專利名稱：一種促進高山杜鵑紫水晶組培生根的技術方法
技術領域：
本發明屬于植物栽培技術領域，尤其是木本觀賞植物組培快繁方法領域，具體涉及一種促進高山杜鵑紫水晶組培生根的技術方法。
背景技術：
高山杜鵑是杜鵑花科杜鵑花屬中常綠闊葉種類及其雜交后代的總稱，常生長于海拔IOOOm以上的高山上。紫水晶(Rhododendron hybrids iRoseum Elegans’)是目前市場上比較受歡迎的高山杜鵑之一，常綠灌木或小喬木，高可達3米，花期4-5月份，花為略顯玫紅色的丁香紫色，漏斗狀，單朵花直徑達6cm，花瓣帶有棕色花紋圖案，總狀傘型花序直徑可達15-30cm，葉大色深，特耐寒且耐熱，-26°C下不落葉，抗病力強。紫水晶因其花序碩大、花色鮮艷、葉片四季常青而備受人們的喜愛，不僅是國內高檔的年宵花卉，也是國際上高檔的 園林綠化美化材料，必將成為我國高檔園林綠化樹種應用的新秀，具有廣闊的市場開發前
旦
-5^ O目前，國內市場上銷售的高山杜鵑基本全是從國外進口，每盆售價高達數百至上千元，價格一直居高不下，種苗市場緊俏。且在栽培過程中發現高山杜鵑扦插成活率低、種子繁殖性狀分離等問題，因此國內已經有科研工作者從事高山杜鵑組織培養技術的研究，已成功建立組織培養快繁體系的種類有馬纓杜鵑、云錦杜鵑以及一些國外品種(Lee’ sDark Purple、Rocket、Jean de Marie Montage> Nova Zembla、Cosmopolitan 等)，但在紫水晶組織培養特別是生根技術方面的研究仍未見報道。

發明內容
本發明的目的在于提供一種促進高山杜鵑紫水晶組培生根的技術方法。為實現本發明的目的，本發明提供了如下技術方案I、一種促進高山杜鵑組培苗生根的方法，其內容包括在無菌超凈工作臺上，將生長健壯的無菌叢生芽用剪刀剪下，接種到如下生根培養基中1/2WPM基本培養基，添加NAA10mg/L,蔗糖10g/L，活性炭0. 3g/L，瓊脂粉6g/L。先進行3天的暗培養，然后光培養7天結束后，在無菌超凈工作臺上，將芽苗取出，轉接到不含激素的1/2WPM基本培養基中，繼續進行30-40天的光培養。2、在本發明中WPM培養基是參考Lloyd G and McCown B (1980)的文獻，1/2WPM即大量元素和微量元素用量為原文獻里元素用量的一半，而其他元素(包括有機元素和鐵鹽)均不變°參考文獻LloydG and McCown B. Commercially-feasible micropropagationof mountain laurel, Kalmia latifolia, by use of shoottip culture[J]. CombinedProceedings-International Plant Propagators’ Society, 1980, 30 :421-4273、在本發明中NAA 即為蔡乙酸(1-naphthylacetic acid)。4、在本發明中采用的是IOOml的錐形玻璃瓶作為培養器皿，每瓶中分裝的培養基為40-50ml，培養基添加激素并調至pH值53-5. 8后，分裝，在121°C下高壓滅菌20min。
5、在本發明中光培養條件為白天溫度為25土1°C，夜間溫度為20土1°C，光照強度為50μπιΟ1 ·πΓ2 · s—1，每天光照12h。暗培養條件為白天溫度為25±1°C，夜間溫度為20±1°C，無光照。本發明經過以下試驗，優選總結出上述最佳的技術參數(I)、應用正交設計，從不同激素種類、激素濃度、轉空白培養前天數、糖用量4個方面探討紫水晶組培苗生根的情況，應用L9(3)4正交表，共設9個處理，以不添加激素和30g/L糖為對照，實驗設計及結果如下表I :表I高山杜鵑紫水晶組培生根正交試驗結果分析表
~激素濃度轉空白培養前\
編號激素種類糖用量(g/L) 生根率(％)
(mg/L)天數(d)
試驗 INAA25 ~ 1029
試驗 2NAA5102031.6
試驗 3NAA10153028.3
試驗 4IBA2103040.0
試驗 5IBA5_~15K) ' 2 8
_ 試驗 6IBA10520208
_~試驗 7IAA215 ' 2Q ~ 143
試驗 8IAA55^301^5
試驗 9IAA10101035.7
均值 I — 29^62782312^5^
均值 228225 35^8222-
均值 323.228322Λ293^
WM 6.466 3.300 13.634 267CK (對照) - ~ : 30 222\ ----根據正交分析，當激素種類選擇NAA、濃度為10mg/L、轉空白培養前天數為IOd以及糖用量為10g/L時，生根效果將會最佳。(2)、在試驗(I)的基礎上，將最優試驗處理組合(培養基中NAA 10mg/L，轉空白培養前天數為IOd以及糖用量為10g/L)與正交試驗4進行比較試驗。結果表明最優試驗處理組合和正交試驗4的生根率分別為56. 8%,42. I%，二者存在著顯著差異，且最優試驗處理組合的組培苗根系較粗壯、根系二級分支較多。
