞基雙缺、三缺、四缺和全缺材料。③7S+11S組分蛋白亞基全缺種質(zhì)的創(chuàng)制A.利用創(chuàng)制的7S組分蛋白亞基(α ' + α + β )三缺材料和IIS組分蛋白亞基(AlaB2+A2Bla+AlbBlb+A5A4B3+A3B4)全缺材料，配制雜交組合，獲得雜交Fl代種子。播種Fl代，單株收獲，獲得F2代種子。對各雜交組合收獲的F2代種子，每粒分別取少量子葉(取時(shí)應(yīng)·注意不要傷胚和保證種子剩余部分能發(fā)芽)，采用SDS-PAGE法(方法同上)鑒別其是否為7S組分蛋白亞基(α ' + α + β )和IIS組分蛋白亞基(AlaB2+A2Bla+AlbBlb+A5A4B3+A3B4)全缺種子，從而獲得7S和IIS組分蛋白亞基全缺材料7S組分蛋白亞基(α ' +α+β)和IlS組分蛋白亞基(AlaB2+A2Bla+AlbBlb+A5A4B3+A3B4)全缺種子。F2代種子也可不鑒定，播種種植，單株收獲，再單株采用SDS-PAGE鑒定(每株單粒鑒定至少10粒以上)是否為7S和IIS組分蛋白亞基全缺單株或種子。B.對獲得的7S和IlS組分蛋白亞基全缺材料，加代穩(wěn)定和擴(kuò)繁。在加代穩(wěn)定和擴(kuò)繁過程中，繼續(xù)采用SDS-PAGE法鑒定蛋白亞基缺失穩(wěn)定情況，淘汰遺傳不穩(wěn)定株，留下遺傳穩(wěn)定株。同時(shí)配合脂肪氧合酶(Lox)缺失、產(chǎn)量和抗病性進(jìn)行選擇。C.最終通過聚合育種的方式獲得遺傳穩(wěn)定的7S組分蛋白亞基(α ' +α+β)三缺材料、I is組分蛋白亞基(AlaB2+A2Bla+AlbBlb+A5A4B3+A3B4)全缺材料以及7S和IlS組分蛋白亞基全缺材料。(3)適宜于我國大豆各主產(chǎn)區(qū)的7S和IlS組分蛋白亞基缺失材料的創(chuàng)制①7S組分蛋白亞基缺失材料的創(chuàng)制A.以創(chuàng)制的7S組分蛋白亞基(α ' + α + β )全缺材料為親本，與我國各大豆主產(chǎn)區(qū)(東北春大豆區(qū)、黃海海夏大豆區(qū)、南方多熟制大豆主產(chǎn)區(qū))目前主推品種分別配置雜交組合，獲得雜交Fl代種子。播種Fl代，單株收獲，獲得F2代種子。對各雜交組合收獲的F2代種子，每粒分別取少量子葉(取時(shí)應(yīng)注意不要傷胚和保證種子剩余部分能發(fā)芽)，采用SDS-PAGE法(方法同上)鑒別其是否為7S組分蛋白亞基單缺、雙缺和三缺種子，從而犾得7S組分蛋白亞基單缺材料ct 1缺失、α缺失和β缺失種子；雙缺材料α ' + c[缺失、α ' + β缺失和α+β缺失種子；二缺材料α ' +α+β缺失種子。F2代種子也可不鑒定，播種種植，單株收獲，再單株內(nèi)種子采用SDS-PAGE鑒定(每株單粒鑒定至少10粒以上)是否為7S組分蛋白亞基單缺、雙缺和三缺單株或種子。B.對獲得的7S組分蛋白亞基單缺(α '缺失、α缺失和β缺失)、雙缺材料(α ' + α缺失、α ' + β缺失、α+β缺失)和二缺(ct ' +α+β缺失)材料，加代穩(wěn)定和擴(kuò)繁。在加代穩(wěn)定和擴(kuò)繁過程中，繼續(xù)采用SDS-PAGE法鑒定7S蛋白亞基缺失的遺傳穩(wěn)定情況，淘汰遺傳不穩(wěn)定株，留下遺傳穩(wěn)定株。同時(shí)配合脂肪氧合酶(Lox)缺失、產(chǎn)量和抗病性進(jìn)行選擇。C.最終通過聚合育種的方式獲得各種類型的、遺傳穩(wěn)定的7S組分蛋白亞基雙缺材料(α ' + α缺失、α ' + β缺失、α+β缺失)和二缺材料(ct ' +α+β缺失)材料；并進(jìn)而培育成品系。②IlS組分蛋白亞基缺失材料的創(chuàng)制A.以創(chuàng)制的11S組分蛋白亞基(AlaB2+A2Bla+AlbBlb+A5A4B3+A3B4)全缺材料為親本，與我國各大豆主產(chǎn)區(qū)(東北春大豆區(qū)、黃海海夏大豆區(qū)、南方多熟制大豆主產(chǎn)區(qū))目前主推品種分別配置雜交組合，獲得雜交Fl代種子。播種Fl代，單株收獲，獲得F2代種子。對各雜交組合收獲的F2代種子，每粒分別取少量子葉(取時(shí)應(yīng)注意不要傷胚和保證種子剩余部分能發(fā)芽)，采用SDS-PAGE法(方法同上)鑒別其是否為IlS組分蛋白亞基單缺、雙缺、三缺、四缺和全缺種子，從而獲得IlS組分蛋白亞基單缺材料=AlaB2缺失、A2Bla缺失、AlbBlb缺失、A5A4B3缺失和A3B4缺失種子；雙缺材料:AlaB2+A2Bla缺失、AlaB2+AlbBlb缺失、AlaB2+A5A4B3 缺失、AlaB2+A3B4 缺失、A2Bla+AlbBlb 缺失、A2Bla+A5A4B3 缺失、A2Bla+A3B4 缺失、AlbBlb+A5A4B3 缺失、AlbBlb+A3B4 缺失和 A5A4B3+A3B4缺失種子；三缺材料:AlaB2+A2Bla+AlbBlb 缺失、AiA+A2Bia+A5A4B3 缺失、AlaB2+A2Bla+A3B4 缺失、AlaB2+AlbBlb+A5A4B；3 缺失、AlaB2+AlbBlb+A3B4 缺 失、AiaB2+A5A4B3+A3B4 缺失、A2Bla+AlbBlb+A5A4B3 缺失、A2Bla+AlbBlb+A3B4 缺失、A2Bla+A5A4B3+A3B4 缺失和AibBib+A5A4B3+A3B4 缺失種子；四缺材料:AlaB2+A2Bla+AlbBlb+A5A4B3 缺失、AlaB2+A2Bla+AlbBlb+A3B4缺失、AlaB2+A2Bla+A5A4B3+A3B4 缺失、AlaB2+AlbBlb+A5A4B3+A3B4 缺失和 A2Bla+AlbBlb+A5A4B3+A3B4 缺失種子；全缺材料AlaB2+A2Bla+AlbBlb+A5A4B3+A3B4全缺種子。F2代種子也可不鑒定，播種種植，單株收獲，再單株內(nèi)種子采用SDS-PAGE鑒定(每株單粒鑒定至少10粒以上)是否為IlS組分蛋白亞基單缺、雙缺、三缺、四缺和全缺單株或種子。B.對獲得的IlS組分蛋白亞基單缺、雙缺、三缺、四缺和全缺材料，加代穩(wěn)定和擴(kuò)繁。在加代穩(wěn)定和擴(kuò)繁過程中，繼續(xù)采用SDS-PAGE法鑒定7S蛋白亞基缺失的遺傳穩(wěn)定情況，淘汰遺傳不穩(wěn)定株，留下遺傳穩(wěn)定株。同時(shí)配合脂肪氧合酶(Lox)缺失、產(chǎn)量和抗病性進(jìn)行選擇。C.最終通過聚合育種的方式獲得各種類型的、遺傳穩(wěn)定的IlS組分蛋白亞基單缺、雙缺、三缺、四缺和全缺材料；并進(jìn)而培育成品系。③7S和IlS組分蛋白亞基缺失材料的創(chuàng)制A.以創(chuàng)制的7S+11S組分蛋白亞基全缺材料為親本，與我國各大豆主產(chǎn)區(qū)(東北春大豆區(qū)、黃海海夏大豆區(qū)、南方多熟制大豆主產(chǎn)區(qū))目前主推品種分別配置雜交組合，獲得雜交Fl代種子。播種Fl代，單株收獲，獲得F2代種子。對各雜交組合收獲的F2代種子，每粒分別取少量子葉(取時(shí)應(yīng)注意不要傷胚和保證種子剩余部分能發(fā)芽)，采用SDS-PAGE法(方法同上)鑒別其是否為7S和IlS組分蛋白亞基單缺、雙缺、三缺、四缺、五缺、六缺、七缺和全缺種子，從而獲得單缺材料α '缺失、α缺失、β缺失、AlaB2缺失、A2Bla缺失、AlbBlb缺失、A5A4B3缺失和A3B4亞基缺失種子；雙缺材料α ' + α缺失、α , + β缺失、α+β缺失、AlaB2+A2Bla 缺失、AlaB2+AlbBlb 缺失、AlaB2+A5A4B3 缺失、AlaB2+A3B4 缺失、A2Bla+AlbBlb 缺失、A2Bla+A5A4B3 缺失、A2Bla+A3B4 缺失、AlbBlb+A5A4B3 缺失、AlbBlb+A3B4 缺失、A5A4B3+A3B4 缺失、α ' +AlaB2 缺失、α ' +A2Bla 缺失、α ' +AlbBlb 缺失、α ' +A5A4B3 缺失、α ' +A3B4 亞基缺失、a +AlaB2 缺失、a +A2Bla 缺失、a +AlbBlb 缺失、a +A5A4B3 缺失、ct +A3B4 缺失、β +AlaB2 缺失、β +A2Bla缺失、β +AlbBlb缺失、β +A5A4B3缺失和β +A3B4缺失種子；三缺材料α ' + α + β缺失、AiaB2+A2Bia+AibBib 缺失、AlaB2+A2Bla+A5A4B3 缺失、AlaB2+A2Bla+A3B4 缺失、AlaB2+AlbBlb+A5A4B3 缺失、AiaB2+AibBib+A3B4 缺失、AlaB2+A5A4B3+A3B4 缺失、A2Bla+AlbBlb+A5A4B3 缺失、A2Bla+AlbBlb+A3B4 缺失、A2Bia+A5A4BjA3B4 缺失、AlbBlb+A5A4B3+A3B4 缺失、α ' +AlaB2+A2Bla缺失、α ' +AlaB2+AlbBlb 缺失、α ' +AlaB2+A5A4B3 缺失、α ' +AlaB2+A3B4 缺失、α ' +A2Bla+AlbBlb 缺失、α ' +A2Bla+A5A4B3缺失、α f +A2Bla+A3B4缺失、a f +AlbBlb+A5A4B3缺失、a f +AlbBlb+A3B4缺失、a f +A5A4Bg+A3B4缺失、α +AlaB2+A2Bla 缺失、ct +AlaB2+AlbBlb 缺失、ct +AlaB2+A5A4B3 缺失、ct +AlaB2+A3B4 缺失、a +A2Bla+AlbBlb 缺失、a +A2Bl a+A5A4B3 缺失、ct +A2Bla+A3B4 缺失、a +AlbBlb+A5A4B3 缺失、ct +AlbBlb+A3B4 缺失、α +A5A4Bg+A3B4 缺失、β +AlaB2+A2Bla 缺失、β +AlaB2+AlbBlb 缺失、β +AlaB2+A5A4B3 缺失、β +AlaB2+A3B4 缺失、β +A2Bla+AlbBlb 缺失、β +A2Bla+A5A4B3 缺失、β +A2Bla+A3B4 缺失、β +AlbBlb+A5A4B3 缺失、β +AlbBlb+A3B4 缺失、β +A5A4Bg+A3B4 缺失、α 1 +a+AlaB2 缺失、ct 1 +a+A2Bla 缺失、ct 1 +a+AlbBlb 缺失、ct 1 + a+A5A4B3 缺失、α ' + a +A3B4 缺失、ct ' + β +AlaB2 缺失、ct ' + β +A2Bla 缺失、ct ' + β +AlbBlb 缺失、ct 1 + β +A5A4B3 缺失、ct 1 + β +A3B4 缺失、α+β +AlaB2 缺失、α+β +A2Bla 缺失、α+β +AlbBlb 缺失、α+β +A5A4B3 缺失、α+β +A3B4 缺失；四缺材料ct 1 +α+β +AlaB2 缺失、ct 1 +α+β +A2Bla 缺失、ct 1 +α+β +AlbBlb 缺失、ct 1 +α+β +A5A4B3 缺失、ct 1 +α+β +A3B4缺失、α ' + a +AlaB2+A2Bla 缺失、ct ' + a +AlaB2+AlbBlb 缺失、ct f + a +AlaB2+A5A4B3 缺失、α ! + a+AlaB2+A3B4 缺失、α ! + a +A2Bla+AlbBlb 缺失、α ! + a +A2Bla+A5A4B3 缺失、α ! + a+A2Bla+A3B4 缺失、α ! + a +AlbBlb+A5A4B3 缺失、α ! + a +AlbBlb+A3B4 缺失、a f + a+A5A4B3+A3B4 缺失、a f + β+AlaB2+A2Bla 缺失、a f + β+AlaB2+AlbBlb 缺失、a f + β+AlaB2+A5A4B3 缺失、a f + β+AlaB2+A3B4 缺失、a f + β+A2Bla+AlbBlb 缺失、a f + β+A2Bla+A5A4B3 缺失、a f + β+A2Bla+A3B4 缺失、a f + β+AlbBlb+A5A4B3 缺失、a f + β+AlbBlb+A3B4 缺失、a f + β+A5A4B3+A3B4 缺失、α+β +AlaB2+A2Bla 缺失、α+β +AlaB2+AlbBlb 缺失、α+β +AlaB2+A5A4B3 缺失、α+β +AlaB2+A3B4 缺失、α+β +A2Bla+AlbBlb缺失、α + β+A2Bla+A5A4B3 缺失、α + β+A2Bla+A3B4 缺失、α + β+AlbBlb+A5A4B3 缺失、α+β +AlbBlb+A3B4 缺失、α+β +A5A4Bg+A3B4 缺失種子；五缺材料:α ' +α+β +AlaB2+A2Bla 缺失、α ' +α+β +AlaB2+AlbBlb 缺失、ct 1 +α+β +AlaB2+A5A4B3 缺失、ct 1 +α+β +AlaB2+A3B4 缺失、α ' +α+β +A2Bla+AlbBlb 缺失、ct 1 +α+β +A2B1^A5A4B3 缺失、α ' +α+β +A2Bla+A3B4 缺失、α ' +α+β +AlbBlb+A5A4B3 缺失、ct 1 +α+β +AlbBlb+A3B4 缺失、ct 1 +α+β +Α5Α4Β3+Α3Β4缺失、α ' +ct +AlaB2+A2Bla+AlbBlb 缺失、α ' + a +AlaB2+A2Bla+A5A4B3 缺失、α ' + a +AlaB2+A2Bla+A3B4 缺失、ct ' + a +AlaB2+AlbBlb+A5A4B3 缺失、ct ' + a +AlaB2+AlbBlb+A3B4缺失、a f + ct+AlaB2+A5A4B3+A3B4 缺失、a f + α +A2Bla+AlbBlb+A5A4B3 缺失、ct 1 + a +A2Bla+AlbBlb+A3B4 缺失、ct 1 + a +A2Bla+A5A4B3+A3B4 缺失、ct 1 + a +AlbBlb+A5A4B3+A3B4缺失、α ' +β +AlaB2+A2Bla+AlbBlb 缺失、α ' + β +AlaB2+A2Bla+A5A4B3 缺失、a f + β+AlaB2+A2Bla+A3B4 缺失、a f + β+AlaB2+AlbBlb+A5A4B3 缺失、a f + β+AlaB2+AlbBlb+A3B4缺失、α 1 + β+AlaB2+A5A4B3+A3B4 缺失、a f + β +A2Bla+AlbBlb+A5A4B3 缺失、α ' + β +A2Bla+AlbBlb+A3B4 缺失、ct ' + β +A2Bla+A5A4B3+A3B4 缺失、ct ' + β +AlbBlb+A5A4B3+A3B4缺失、ct + β +AlaB2+A2Bla+AlbBlb 缺失、α+β +AlaB2+A2Bla+A5A4B3 缺失、α+β +AlaB2+A2Bla+A3B4缺失、ct + β +AlaB2+AlbBlb+A5A4B3 缺失、α+β +AlaB2+AlbBlb+A3B4 缺失、α+β +AlaB2+A5A4B3+A3B4缺失、ct + β +A2Bla+AlbBlb+A5A4B3 缺失、α+β +A2Bla+AlbBlb+A3B4 缺失、α+β +A2Bla+A5A4B3+A3B4缺失、α + β+AlbBlb+A5A4B3+A3B4 缺失、a f +AlaB2+A2Bla+AlbBlb+A5A4B3 缺失、α ! +AlaB2+A2Bla+AlbBlb+A3B4 缺失、a ! +AlaB2+A2Bla+A5A4B3+A3B4 缺失、α +^laB2+AlbBlb+A5A4B3+A3B4 缺失、α +A2Bla+AlbBlb+A5A4B3+A3B4 缺失、α +AlaB2+A2Bla+AlbBlb+A5A4B3 缺失、a +AlaB2+A2Bla+AlbBlb+A3B4 缺失、a +AlaB2+A2Bla+A5A4B3+A3B4缺失、ct+AlaB2+AlbBlb+A5A4B3+A3B4 缺失、a+A2Bla+AlbBlb+A5A4B3+A3B4 缺失、β +AlaB2+A2Bla+AlbBlb+A5A4B3 缺失、β +AlaB2+A2Bla+AlbBlb+A3B4 缺失、β +AlaB2+A2Bla+A5A4B3+A3B4缺失、β+AlaB2+AlbBlb+A5A4B3+A3B4 缺失、β+A2Bla+AlbBlb+A5A4B3+A3B4 缺失和AlaB2+A2Bla+AlbBlb+A5A4B3+A3B4 缺失；六缺材料α ' + α + β+AlaB2+A2Bla+AlbBlb 缺失、ct ' +α+β +AlaB2+A2Bla+A5A4B3 缺失、ct ' +α+β +AlaB2+A2Bla+A3B4 缺失、α ! +α+β +AlaB2+AlbBlb+A5A4B3 缺失、α ! +α+β +AlaB2+AlbBlb+A3B4 缺失、ct ' + ct + β+AlaB2+A5A4B3+A3B4 缺失、ct ' + ct + β+A2Bla+AlbBlb+A5A4B3 缺失、ct ' +α+β +A2Bla+AlbBlb+A3B4 缺失、α ' +α+β +A2Bla+A5A4B3+A3B4 缺失、α ! + α + β+AlbBlb+A5A4B3+A3B4 缺失、ct ! + a+AlaB2+A2Bla+AlbBlb+A5A4B3 缺失、α ! + a +AlaB2+A2Bla+AlbBlb+A3B4 缺失、α ! + ct+AlaB2+A2Bla+A5A4B3+A3B4 缺 失、α ! +α+AlaB2+AlbBlb+A5A4B3+A3B4 缺失、α ! + a+A2Bla+AlbBlb+A5A4B3+A3B4 缺失、α ! +β+AlaB2+A2Bla+AlbBlb+A5A4B3 缺失、α ! + β+AlaB2+A2Bla+AlbBlb+A3B4 缺失、α f + β+AlaB2+A2Bla+A5A4B3+A3B4 缺失、a f + β+AlaB2+AlbBlb+A5A4B3+A3B4 缺失、α 1 + β+A2Bla+AlbBlb+A5A4B3+A3B4 缺失、α 1 + β + α + β AlaB2+A2Bla+AlbBlb+A5A4B3 