具體實施例方式為進一步了解本發明的發明內容及功效，茲例舉以下實施例，實施例中所使用的實驗方法若無特殊說明均為常規方法I、無菌叢生芽的準備生根試驗開始前60天，選取健壯無病蟲害的紫水晶植株帶芽莖段為外植體，進行外植體的清洗、消毒、芽萌發及叢生芽誘導，具體步驟參考文獻劉曉青，蘇家樂，項立平，等.高山杜鵑莖段組培培養和優化體系的建立[J].揚州大學學報(農業與生命科學版)，2007，28 (3) :91-94.2、培養基的準備參考1980年Lloyd G and McCown B的文獻里元素用量，分別將大量元素和微量元素用量減半，有機元素和鐵鹽用量不變，即為1/2WPM基本培養基。生根培養基是在基本培養基的基礎上添加了 10mg/L的NAA。基本培養基和生根培養基均是添加10g/L蔗糖、03g/L活性炭、6g/L瓊脂粉，調pH值為53-5. 8后，分裝，在121°C下高壓滅菌20mino3、生根誘導選取健壯的無菌叢生芽，在無菌超凈工作臺上，將叢生芽用剪刀剪下，接種到生根培養基中，先進行3天的暗培養，然后進行光培養7天，光培養結束后，在無菌超凈工作臺上，將芽苗取出，直接轉接到不含激素的1/2WPM基本培養基中，繼續進行30-40天的光培養。
4、馴化及移栽將已生根的組培瓶苗，轉移到陽面室內進行自然光溫馴化5-7天，然后再將組培瓶的封口膜去掉，并在每瓶中添加IOml的蒸餾水，進行有菌條件馴化2-3天。然后，用鑷子將組培苗輕輕的從瓶中取出，在清水中小心地將根部黏附的培養基清洗掉，并用O. I %多菌靈或O. 3 % -O. 5 %的高錳酸鉀浸泡根系5分鐘以消毒殺菌，然后移栽到已提前2天用5%的高錳酸鉀進行消毒的栽培基質(泥炭珍珠巖=4 I)中，放置無加溫加光的溫室中，進行遮蔭馴化3周，期間不定期的噴施1/2WPM營養液以保證足夠的營養和濕度。3周后可進行常規田間養護管理。以上所述，僅為本發明較佳的具體實施方式
，不是對本發明的具體限制，但本發明的保護范圍并不局限于此，任何熟悉技術領域的技術人員在本發明揭露的技術范圍內，可輕易想到的變化或替換，都應涵蓋在本發明的保護范圍之內。
權利要求
1.一種促進高山杜鵑紫水晶組培生根的技術方法，其特征在于在無菌超凈工作臺上，將生長健壯的無菌叢生芽用剪刀剪下，接種到如下生根培養基中1/2WPM基本培養基，添加NAA10mg/L，蔗糖10g/L，活性炭O. 3g/L，瓊脂粉6g/L。先進行3天的暗培養，然后光培養7天結束后，在無菌超凈工作臺上，將芽苗取出，轉接到不含激素的1/2WPM基本培養基中，繼續進行30-40天的光培養。
2.根據權利要求I所述的促進高山杜鵑紫水晶組培生根的技術方法，其特征在于WPM培養基是參考Lloyd G and McCown B (1980)的文獻，1/2WPM即大量元素和微量元素用量在原文獻里元素用量的一半，而其他元素(包括有機元素和鐵鹽)均不變。
3.根據權利要求I所述的促進高山杜鵑紫水晶組培生根的技術方法，其特征在于-MA即為蔡乙酸(l_naphthylacetic acid)。
4.根據權利要求I所述的促進高山杜鵑紫水晶組培生根的技術方法，其特征在于采用的是IOOml的錐形玻璃瓶作為培養器皿，每瓶中分裝的培養基為40-50ml，培養基添加激素并調至pH值5. 3-5. 8后，分裝，在121°C下高壓滅菌20min。
5.根據權利要求I所述的促進高山杜鵑紫水晶組培生根的技術方法，其特征在于光培養條件為白天溫度為25土1°C，夜間溫度為20+l°C，光照強度為50μπιΟ1 · m_2 · s—1，每天光照12h。暗培養條件為白天溫度為25±1°C，夜間溫度為20±1°C，無光照。
全文摘要
本發明公開了一種促進高山杜鵑紫水晶組培生根的方法。該方法為在無菌超凈工作臺上，將生長健壯的無菌叢生芽用剪刀剪下，接種到如下生根培養基中1/2WPM基本培養基，添加NAA10mg/L，蔗糖10g/L，活性炭0.3g/L，瓊脂粉6g/L。先進行3天的暗培養，然后光培養7天結束后，在無菌超凈工作臺上，將芽苗取出，轉接到不含激素的1/2WPM基本培養基中，繼續進行30-40天的光培養。使用本方法組培苗生根率能提高30％以上，大大提高了紫水晶組培苗的生根率，且此方法處理得到的組培苗根系較粗壯、根系二級分支較多，更易于移栽成活。
文檔編號A01H4/00GK102919133SQ201210506679
公開日2013年2月13日 申請日期2012年12月3日 優先權日2012年12月3日
發明者何麗斯, 蘇家樂, 劉曉青, 李暢, 陳尚平 申請人:江蘇省農業科學院