缺失、α f + β+AlaB2+A2Bla+AlbBlb+A3B4 缺失、ct f + β+AlaB2+A2Bla+A5A4B3+A3B4 缺失、a f + β+AlaB2+AlbBlb+A5A4B3+A3B4 缺失、a f + β+A2Bla+AlbBlb+A5A4B3+A3B4 缺失、α +AlaB2+A2Bla+AlbBlb+A5A4B3+A3B4 缺失、a +AlaB2+A2Bla+AlbBlb+A5A4B3+A3B4 缺失、β +AlaB2+A2Bla+AlbBlb+A5A4B3+A3B4 缺失種子；七缺材料ct ' +α+β +AlaB2+A2Bla+AlbBlb+A5A4B3缺失、α ' +α+β +AlaB2+A2Bla+AlbBlb+A3B4 缺失、ct ' +α+β +AlaB2+A2Bla+A5A4B3+A3B4 缺失、ct ' +α+β +AlaB2+AlbBlb+A5A4B3+A3B4 缺失、ct ' +α+β +A2Bla+AlbBlb+A5A4B3+A3B4 缺失、ct ' +ct+AlaB2+A2Bla+AlbBlb+A5A4B3+A3B4 缺失、α ! + β+AlaB2+A2Bla+AlbBlb+A5A4B3+A3B4 缺失、α+β+AiaB2+A2Bla+AlbBlb+A5A4B3+A3B4 缺失種子；全缺材料ct ' +α+β +AlaB2+A2Bla+AlbBlb+A5A4B3+A3B4全缺種子。F2代種子也可不鑒定，播種種植，單株收獲，再單株內(nèi)種子釆用SDS-PAGE鑒定(每株單粒鑒定至少10粒以上)是否為7S和IlS組分蛋白亞基單缺、雙缺、三缺、四缺、五缺、六缺、七缺和全缺種子。B.對獲得的7S和IlS組分蛋白亞基單缺、雙缺、三缺、四缺、五缺、六缺、七缺和全缺材料，加代穩(wěn)定和擴(kuò)繁。在加代穩(wěn)定和擴(kuò)繁過程中，繼續(xù)釆用SDS-PAGE法鑒定7S和IlS組分蛋白亞基缺失的遺傳穩(wěn)定情況，淘汰遺傳不穩(wěn)定株，留下遺傳穩(wěn)定株。同時(shí)配合脂肪氧合酶(Lox)缺失、產(chǎn)量和抗病性進(jìn)行選擇。C.最終通過聚合育種的方式獲得各種類型的、遺傳穩(wěn)定的7S和IlS組分蛋白亞基單缺、雙缺、三缺、四缺、五缺、六缺、七缺和全缺材料；并進(jìn)而培育成品系。所述的大豆種子主要貯藏蛋白亞基缺失基因供體材料主要是通過從我國豐富的大豆種質(zhì)資源中篩選獲得。也可以通過誘變育種方式獲得。所述的大豆種子蛋白亞基缺失基因聚合過程中，在釆用雜交育種方法的基礎(chǔ)上，也可以結(jié)合回交育種方法。所述的大豆種子蛋白亞基缺失基因的鑒定方法，在釆用SDS-PAGE方法基礎(chǔ)上，也可以結(jié)合分子檢測手段進(jìn)行。所述的創(chuàng)制的各種類型的、遺傳穩(wěn)定的大豆種子7S和IlS組分蛋白亞基單缺、雙缺、三缺、四缺、五缺、六缺、七缺和全缺材料，及其培育出的品系和品種。有益效果針對我國在大豆蛋白育種和蛋白加工領(lǐng)域的落后不僅體現(xiàn)在大豆蛋白加工專用型品種選育和原料加工特性掌握上的落后，而且也體現(xiàn)在蛋白加工技術(shù)上的落后，從而導(dǎo)致①各種亞基組合類型的蛋白加工專用型大豆品種的缺乏；②我國自建、合資、獨(dú)資大豆蛋白企業(yè)產(chǎn)品品種單一、功能性差，許多產(chǎn)品類型還不能生產(chǎn)，難以滿足國內(nèi)食品工業(yè)的需 求，需大量進(jìn)口傳統(tǒng)蛋白制品在進(jìn)一步提高營養(yǎng)性和功能性等方面開發(fā)上落后于國外等現(xiàn)狀，本發(fā)明不僅提供了一種系列優(yōu)質(zhì)蛋白加工專用型大豆種質(zhì)的創(chuàng)制與應(yīng)用的新方法和新材料，可加快我國蛋白加工專用型大豆品種的培育進(jìn)程；而且還充分利用我國大豆種質(zhì)資源中存在的豐富的、自然變異產(chǎn)生的種子主要貯藏蛋白(7S和IlS組分)亞基缺失基因，通過聚合育種和雜交育種的方式，并結(jié)合SDS-PAGE法鑒定和選擇，創(chuàng)制出各種類型的、遺傳穩(wěn)定的7S和IlS組分蛋白亞基缺失材料，并進(jìn)而培育成品系，彌補(bǔ)了我國目前大豆蛋白加工專用型創(chuàng)新種質(zhì)的匱乏，從而為我國大豆蛋白加工利用提供優(yōu)質(zhì)原材料，促進(jìn)我國大豆蛋白加工業(yè)的蓬勃發(fā)展。其具有下述優(yōu)點(diǎn)(I)本發(fā)明采用首先創(chuàng)制7S組分蛋白亞基(α ' + α + β )全缺種質(zhì)和IIS組分蛋白亞基(AlaB2+A2Bla+AlbBlb+A5A4B3+A3B4)全缺種質(zhì)；再利用創(chuàng)制的7S組分蛋白亞基(α / +α+β)全缺材料和IlS組分蛋白亞基(AlaB2+A2Bla+AlbBlb+A5A4B3+A3B4)全缺材料配制雜交組合，創(chuàng)制獲得遺傳穩(wěn)定的7S+11S組分蛋白亞基全缺材料。以后可采用7S和IlS組分蛋白亞基全缺材料為標(biāo)準(zhǔn)親本，與我國各大豆主產(chǎn)區(qū)(東北春大豆區(qū)、黃海海夏大豆區(qū)、南方多熟制大豆主產(chǎn)區(qū))目前主推品種配制雜交組合，很快就可創(chuàng)制出遺傳背景豐富的7S和11S組分蛋白亞基單缺、雙缺、三缺、四缺、五缺、六缺、七缺和全缺材料，并進(jìn)而培育成品系，從而加快我國蛋白加工專用型大豆品種的培育進(jìn)程。(2)本發(fā)明充分利用我國大豆種質(zhì)資源中豐富的、自然變異產(chǎn)生的種子主要貯藏蛋白(7S和IlS組分)亞基缺失基因作為蛋白亞基缺失基因供體，避免了國外(特別是日本)大多數(shù)蛋白亞基缺失基因是通過輻射和誘變等創(chuàng)造的，而通過輻射、誘變獲得的亞基缺失體材料往往受隱性基因控制，常伴隨有萎黃病、不育或致死等性狀，存在只能以異質(zhì)體形式保存，且也不易穩(wěn)定等問題。(3)本發(fā)明利用我國大豆種質(zhì)資源中豐富的自然變異產(chǎn)生的主要種子貯藏蛋白(7S和IIS組分)亞基缺失基因，通過聚合育種和雜交育種方法，創(chuàng)制出的各種類型的、遺傳穩(wěn)定的7S和IlS組分蛋白亞基缺失材料，它完全有別于采用轉(zhuǎn)基因手段來創(chuàng)制蛋白亞基缺失體類型，這為其廣泛種植和加工利用提供了安全保障。(4)本發(fā)明從大豆育種界與大豆蛋白加工界的連接樞紐-大豆優(yōu)異種質(zhì)創(chuàng)新上入手來實(shí)現(xiàn)突破，利用我國大豆種質(zhì)資源中存在的豐富的種子主要貯藏蛋白(7S和IlS組分)亞基缺失基因，通過聚合育種和雜交育種的方式并結(jié)合SDS-PAGE法鑒定和選擇，創(chuàng)制各種類型的、遺傳穩(wěn)定的7S和IlS組分蛋白亞基單缺、雙缺、三缺、四缺、五缺、六缺、七缺和全缺材料。而目前國外創(chuàng)制的一些珍稀的亞基缺失體及其聚合材料[如缺失β_伴大豆球蛋白(Scg-I)的材料、7S和IlS全缺材料、僅含IlS材料、僅含7S材料等]，往往是嚴(yán)防外泄的。因而本發(fā)明創(chuàng)制的缺失體類型尤顯珍貴和重要。它們不僅彌補(bǔ)了我國目前大豆蛋白加工專用型創(chuàng)新種質(zhì)匱缺的現(xiàn)狀，而且可為我國大豆蛋白加工利用提供優(yōu)質(zhì)原材料，促進(jìn)我國大豆蛋白加工業(yè)的蓬勃發(fā)展。(5)本發(fā)明中大豆種子主要貯藏蛋白亞基缺失基因供體材料主要是通過從我國豐富的大豆種質(zhì)資源中篩選獲得。此外，也可以通過誘變育種方式獲得。(6)本發(fā)明在大豆種子蛋白亞基缺失基因聚合過程中，在采用雜交育種方法的基礎(chǔ)上，也可以結(jié)合回交育種方法。(7)大豆種子蛋白亞基缺失基因的鑒定即在采用SDS-PAGE方式的基礎(chǔ)上，也可以結(jié)合分子檢測手段，提高檢測的準(zhǔn)確性。 綜上所述，本發(fā)明方法不僅提供了一種系列優(yōu)質(zhì)蛋白加工專用型大豆種質(zhì)的創(chuàng)制與應(yīng)用的新方法和新材料，可加快我國蛋白加工專用型大豆品種的培育進(jìn)程；而且還創(chuàng)制出各種類型的、遺傳穩(wěn)定的7S和IlS組分蛋白亞基缺失材料和品系，彌補(bǔ)了我國目如大 蛋白加工專用型創(chuàng)新種質(zhì)奇缺的現(xiàn)狀，從而為我國大豆蛋白加工利用提供優(yōu)質(zhì)原材料，促進(jìn)我國大豆蛋白加工業(yè)的蓬勃發(fā)展。因此，具有很好的應(yīng)用前景。
具體實(shí)施例方式大豆種子蛋白的利用不僅僅是利用其營養(yǎng)性，而更重要的是利用其加工特性-功能性。后者在食品加工業(yè)中尤為重要。因此，近年來具不同營養(yǎng)性和功能性的大豆蛋白產(chǎn)品已成為國內(nèi)外食品加工業(yè)重要配料或添加劑，需求量日增。大豆種子貯藏蛋白主要由7S和IlS組分構(gòu)成，合計(jì)占種子貯藏蛋白80%以上。大豆蛋白產(chǎn)品營養(yǎng)性和功能性的多樣性和優(yōu)良程度，一方面取決于食品加工層次上的蛋白加工技術(shù)，而更重要的是取決于原料7S和IlS組分的亞基及其氨基酸構(gòu)成、比例(11S/7S比值)和特性，這種理念已成為國內(nèi)外大豆蛋白加工界和大豆育種界的共識。相比較而言，我國在大豆蛋白育種和蛋白加工領(lǐng)域的落后不僅體現(xiàn)在大豆蛋白加工專用型品種選育和原料加工特性掌握上的落后，而且也體現(xiàn)在蛋白加工技術(shù)上的落后，從而導(dǎo)致①各種亞基組合類型的蛋白加工專用型大豆品種的缺乏；②我國自建、合資、獨(dú)資大豆蛋白企業(yè)產(chǎn)品品種單一、功能性差，許多產(chǎn)品類型還不能生產(chǎn)，難以滿足國內(nèi)食品工業(yè)的需求，需大量進(jìn)口 ；③傳統(tǒng)蛋白制品在進(jìn)一步提高營養(yǎng)性和功能性等方面開發(fā)上落后于國外等。因此，要想盡快突破此困境，必須借鑒發(fā)達(dá)國家在此領(lǐng)域的成功經(jīng)驗(yàn)，充分利用我國大豆種質(zhì)資源中蘊(yùn)藏的豐富蛋白亞基缺失體材料，首先從大豆育種界與大豆蛋白加工界的連接樞紐-大豆品種(原料)培育上入手來實(shí)現(xiàn)突破,創(chuàng)制和培育各種亞基組合。為此，本發(fā)明提供了一種系列優(yōu)質(zhì)蛋白加工專用型大豆種質(zhì)的創(chuàng)制與應(yīng)用的新方法和新材料，可加快我國蛋白加工專用型大豆品種的培育進(jìn)程；同時(shí)還創(chuàng)制出各種類型的、遺傳穩(wěn)定的7S和IlS組分蛋白亞基缺失材料，并進(jìn)而培育成品系，彌補(bǔ)了我國目前大豆蛋白加工專用型創(chuàng)新種質(zhì)奇缺的現(xiàn)狀，從而為我國大豆蛋白加工利用提供優(yōu)質(zhì)原材料，促進(jìn)我國大豆蛋白加工業(yè)的蓬勃發(fā)展。實(shí)施例I :一種系列優(yōu)質(zhì)蛋白加工專用型大豆種質(zhì)的創(chuàng)制與應(yīng)用的新方法，具體操作如下I、大豆種子主要貯藏蛋白亞基缺失種質(zhì)的篩選供試種質(zhì)收集到的1400份大豆種質(zhì)資源，包括野生大豆、地方品種、推廣品種。
2001-2003年，采用SDS-PAGE法鑒定，從收集到的1400份大豆種質(zhì)資源中篩選到五河大豆U '缺失)、瀏陽五月黃U缺失)、蘇灰莢(β缺失)、吉育32 (AlaB2缺失)、興文黑豆子(A2Bla缺失)、桂陽紫金豆(AlbBlb缺失)、493-1 (A5A4B3缺失)、安寧I號(A3B4缺失)等蛋白亞基缺失體材料。并經(jīng)2年種植觀察，表明這些種質(zhì)蛋白亞基缺失基因遺傳表現(xiàn)為穩(wěn)定。2、大豆種子主要貯藏蛋白亞基缺失基因的聚合(I) 7S組分蛋白亞基缺失種質(zhì)的創(chuàng)制2003年以五河大豆(α '缺失)、瀏陽五月黃(α缺失)和蘇灰莢(β缺失)為親 本，分別配制了 [五河大豆(α '缺失)X瀏陽五月黃(α缺失)]和[瀏陽五月黃(α缺失)X蘇灰莢(β缺失)]雜交組合。獲得雜交Fl代種子；2004年夏播Fl代，單株收獲，獲得F2代種子。對獲得的各雜交組合F2代種子，每粒分別取少量子葉(3-10mg，取時(shí)應(yīng)注意不要傷胚和保證種子剩余部分能發(fā)芽)，采用SDS-PAGE法鑒別其是否為7S蛋白亞基雙缺種子，從而獲得7S蛋白亞基雙缺材料α ' +α缺失、α ' +β缺失和α+β缺失種子。2005年將鑒別為7S蛋白亞基雙缺(取樣鑒定分析后)種子夏播，開花期再兩兩雜交,配制(a' +a缺失Xa' +β缺失)、(a' + a缺失X a + β缺失)、(a ' +β缺失X a + β缺失)雜交組合，獲得雜交Fl代種子；2006年夏播Fl代，單株收獲，獲得F2代種子。對各雜交組合收獲的F2代種子，每粒分別取少量子葉(取時(shí)應(yīng)注意不要傷胚和保證種子剩余部分能發(fā)芽)，采用SDS-PAGE法鑒別其是否為7S組分蛋白亞基三缺種子，獲得7S組分蛋白亞基a ' +α+β缺失種子，當(dāng)年海南南繁加代和穩(wěn)定。2007年繼續(xù)加代穩(wěn)定和擴(kuò)繁。在加代穩(wěn)定和擴(kuò)繁過程中，繼續(xù)采用SDS-PAGE法鑒定7S蛋白亞基缺失的遺傳穩(wěn)定情況，淘汰遺傳不穩(wěn)定株，留下遺傳穩(wěn)定株。同時(shí)配合脂肪氧合酶(Lox)缺失、產(chǎn)量和抗病性進(jìn)行選擇。最終通過聚合育種的方式獲得遺傳穩(wěn)定的7S組分蛋白亞基雙缺材料(a ' +a缺失、ct ' + β缺失、α+β缺失)和二缺材料(ct ' +α+β缺失)材料。(2) IlS組分蛋白亞基缺失種質(zhì)的創(chuàng)制2003年以吉育32 (AlaB2缺失)、興文黑豆子(A2Bla缺失)、桂陽紫金豆(AlbBlb缺失)、493-1 (A5A4B3缺失)和安寧I號(A3B4缺失)為親本，分別配制了 [吉育32 (AlaB2缺失)X興文黑豆子(A2Bla缺失)]、[桂陽紫金豆(AlbBlb缺失)X 493-1 (A5A4B3缺失)]、[安寧I號(A3B4缺失)X 493-1 (A5A4B3缺失)]和[吉育32 (AlaB2缺失)X安寧I號(A3B4缺失)]雜交組合，獲得雜交Fl代種子。2004年夏播Fl代，單株收獲，獲得F2代種子。對各雜交組合收獲的F2代種子，每粒分別取少量子葉(取時(shí)應(yīng)注意不要傷胚和保證種子剩余部分能發(fā)芽)，采用SDS-PAGE法(方法同上)鑒別其是否為IlS組分蛋白亞基雙缺種子，從而獲得IlS組分蛋白亞基雙缺材料AlaB2+A2Bla缺失、AlbBlb+A5A4B3缺失、A5A4B3+A3B4缺失、AlaB2+A3B4缺失種子。2005年將鑒別為IlS組分蛋白亞基雙缺(取樣鑒定分析后)的種子夏播，開花期再兩兩雜交，配制(AlaB2+A2Bla 缺失 XAlbBlb+A5A4B3 缺失)、(A5A4B3+A3B4 缺失 XAlaB2+A3B4 缺失)、(AlbBlb+A5A4B3缺失XA5A4B3+A3B4缺失)雜交組合，獲得雜交Fl代種子。2006年夏播Fl代，單株收獲，獲得F2代種子。對各雜交組合收獲的F2代種子，每粒分別取少量子葉(取時(shí)應(yīng)注意不要傷胚和保證種子剩余部分能發(fā)芽)，采用SDS-PAGE法鑒別其是否為11組分蛋白亞基三缺或四缺種子，從而獲得IlS組分蛋白亞基三缺材料AlaB2+A2Bla+AlbBlb缺失、ΑιΑ+Α2Βι3+Α5Α4Β3 缺失、AlaB2+AlbBlb+A5A4B3 缺失、A2Bla+AlbBlb+A5A4B3 缺失、A2Bla+A5A4B3+A3B4 缺失、AlbBlb+A5A4B3+A3B4 缺失種子；四缺材料AlaB2+A2Bla+AlbBlb+A5A4B3 缺失種子。2007年對獲得的IlS組分蛋白亞基三缺、四缺材料夏播，開花期再兩兩雜交，配制(AiaB2+A2Bia+AibBib+A5A4B3 缺失 xA2Bla+A5A4B3+A3B4 缺失)、(AlaB2+A2Bla+AlbBlb+A5A4B3 缺失X AlbBlb+A5A4B3+A3B4缺失)雜交組合，獲得雜交Fl代種子。2008年播種Fl代，單株收獲，獲得F2代種子。對各雜交組合收獲的F2代種子，每粒分別取少量子葉(取時(shí)應(yīng)注意不要傷胚和保證種子剩余部分能發(fā)芽)，采用SDS-PAGE法鑒別其是否為11組分蛋白亞基全缺種子，從而獲得IlS組分蛋白亞基全缺材料AlaB2+A2Bla+AlbBlb+A5A4B3+A3B4全缺種子。
對獲得的IlS組分蛋白亞基雙缺、三缺、四缺和全缺材料，加代穩(wěn)定和擴(kuò)繁。在加代穩(wěn)定和擴(kuò)繁過程中，繼續(xù)采用SDS-PAGE法鑒定蛋白亞基缺失穩(wěn)定情況，淘汰遺傳不穩(wěn)定株，留下遺傳穩(wěn)定株。同時(shí)配合脂肪氧合酶(Lox)缺失、產(chǎn)量和抗病性進(jìn)行選擇。最終通過聚合育種的方式獲得遺傳穩(wěn)定的IlS組分雙缺、三缺、四缺和全缺材料。(3)7S+11S組分蛋白亞基全缺種質(zhì)的創(chuàng)制2009年利用創(chuàng)制的7S組分蛋白亞基(α ' +α+β)三缺材料和IlS組分蛋白亞基(AlaB2+A2Bla+AlbBlb+A5A4B3+A3B4)全缺材料，配制雜交組合，獲得雜交Fl代種子。2010年播種Fl代，單株收獲，獲得F2代種子。對各雜交組合收獲的F2代種子，每粒分別取少量子葉(取時(shí)應(yīng)注意不要傷胚和保證種子剩余部分能發(fā)芽)，采用SDS-PAGE法(方法同上)鑒別其是否為7S組分蛋白亞基(α ' + α + β )和IlS組分蛋白亞基(AlaB2+A2Bla+AlbBlb+A5A4B3+A3B4)全缺種子，從而獲得7S和IlS組分蛋白亞基全缺材料7S組分蛋白亞基(α ' +α +β )和IlS組分蛋白亞基(AlaB2+A2Bla+AlbBlb+A5A4B3+A3B4)全缺種子。對獲得的7S和IlS組分蛋白亞基全缺材料，當(dāng)年海南南繁加代穩(wěn)定和擴(kuò)繁。在加代穩(wěn)定和擴(kuò)繁過程中，繼續(xù)采用SDS-PAGE法鑒定蛋白亞基缺失穩(wěn)定情況，淘汰遺傳不穩(wěn)定株，留下遺傳穩(wěn)定株。同時(shí)配合脂肪氧合酶(Lox)缺失、產(chǎn)量和抗病性進(jìn)行選擇。最終通過聚合育種的方式獲得遺傳穩(wěn)定的7S組分蛋白亞基(α ' +α+β)三缺材料、IlS組分蛋白亞基(AlaB2+A2Bla+AlbBlb+A5A4B3+A3B4)全缺材料以及7S和IlS組分蛋白亞基全缺材料。3、適宜于我國大豆各主產(chǎn)區(qū)的7S和IlS組分蛋白亞基缺失材料的創(chuàng)制2011年以創(chuàng)制的7S+11S組分蛋白亞基全缺材料為父本，以南方多熟制大豆主產(chǎn)區(qū)目前主推品種南農(nóng)88-31為母本，配置雜交組合，獲得雜交Fl代種子。2012年播種Fl代，單株收獲，獲得F2代種子。對各雜交組合收獲的F2代種子，每粒分別取少量子葉(取時(shí)應(yīng)注意不要傷胚和保證種子剩余部分能發(fā)芽)，采用SDS-PAGE法(方法同上)鑒別其是否為7S和IlS組分蛋白亞基單缺、雙缺、三缺、四缺、五缺、六缺、七缺和全缺種子，從而獲得7S和IlS組分蛋白亞基單缺、雙缺、三缺、四缺、五缺、六缺、七缺和全缺種子，當(dāng)年海南南繁加代穩(wěn)定；并進(jìn)而培育成品系。
權(quán)利要求
1.一種系列優(yōu)質(zhì)蛋白加工專用型大豆種質(zhì)的創(chuàng)制新方法，其特征在于包括 (1)大豆種子主要貯藏蛋白亞基缺失種質(zhì)的篩選采用SDS-PAGE電泳方式從我國大豆種質(zhì)資源中篩選出種子主要貯藏蛋白7S和IlS組分亞基缺失種質(zhì)； (2)大豆種子主要貯藏蛋白亞基缺失基因的聚合利用篩選獲得的種子主要貯藏蛋白7S和IlS組分亞基缺失基因，通過聚合育種和雜交育種的方式并結(jié)合SDS-PAGE法鑒定和選擇，創(chuàng)制出7S組分蛋白亞基(α ' +α+β)缺失種質(zhì)、IlS組分蛋白亞基缺失種質(zhì)以及7S+11S組分蛋白亞基全缺種質(zhì)； (3)適宜于我國大豆各主產(chǎn)區(qū)的7S和IlS組分蛋白亞基缺失材料的創(chuàng)制以7S組分蛋白亞基(α ' +α+β)缺失種質(zhì)、IlS組分蛋白亞基缺失種質(zhì)以及7S+11S組分蛋白亞基全缺種質(zhì)為親本，與我國各大豆主產(chǎn)區(qū)目前主推品種分別配置雜交組合，通過選擇和穩(wěn)定，最終獲得各種類型的、遺傳穩(wěn)定的7S和IlS組分蛋白亞基單缺、雙缺、三缺、四缺、五缺、六缺、七缺和全缺材料，并進(jìn)而培育成品系，從而為大豆蛋白加工利用提供優(yōu)質(zhì)專用型加工原料。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的一種系列優(yōu)質(zhì)蛋白加工專用型大豆種質(zhì)的創(chuàng)制新方法，其特征在于所述的采用SDS-PAGE電泳方式從我國大豆種質(zhì)資源中篩選出種子主要貯藏蛋白7S和IlS組分亞基缺失種質(zhì)具體方法包括 ①大豆脫脂豆粉的制備將從國內(nèi)各地方收集到的大豆種質(zhì)資源，分別播種收獲，種子曬干，磨碎成豆粉；用有機(jī)溶劑脫脂2-3次，加入有機(jī)溶劑后攪拌均勻，抽濾、風(fēng)干，即得脫脂豆粉，所述的有機(jī)溶劑為正乙烷、乙醚或丙酮中的任意一種； ②大豆貯藏蛋白的提取1.Og脫脂豆粉加20ml 50mmol/L的Tris-HCl緩沖液，在室溫下提取I小時(shí)，離心后取上清用IN HCl調(diào)pH至4. 50，再離心后棄上清，沉淀經(jīng)真空低溫干燥后即得大豆種子貯藏蛋白粉； ③電泳樣品的準(zhǔn)備稱取I.5mg大豆種子貯藏蛋白粉，加入500 μ I樣品緩沖液，4°C下過夜，點(diǎn)樣前渦旋混勻，所述的樣品緩沖液配方為1% SDS,O. lmol/LTris-HCl,0. 01mol/Lβ -巰基乙醇，O. lg/L溴酚藍(lán)，150g/L蔗糖，ρΗ8· O ； ④SDS-PAGE法采用不連續(xù)垂直板狀凝膠電泳，凝膠厚度1mm，濃縮膠濃度為5%，分離膠濃度為12%，電極緩沖液為Tris-甘氨酸系統(tǒng)，電泳在4°C下進(jìn)行，電泳開始設(shè)置為恒流20mA/膠，待溴酚藍(lán)帶進(jìn)入分離膠時(shí)，電流加倍，當(dāng)溴酚藍(lán)帶指示劑距玻璃板下沿Icm處時(shí)，結(jié)束電泳，采用O. 2%考馬斯亮藍(lán)R-250染色液染色30min，脫色液中脫色過夜；其中，所述的 Tris-甘氨酸系統(tǒng)為 O. 025 M Tris-HCl，O. 192M 甘氨酸，O. I % SDS ; ⑤大豆種子主要貯藏蛋白亞基缺失種質(zhì)的識別依據(jù)大豆種子主要貯藏蛋白亞基標(biāo)準(zhǔn)電泳圖譜，從收集到的大豆種質(zhì)資源中鑒定出主要貯藏蛋白7S和IlS組分亞基缺失種質(zhì)，包括7S組分α '亞基缺失種質(zhì)、α亞基缺失種質(zhì)、β亞基缺失種質(zhì)，IlS組分AlaB2亞基缺失種質(zhì)、A2Bla亞基缺失種質(zhì)、AlbBlb亞基缺失種質(zhì)、A5A4B3亞基缺失種質(zhì)和A3B4亞基缺失種質(zhì)； ⑥對從資源中鑒別出的蛋白7S和IlS組分主要貯藏蛋白7S和IlS組分亞基缺失種質(zhì)，采用多年多點(diǎn)試驗(yàn)方式，觀察其蛋白亞基缺失的遺傳穩(wěn)定性，剔除生態(tài)和遺傳不穩(wěn)定的蛋白亞基缺失種質(zhì)，獲得遺傳穩(wěn)定的蛋白7S和IlS組分亞基缺失種質(zhì)；其中所述的多年指至少兩年，所述的多點(diǎn)指至少2個(gè)試驗(yàn)地點(diǎn)。
3.根據(jù)權(quán)利要求I所述的一種系列優(yōu)質(zhì)蛋白加工專用型大豆種質(zhì)的創(chuàng)制新方法，其特征在于所述的大豆種子主要貯藏蛋白亞基缺失基因的聚合具體方法包括 ①7S組分蛋白亞基(α' +α+β)缺失種質(zhì)的創(chuàng)制 Α.利用篩選獲得的遺傳穩(wěn)定的7S組分α '亞基缺失種質(zhì)、α亞基缺失種質(zhì)以及β亞基缺失種質(zhì)做親本，采用兩兩雜交的方式，獲得雜交Fl代種子，播種Fl代，單株收獲，獲得F2代種子，對各雜交組合收獲的F2代種子，每粒分別取子葉，采用SDS-PAGE法鑒別其是否為7S蛋白亞基雙缺種子，從而獲得7S蛋白亞基雙缺材料α ' +α缺失、α ' +β缺失和α+β缺失種子，F(xiàn)2代種子也可不鑒定,播種種植,單株收獲,再單株內(nèi)種子米用SDS-PAGE鑒定是否為7S組分蛋白亞基雙缺單株或種子；其中所述的兩兩雜交的方式指配制成(α ’亞基缺失種質(zhì)X α亞基缺失種質(zhì))、(α '亞基缺失種質(zhì)X β亞基缺失種質(zhì))、(α亞基缺失種質(zhì)X β亞基缺失種質(zhì))雜交組合進(jìn)行雜交； B.將鑒別為7S蛋白亞基雙缺種子夏播，開花期再兩兩雜交，獲得雜交Fl代種子，播種Fl代，單株收獲，獲得F2代種子，對各雜交組合收獲的F2代種子，每粒分別取子葉，采用SDS-PAGE法鑒別其是否為7S組分蛋白亞基三缺種子，獲得7S組分蛋白亞基α ' +α+β缺失種子；F2代種子也可不鑒定，播種種植，單株收獲，再單株內(nèi)種子采用SDS-PAGE鑒定是否為7S組分蛋白亞基三缺單株或種子；其中所述的兩兩雜交指配制成(α，+α缺失X α ' + β缺失)、(α ' + α缺失X α + β缺失)、(α ' + β缺失X α + β缺失)雜交組合進(jìn)行雜交； C.對獲得的7S組分蛋白亞基雙缺材料(α' +α缺失、α ' +β缺失、α+β缺失)和三缺(α ' +α+β缺失)材料，加代穩(wěn)定和擴(kuò)繁，在加代穩(wěn)定和擴(kuò)繁過程中，繼續(xù)采用SDS-PAGE法鑒定7S蛋白亞基缺失的遺傳穩(wěn)定情況,淘汰遺傳不穩(wěn)定株，留下遺傳穩(wěn)定株，同時(shí)配合脂肪氧合酶缺失、產(chǎn)量和抗病性進(jìn)行選擇； D.最終通過聚合育種的方式獲得遺傳穩(wěn)定的7S組分蛋白亞基雙缺材料(α' +α缺失、α ' + β缺失、α+β缺失)和二缺材料(α ' +α+β缺失)材料； ②IlS組分蛋白亞基缺失種質(zhì)的創(chuàng)制 利用篩選獲得的遺傳穩(wěn)定的IlS組分蛋白AlaB2亞基缺失種質(zhì)、A2BlaM基缺失種質(zhì)、AlbBlb亞基缺失種質(zhì)、A5A4B3亞基缺失種質(zhì)和A3B4亞基缺失種質(zhì)做親本，采用兩兩雜交的方式，獲得雜交Fl代種子，播種Fl代，單株收獲，獲得F2代種子，對各雜交組合收獲的F2代種子，每粒分別取子葉，采用SDS-PAGE法鑒別其是否為IlS組分蛋白亞基雙缺種子，從而獲得HS 組分蛋白亞基雙缺材料AlaB2+A2Bla 缺失、AlaB2+AlbBlb 缺失、AlaB2+A5A4B3 缺失、AlaB2+A3B4缺失、A2Bla+AlbBlb 缺失、A2B1JA5A4B3 缺失、A2Bla+A3B4 缺失、AlbBlb+A5A4B3 缺失、AlbBlb+A3B4 缺失、A5A4B3+A3B4缺失種子，F(xiàn)2代種子也可不鑒定，播種種植，單株收獲，再單株內(nèi)種子采用SDS-PAGE鑒定是否為IlS組分蛋白亞基雙缺單株或種子；其中，所述的兩兩雜交方式指配制成(AlaB2亞基缺失種質(zhì)XA2Bla亞基缺失種質(zhì))、(A2Bla亞基缺失種質(zhì)XAlbBlb亞基缺失種質(zhì))、(AlbBlb亞基缺失種質(zhì)XA5A4B3亞基缺失種質(zhì))、(A5A4B3亞基缺失種質(zhì)XA3B4亞基缺失種質(zhì))、(AlaB2亞基缺失種質(zhì)XA3B4亞基缺失種質(zhì))雜交組合進(jìn)行雜交； B.將鑒別為IlS組分蛋白亞基雙缺的種子夏播，開花期再兩兩雜交，獲得雜交Fl代種子，播種Fl代，單株收獲，獲得F2代種子，對各雜交組合收獲的F2代種子，每粒分別取子葉，采用SDS-PAGE法鑒別其是否為11組分蛋白亞基三缺或四缺種子，從而獲得IlS組分蛋白亞基二缺材料AlaB2+A2Bla+AlbBlb 缺失、AlaB2+A2Bla+A5A4B3 缺失、AlaB2+A2Bla+A3B4 缺失、AiaB2+AibBib+A5A4B3 缺失、AlaB2+AlbBlb+A3B4 缺失、AlaB2+A5A4B3+A3B4 缺失、A2Bla+AlbBlb+A5A4B3缺失、A2Bla+AlbBlb+A3B4 缺失、A2Bla+A5A4B3+A3B4 缺失和 AlbBlb+A5A4B3+A3B4 缺失種子；四缺材料AlaB2+A2Bla+AlbBlb+A5A4B3 缺失、AlaB2+A2Bla+AlbBlb+A3B4 缺失、AlaB2+A2Bla+A5A4B3+A3B4 缺失、AlaB2+AlbBlb+A5A4B3+A3B4 缺失和 A2Bla+AlbBlb+A5A4B3+A3B4 缺失種子；F2 代種子也可不鑒定，播種種植，單株收獲，再單株內(nèi)種子采用SDS-PAGE鑒定是否為IlS組分蛋白亞基三缺、四缺單株或種子；其中，所述的兩兩雜交是指配制成(AlaB2+A2Bla缺失XAlbBlb+A5A4B3缺失)、(AlaB2+A5A4B3 缺失 XAlaB2+A3B4 缺失)、(AlbBlb+A5A4B3 缺失 XAlbBlb+A3B4 缺失)、(AlbBlb+A3B4 缺失XA5A4B3+A3B4缺失)雜父組合進(jìn)彳了雜父； C.對獲得的IlS組分蛋白亞基三缺、四缺材料，通過兩兩相互配制雜交組合，或蛋白亞基四缺材料與單缺材料配制雜交組合，或蛋白亞基三缺材料與兩缺材料配制雜交組合，獲得雜交Fl代種子，雜交組合配制的原則是每個(gè)配制的雜交組合雙親組合起來應(yīng)包含5個(gè)蛋白亞基AlaB2、A2Bla、AlbBlb, A5A4B3和A3B4缺失基因，播種Fl代，單株收獲，獲得F2代種子；對各雜交組合收獲的F2代種子，每粒分別取子葉，采用SDS-PAGE法鑒別其是否為11組分蛋白亞基全缺種子，從而獲得IlS組分蛋白亞基全缺材料AlaB2+A2Bla+AlbBlb+A5A4B3+A3B4全缺種子，F(xiàn)2代種子也可不鑒定，播種種植，單株收獲，再單株內(nèi)種子采用SDS-PAGE鑒定是否為IlS組分蛋白亞基全缺單株或種子； D.對獲得的IlS組分蛋白亞基雙缺、三缺、四缺和全缺材料，加代穩(wěn)定和擴(kuò)繁，在加代穩(wěn)定和擴(kuò)繁過程中，繼續(xù)采用SDS-PAGE法鑒定蛋白亞基缺失穩(wěn)定情況，淘汰遺傳不穩(wěn)定株，留下遺傳穩(wěn)定株，同時(shí)配合脂肪氧合酶缺失、產(chǎn)量和抗病性進(jìn)行選擇； E.最終通過聚合育種的方式獲得遺傳穩(wěn)定的IlS組分蛋白亞基雙缺、三缺、四缺和全缺材料； ③7S+11S組分蛋白亞基全缺種質(zhì)的創(chuàng)制 A.利用創(chuàng)制的7S組分蛋白亞基(α' +α+β )三缺材料和IlS組分蛋白亞基(AlaB2+A2Bla+AlbBlb+A5A4B3+A3B4)全缺材料，配制雜交組合，獲得雜交Fl代種子，播種Fl代，單株收獲，獲得F2代種子，對各雜交組合收獲的F2代種子，每粒分別取子葉，采用SDS-PAGE法鑒別其是否為7S組分蛋白亞基(α ' +α+β)和IlS組分蛋白亞基(AlaB2+A2Bla+AlbBlb+A5A4B3+A3B4)全缺種子，從而獲得7S和IlS組分蛋白亞基全缺材料7S組分蛋白亞基U ' +α +β )和IlS組分蛋白亞基(AlaB2+A2Bla+AlbBlb+A5A4B3+A3B4)全缺種子，F(xiàn)2代種子也可不鑒定，播種種植，單株收獲，再單株采用SDS-PAGE鑒定是否為7S和IlS組分蛋白亞基全缺單株或種子； B.對獲得的7S和IlS組分蛋白亞基全缺材料，加代穩(wěn)定和擴(kuò)繁，在加代穩(wěn)定和擴(kuò)繁過程中，繼續(xù)采用SDS-PAGE法鑒定蛋白亞基缺失穩(wěn)定情況，淘汰遺傳不穩(wěn)定株，留下遺傳穩(wěn)定株，同時(shí)配合脂肪氧合酶缺失、產(chǎn)量和抗病性進(jìn)行選擇； C.最終通過聚合育種的方式獲得遺傳穩(wěn)定的7S組分蛋白亞基(α' +α+β)三缺材料、IlS組分蛋白亞基(AlaB2+A2Bla+AlbBlb+A5A4B3+A3B4)全缺材料以及7S和IlS組分蛋白亞基全缺材料。
4.根據(jù)權(quán)利要求I所述的一種系列優(yōu)質(zhì)蛋白加工專用型大豆種質(zhì)的創(chuàng)制新方法，其特征在于所述的適宜于我國大豆各主產(chǎn)區(qū)的7S和IlS組分蛋白亞基缺失材料的創(chuàng)制具體方法包括 ①7S組分蛋白亞基缺失材料的創(chuàng)制 A.以創(chuàng)制的7S組分蛋白亞基(α' +α+β)全缺材料為親本，與我國各大豆主產(chǎn)區(qū)目前主推品種分別配置雜交組合，獲得雜交Fl代種子，播種Fl代，單株收獲，獲得F2代種子，對各雜交組合收獲的F2代種子，每粒分別取子葉，采用SDS-PAGE法鑒別其是否為7S組分蛋白亞基單缺、雙缺和二缺種子，從而犾得7S組分蛋白亞基單缺材料α '缺失、α缺失和β缺失種子；雙缺材料ct ' + α缺失、α ' + β缺失和α+β缺失種子；三缺材料α ' +α+β缺失種子，F(xiàn)2代種子也可不鑒定，播種種植，單株收獲，再單株內(nèi)種子采用SDS-PAGE鑒定是否為7S組分蛋白亞基單缺、雙缺和三缺單株或種子； B.對獲得的7S組分蛋白亞基單缺(α'缺失、α缺失和β缺失)、雙缺材料(α ' +α缺失、α 1 + β缺失、α+β缺失)和二缺(α ' +α+β缺失)材料，加代穩(wěn)定和擴(kuò)繁，在加代穩(wěn)定和擴(kuò)繁過程中，繼續(xù)采用SDS-PAGE法鑒定7S蛋白亞基缺失的遺傳穩(wěn)定情況，淘汰遺傳不穩(wěn)定株，留下遺傳穩(wěn)定株，同時(shí)配合脂肪氧合酶缺失、產(chǎn)量和抗病性進(jìn)行選擇； C.最終通過聚合育種的方式獲得各種類型的、遺傳穩(wěn)定的7S組分蛋白亞基雙缺材料(ct ' + α缺失、α ' + β缺失、α+β缺失)和二缺材料(ct ' +α+β缺失)材料；并進(jìn)而培育成品系； ②IlS組分蛋白亞基缺失材料的創(chuàng)制 Α.以創(chuàng)制的IlS組分蛋白亞基(AlaB2+A2Bla+AlbBlb+A5A4B3+A3B4)全缺材料為親本，與我國各大豆主產(chǎn)區(qū)目前主推品種分別配置雜交組合，獲得雜交Fl代種子，播種Fl代，單株收獲，獲得F2代種子，對各雜交組合收獲的F2代種子，每粒分別取子葉，采用SDS-PAGE法鑒別其是否為IlS組分蛋白亞基單缺、雙缺、三缺、四缺和全缺種子，從而獲得IlS組分蛋白亞基單缺材料=AlaB2缺失、A2Bla缺失、AlbBlb缺失、A5A4B3缺失和A3B4缺失種子；雙缺材料:AlaB2+A2Bla缺失、AlaB2+AlbBlb 缺失、AlaB2+A5A4B3 缺失、AlaB2+A3B4 缺失、A2Bla+AlbBlb 缺失、A2B1^A5A4B3 缺失、A2B1JA3B4 缺失、AlbBlb+A5A4B3 缺失、AlbBlb+A3B4 缺失和 A5A4B3+A3B4 缺失種子；三缺材料AiaB2+A2Bia+AibBib 缺失、AlaB2+A2Bla+A5A4B3 缺失、AlaB2+A2Bla+A3B4 缺失、AlaB2+AlbBlb+A5A4B3 缺失、AiaB2+AibBib+A3B4 缺失、AlaB2+A5A4B3+A3B4 缺失、A2Bla+AlbBlb+A5A4B3 缺失、A2Bla+AlbBlb+A3B4 缺失、A2Bla+A5A4B3+A3B4 缺失和 AlbBlb+A5A4B3+A3B4 缺失種子；四缺材料AlaB2+A2Bla+AlbBlb+A5A4B3 缺失、AiaB2+A2Bia+AibBib+A3B4 缺失、AlaB2+A2Bla+A5A4B3+A3B4 缺失、AlaB2+AlbBlb+A5A4B3+A3B4 缺失和A2Bla+AlbBlb+A5A4B3+A3B4 缺失種子；全缺材料:AlaB2+A2Bla+AlbBlb+A5A4B3+A3B4 全缺種子，F(xiàn)2 代種子也可不鑒定，播種種植，單株收獲，再單株內(nèi)種子采用SDS-PAGE鑒定是否為IlS組分蛋白亞基單缺、雙缺、三缺、四缺和全缺單株或種子； B.對獲得的IlS組分蛋白亞基單缺、雙缺、三缺、四缺和全缺材料，加代穩(wěn)定和擴(kuò)繁，在加代穩(wěn)定和擴(kuò)繁過程中，繼續(xù)采用SDS-PAGE法鑒定7S蛋白亞基缺失的遺傳穩(wěn)定情況，淘汰遺傳不穩(wěn)定株，留下遺傳穩(wěn)定株，同時(shí)配合脂肪氧合酶缺失、產(chǎn)量和抗病性進(jìn)行選擇； C.最終通過聚合育種的方式獲得各種類型的、遺傳穩(wěn)定的IlS組分蛋白亞基單缺、雙缺、三缺、四缺和全缺材料；并進(jìn)而培育成品系； ③7S和IlS組分蛋白亞基缺失材料的創(chuàng)制 A.以創(chuàng)制的7S+11S組分蛋白亞基全缺材料為親本，與我國各大豆主產(chǎn)區(qū)目前主推品種分別配置雜交組合，獲得雜交Fl代種子，播種Fl代，單株收獲，獲得F2代種子，對各雜交組合收獲的F2代種子，每粒分別取子葉，釆用SDS-PAGE法鑒別其是否為7S和IlS組分蛋白亞基單缺、雙缺、三缺、四缺、五缺、六缺、七缺和全缺種子，從而獲得單缺材料α '缺失、α缺失、β缺失、AlaB2缺失、A2Bla缺失、AlbBlb缺失、A5A4B3缺失和A3B4亞基缺失種子；雙缺材料α ! +α缺失、α ! +β缺失、α+β缺失、AlaB2+A2Bla缺失、AlaB2+AlbBlb 缺失、AlaB2+A5A4B3 缺失、AlaB2+A3B4 缺失、A2Bla+AlbBlb 缺失、A2Bla+A5A4B3 缺失、A2B1^A3B4 缺失、AlbBlb+A5A4B3 缺失、AlbBlb+A3B4 缺失、A5A4B3+A3B4 缺失、α , +AlaB2 缺失、ct ! +A2Bla 缺失、a ! +AlbBlb 缺失、a ! +A5A4B3 缺失、a ! +A3B4 亞基缺失、a+AlaB2 缺失、a +A2Bla 缺失、ct +AlbBlb 缺失、ct +A5A4B3 缺失、ct +A3B4 缺失、β +AlaB2 缺失、β +A2Bla缺失、β+AlbBlb缺失、β+A5A4B3缺失和β+A3B4缺失種子；二缺材料ct 1 +α+β缺失、AiaB2+A2Bia+AibBib 缺失、AiA+A2Bla+A5A4B3 缺失、AlaB2+A2Bla+A3B4 缺失、AlaB2+AlbBlb+A5A4B3 缺失、AiaB2+AibBib+A3B4 缺失、AlaB2+A5A4B3+A3B4 缺失、A2Bla+AlbBlb+A5A4B3 缺失、A2Bla+AlbBlb+A3B4 缺失、A2Bla+A5A4B3+A3B4 缺失、AlbBlb+A5A4B3+A3B4 缺失、α ' +AlaB2+A2Bla缺失、α ' +AlaB2+AlbBlb 缺失、ct f +AlaB2+A5A4B3 缺失、a f +AlaB2+A3B4 缺失、a f +A2Bla+AlbBlb 缺失、a f +A2Bla+A5A4B3 缺·失、a f +A2Bla+A3B4 缺失、a f +AlbBlb+A5A4B3 缺失、a f +AlbBlb+A3B4 缺失、a f +A5A4B3+A3B4缺失、α +AlaB2+A2Bla 缺失、ct +AlaB2+AlbBlb 缺失、ct +AlaB2+A5A4B3 缺失、ct +AlaB2+A3B4 缺失、a +A2Bla+AlbBlb 缺失、a +A2Bla+A5A4B3 缺失、α +A2Bla+A3B4 缺失、a +AlbBlb+A5A4B3 缺失、ct +AlbBlb+A3B4 缺失、α +A5A4Bg+A3B4 缺失、β +AlaB2+A2Bla 缺失、β +AlaB2+AlbBlb 缺失、β +AlaB2+A5A4B3 缺失、β +AlaB2+A3B4 缺失、β +A2Bla+AlbBlb 缺失、β +A2Bla+A5A4B3 缺失、β +A2Bla+A3B4 缺失、β +AlbBlb+A5A4B3 缺失、β +AlbBlb+A3B4 缺失、β +A5A4Bg+A3B4 缺失、α 1 +a+AlaB2 缺失、ct 1 +a+A2Bla 缺失、ct 1 +a+AlbBlb 缺失、ct 1 + a+A5A4B3 缺失、α ' + a +A3B4 缺失、ct ' + β +AlaB2 缺失、ct ' + β +A2Bla 缺失、ct ' + β +AlbBlb 缺失、ct 1 + β +A5A4B3 缺失、ct 1 + β +A3B4 缺失、α+β +AlaB2 缺失、α+β +A2Bla 缺失、α+β +AlbBlb 缺失、α+β +A5A4B3 缺失、α+β +A3B4 缺失；四缺材料ct 1 +α+β +AlaB2 缺失、ct 1 +α+β +A2Bla 缺失、ct 1 +α+β +AlbBlb 缺失、ct 1 +α+β +A5A4B3 缺失、ct 1 +α+β +A3B4缺失、α ' + a +AlaB2+A2Bla 缺失、ct ' + a +AlaB2+AlbBlb 缺失、ct f + a +AlaB2+A5A4B3 缺失、α ! + a+AlaB2+A3B4 缺失、α ! + a +A2Bla+AlbBlb 缺失、α ! + a +A2Bla+A5A4B3 缺失、α ! + a+A2Bla+A3B4 缺失、α ! + a +AlbBlb+A5A4B3 缺失、α ! + a +AlbBlb+A3B4 缺失、a f + a+A5A4B3+A3B4 缺失、a f + β+AlaB2+A2Bla 缺失、a f + β+AlaB2+AlbBlb 缺失、a f + β+AlaB2+A5A4B3 缺失、a f + β+AlaB2+A3B4 缺失、a f + β+A2Bla+AlbBlb 缺失、a f + β+A2Bla+A5A4B3 缺失、a f + β+A2Bla+A3B4 缺失、a f + β+AlbBlb+A5A4B3 缺失、a f + β+AlbBlb+A3B4 缺失、a f + β+A5A4B3+A3B4 缺失、α+β +AlaB2+A2Bla 缺失、α+β +AlaB2+AlbBlb 缺失、α+β +AlaB2+A5A4B3 缺失、α+β +AlaB2+A3B4 缺失、α+β +A2Bla+AlbBlb缺失、α + β+A2Bla+A5A4B3 缺失、α + β+A2Bla+A3B4 缺失、α + β+AlbBlb+A5A4B3 缺失、α+β +AlbBlb+A3B4 缺失、α+β +A5A4Bg+A3B4 缺失種子；五缺材料:α ' +α+β +AlaB2+A2Bla 缺失、α ' +α+β +AlaB2+AlbBlb 缺失、ct 1 +α+β +AlaB2+A5A4B3 缺失、ct 1 +α+β +AlaB2+A3B4 缺失、α ' +α+β +A2Bla+AlbBlb 缺失、ct 1 +α+β +A2B1^A5A4B3 缺失、α ' +α+β +A2Bla+A3B4 缺失、α ' +α+β +AlbBlb+A5A4B3 缺失、ct 1 +α+β +AlbBlb+A3B4 缺失、ct 1 +α+β +Α5Α4Β3+Α3Β4缺失、α ' +ct +AlaB2+A2Bla+AlbBlb 缺失、α ' + a +AlaB2+A2Bla+A5A4B3 缺失、α ' + a +AlaB2+A2Bla+A3B4 缺失、ct ' + a +AlaB2+AlbBlb+A5A4B3 缺失、ct ' + a +AlaB2+AlbBlb+A3B4缺失、α 1 + ct+AlaB2+A5A4B3+A3B4 缺失、α 1 + a +A2Bla+AlbBlb+A5A4B3 缺失、ct 1 + a +A2Bla+AlbBlb+A3B4 缺失、ct 1 + a +A2Bla+A5A4B3+A3B4 缺失、ct 1 + a +AlbBlb+A5A4B3+A3B4缺失、α ' +β +AlaB2+A2Bla+AlbBlb 缺失、α ' + β +AlaB2+A2Bla+A5A4B3 缺失、a f + β+AlaB2+A2Bla+A3B4 缺失、a f + β+AlaB2+AlbBlb+A5A4B3 缺失、a f + β+AlaB2+AlbBlb+A3B4缺失、α 1 + β+AlaB2+A5A4B3+A3B4 缺失、a f + β +A2Bla+AlbBlb+A5A4B3 缺失、α ' + β +A2Bla+AlbBlb+A3B4 缺失、ct ' + β +A2Bla+A5A4B3+A3B4 缺失、ct ' + β +AlbBlb+A5A4B3+A3B4缺失、ct + β +AlaB2+A2Bla+AlbBlb 缺失、α+β +AlaB2+A2Bla+A5A4B3 缺失、α+β +AlaB2+A2Bla+A3B4缺失、ct + β +AlaB2+AlbBlb+A5A4B3 缺失、α+β +AlaB2+AlbBlb+A3B4 缺失、α+β +AlaB2+A5A4B3+A3B4缺失、ct + β +A2Bla+AlbBlb+A5A4B3 缺失、α+β +A2Bla+AlbBlb+A3B4 缺失、α+β +A2Bla+A5A4B3+A3B4缺失、α + β+AlbBlb+A5A4B3+A3B4 缺失、a f +AlaB2+A2Bla+AlbBlb+A5A4B3 缺失、α ! +AlaB2+A2Bla+AlbBlb+A3B4 缺失、α ! +AlaB2+A2Bla+A5A4B3+A3B4 缺失、α +^laB2+AlbBlb+A5A4B3+A3B4 缺失、α +A2Bla+AlbBlb+A5A4B3+A3B4 缺失、 α +AlaB2+A2Bla+AlbBlb+A5A4B3 缺失、a +AlaB2+A2Bla+AlbBlb+A3B4 缺失、α +AlaB2+A2Bla+A5A4B3+A3B4缺失、ct+AlaB2+AlbBlb+A5A4B3+A3B4 缺失、a+A2Bla+AlbBlb+A5A4B3+A3B4 缺失、β +AlaB2+A2Bla+AlbBlb+A5A4B3 缺失、β +AlaB2+A2Bla+AlbBlb+A3B4 缺失、β +AlaB2+A2Bla+A5A4B3+A3B4缺失、β+AlaB2+AlbBlb+A5A4B3+A3B4 缺失、β+A2Bla+AlbBlb+A5A4B3+A3B4 缺失和AlaB2+A2Bla+AlbBlb+A5A4B3+A3B4 缺失；六缺材料α ' + α + β+AlaB2+A2Bla+AlbBlb 缺失、ct ' +α+β +AlaB2+A2Bla+A5A4B3 缺失、ct ' +α+β +AlaB2+A2Bla+A3B4 缺失、α ! +α+β +AlaB2+AlbBlb+A5A4B3 缺失、α ! +α+β +AlaB2+AlbBlb+A3B4 缺失、ct ' + ct + β+AlaB2+A5A4B3+A3B4 缺失、ct ' + ct + β+A2Bla+AlbBlb+A5A4B3 缺失、ct ' +α+β +A2Bla+AlbBlb+A3B4 缺失、α ' +α+β +A2Bla+A5A4B3+A3B4 缺失、α ! + α + β+AlbBlb+A5A4B3+A3B4 缺失、ct ! + a+AlaB2+A2Bla+AlbBlb+A5A4B3 缺失、α ! + a +AlaB2+A2Bla+AlbBlb+A3B4 缺失、α ! + ct+AlaB2+A2Bla+A5A4B3+A3B4 缺失、α ! +α+AlaB2+AlbBlb+A5A4B3+A3B4 缺失、α ! + a+A2Bla+AlbBlb+A5A4B3+A3B4 缺失、α ! +β+AlaB2+A2Bla+AlbBlb+A5A4B3 缺失、α ! + β+AlaB2+A2Bla+AlbBlb+A3B4 缺失、α f + β+AlaB2+A2Bla+A5A4B3+A3B4 缺失、a f + β+AlaB2+AlbBlb+A5A4B3+A3B4 缺失、α 1 + β+A2Bla+AlbBlb+A5A4B3+A3B4 缺失、α 1 + β + α + β AlaB2+A2Bla+AlbBlb+A5A4B3 缺失、α f + β+AlaB2+A2Bla+AlbBlb+A3B4 缺失、ct f + β+AlaB2+A2Bla+A5A4B3+A3B4 缺失、a f + β+AlaB2+AlbBlb+A5A4B3+A3B4 缺失、a f + β+A2Bla+AlbBlb+A5A4B3+A3B4 缺失、α +AlaB2+A2Bla+AlbBlb+A5A4B3+A3B4 缺失、a +AlaB2+A2Bla+AlbBlb+A5A4B3+A3B4 缺失、β +AlaB2+A2Bla+AlbBlb+A5A4B3+A3B4 缺失種子；七缺材料ct ' +α+β +AlaB2+A2Bla+AlbBlb+A5A4B3缺失、α ' +α+β +AlaB2+A2Bla+AlbBlb+A3B4 缺失、ct ' +α+β +AlaB2+A2Bla+A5A4B3+A3B4 缺失、ct ' +α+β +AlaB2+AlbBlb+A5A4B3+A3B4 缺失、ct ' +α+β +A2Bla+AlbBlb+A5A4B3+A3B4 缺失、ct ' +ct+AlaB2+A2Bla+AlbBlb+A5A4B3+A3B4 缺失、α ! + β+AlaB2+A2Bla+AlbBlb+A5A4B3+A3B4 缺失、α+β+AiaB2+A2Bla+AlbBlb+A5A4B3+A3B4 缺失種子；全缺材料ct ' +α+β +AlaB2+A2Bla+AlbBlb+A5A4B3+A3B4全缺種子，F(xiàn)2代種子也可不鑒定，播種種植，單株收獲，再單株內(nèi)種子釆用SDS-PAGE鑒定是否為7S和IlS組分蛋白亞基單缺、雙缺、三缺、四缺、五缺、六缺、七缺和全缺種子；B.對獲得的7S和IlS組分蛋白亞基單缺、雙缺、三缺、四缺、五缺、六缺、七缺和全缺材料，加代穩(wěn)定和擴(kuò)繁，在加代穩(wěn)定和擴(kuò)繁過程中，繼續(xù)釆用SDS-PAGE法鑒定7S和IlS組分蛋白亞基缺失的遺傳穩(wěn)定情況，淘汰遺傳不穩(wěn)定株，留下遺傳穩(wěn)定株，同時(shí)配合脂肪氧合酶缺失、產(chǎn)量和抗病性進(jìn)行選擇； C.最終通過聚合育種的方式獲得各種類型的、遺傳穩(wěn)定的7S和IlS組分蛋白亞基單缺、雙缺、三缺、四缺、五缺、六缺、七缺和全缺材料；并進(jìn)而培育成品系。
5.根據(jù)權(quán)利要求2 4中任一項(xiàng)所述的一種系列優(yōu)質(zhì)蛋白加工專用型大豆種質(zhì)的創(chuàng)制新方法，其特征在于所述的取子葉，采用SDS-PAGE法鑒別方法如下將3-10mg所取樣品磨碎,加入100 μ I樣品緩沖液，4°C下過夜,點(diǎn)樣前渦旋混勻；其中所述的樣品緩沖液配方為I % SDS, O. lmol/LTris-HCl, O. 01mol/L β -巰基乙醇,O. lg/L 溴酌·藍(lán),150g/L 鹿糖,ρΗ8· O。
6.根據(jù)權(quán)利要求I所述的一種系列優(yōu)質(zhì)蛋白加工專用型大豆種質(zhì)的創(chuàng)制新方法，其特征在于所述的大豆種子主要貯藏蛋白亞基缺失基因供體材料主要是通過從我國大豆種質(zhì)資源中篩選獲得。
7.根據(jù)權(quán)利要求I所述的大豆種子主要貯藏蛋白亞基缺失基因供體材料也可以通過誘變育種方式獲得。
8.根據(jù)權(quán)利要求I所述的一種系列優(yōu)質(zhì)蛋白加工專用型大豆種質(zhì)的創(chuàng)制新方法，其特征在于所述的大豆種子蛋白亞基缺失基因聚合過程中，在采用雜交育種方法的基礎(chǔ)上，結(jié)合回交育種方法。
9.根據(jù)權(quán)利要求I所述的大豆種子蛋白亞基缺失基因的鑒定方法，在采用SDS-PAGE方法基礎(chǔ)上，結(jié)合分子檢測手段進(jìn)行。
10.按照權(quán)利要求I所述的方法創(chuàng)制的各種類型的、遺傳穩(wěn)定的大豆種子7S和IlS組分蛋白亞基單缺、雙缺、三缺、四缺、五缺、六缺、七缺和全缺材料，及其培育出的品系和品種。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種系列優(yōu)質(zhì)蛋白加工專用型大豆種質(zhì)的創(chuàng)制新方法。利用我國大豆種質(zhì)資源中存在的豐富的種子主要貯藏蛋白(7S和11S組分)亞基缺失基因，通過聚合育種和雜交育種的方式并結(jié)合SDS-PAGE法鑒定和選擇，首先創(chuàng)制出7S組分蛋白亞基缺失種質(zhì)、11S組分蛋白亞基缺失種質(zhì)以及7S+11S組分蛋白亞基全缺種質(zhì)，進(jìn)而再利用這些特異性種質(zhì)，通過與我國目前主推品種分別配置雜交組合，通過選擇和穩(wěn)定，最終獲得各種類型的、遺傳穩(wěn)定的7S和11S組分蛋白亞基單缺、雙缺、三缺、四缺、五缺、六缺、七缺和全缺材料，并進(jìn)而培育成品系，從而加快我國蛋白加工專用型大豆品種的培育進(jìn)程，為我國大豆蛋白加工利用提供優(yōu)質(zhì)原材料。
文檔編號A01H1/04GK102939899SQ20121049286
公開日2013年2月27日 申請日期2012年11月27日 優(yōu)先權(quán)日2012年11月27日
發(fā)明者麻浩, 何小玲, 劉春 , 張國敏, 楊艷 申請人:南京農(nóng)業(yè)大學(xué)