一種龍爪柳未生根組培苗的生根方法
【專利摘要】本發(fā)明提供了一種龍爪柳未生根組培苗的生根方法，通過包括MS、0.01～1mg/L萘乙酸（NAA）、0.01～1mg/L6-芐氨基腺嘌呤(6-BA)、30g/L蔗糖、6.5g/L瓊脂粉和0.5～3g/L活性炭制備得到的培養(yǎng)基對龍爪柳未生根組培苗進(jìn)行生根培養(yǎng)，根據(jù)本發(fā)明提供的方法未生根組培苗生根快，生根率高，并且在組織培養(yǎng)過程中無需更換培養(yǎng)基配方，簡化組織培養(yǎng)操作，具有較高的科學(xué)價(jià)值、經(jīng)濟(jì)價(jià)值及實(shí)用價(jià)值。
【專利說明】一種龍爪柳未生根組培苗的生根方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及林木培育領(lǐng)域，尤其涉及植物組織培養(yǎng)。
【背景技術(shù)】
[0002]龍爪柳，又名龍須柳，拉丁名:Salix matsudana var.tortuosa,科名:楊柳科Salicaceae柳屬，是生長在東北、華北、西北、華東等地的楊柳科柳屬落葉灌木或小喬木，濕地、旱地皆能生長，生長快，其有陽性，耐寒等特點(diǎn)，春至夏季為適期，其枝條卷曲，姿態(tài)別致，在園林中廣泛應(yīng)用栽培。但其數(shù)量有限，并且自身繁殖不易，因此在園林應(yīng)用中受到一定的限制，目前尚無良好的繁殖方法對其進(jìn)行大規(guī)模繁殖。
[0003]龍爪柳的繁殖方法有播種法或扦插法繁殖。其中，播種法即是在適宜萌芽的條件下在土壤中播撒龍爪柳種子，等待龍爪柳自然萌芽。這種方法受氣候、土壤、水源等自然條件限制嚴(yán)重，選種、播種工作繁重，勞動強(qiáng)度大，出芽率低，因此播種法逐漸被淘汰。
[0004]相對于播種法扦插法具有操作簡單、繁殖速度快等特點(diǎn)。傳統(tǒng)的龍爪柳扦插技術(shù)的生根方法主要有以下兩種:
[0005]一種為自然生根法，即在不做任何處理的情況下，讓扦插苗在土壤中自然生根，該方法成活率低，生根慢，會受限于土壤、天氣、氣候等自然條件；另一種方法為，在扦插前，用中國林業(yè)科學(xué)研究院生產(chǎn)的ATB生根粉對扦插苗進(jìn)行處理，然后再使扦插苗在土壤中生根，該方法相對于不作處理的方法提高了生根率，但操作復(fù)雜，而且重復(fù)性不高。
[0006]以上兩種扦插方法均會受到季節(jié)限制及數(shù)量限制，同時(shí)需要優(yōu)選種條，種條用量大，在扦插過程中不便運(yùn)輸攜帶。
[0007]然而，植物組織培養(yǎng)則具有繁育速度快、組培苗成活率高、培養(yǎng)條件人為可控、不受自然環(huán)境影響等諸多優(yōu)勢，目前，存在大量通過組織培養(yǎng)的方法進(jìn)行植物繁殖及所用培養(yǎng)基的報(bào)道，如中國專利CN102860261A中公開了一種花葉玉簪植物組織培養(yǎng)基配制方法，其分化培養(yǎng)基配方為:基本培養(yǎng)基MS、6-芐氨基嘌呤1.2~1.8毫克/升、1-萘乙酸0.08~0.12毫克/升、蔗糖25000~35000毫克/升、瓊脂粉4000~6000毫克/升，該培養(yǎng)基主要用于多年生宿根草本花卉玉簪的組織分化培養(yǎng)，并未用于其組培苗的生根培養(yǎng)。再如中國專利CN101953307A中公開了一種通過植物組織培養(yǎng)生產(chǎn)福建道地金線蓮的方法，將經(jīng)過無菌處理后的福建道地金線蓮小段組織在誘導(dǎo)培養(yǎng)基中進(jìn)行組織誘導(dǎo)培養(yǎng)叢生芽，培養(yǎng)周期:10~60天，培養(yǎng)溫度:10~35°C，光照培養(yǎng)時(shí)間:0~24小時(shí)/天，光照強(qiáng)度:0~20001ux ;所述的誘導(dǎo)培養(yǎng)基為舊3培養(yǎng)基+蔗糖10~5(^/1+瓊脂6~88/1+活性炭2.0~
3.0g/L+萘乙酸0.1~3.0mg/L+6-芐氨基腺嘌呤0.1~5.0mg/L, PH值為5.0~7.0,該培養(yǎng)基適用于草本植物金線蓮，并且在大規(guī)模使用時(shí)需要額外添加硝酸鈣、香蕉泥等物質(zhì)，并需降低培養(yǎng)環(huán)境的PH，在實(shí)際生產(chǎn)中存在較大的成本及能耗，并且操作繁瑣，需要大量勞動，其是否適用于木本植物尚未可知。
[0008]因此，可以尋求通過植物組織培養(yǎng)的方法對龍爪柳進(jìn)行大量快速的繁殖。然而，目前尚無對龍爪柳進(jìn)行組織培養(yǎng)的相關(guān)報(bào)道。
【發(fā)明內(nèi)容】

[0009]為了解決上述問題，本發(fā)明人經(jīng)銳意研究，結(jié)果發(fā)現(xiàn):龍爪柳未生根組培苗在包括MS、萘乙酸(NAA)、6-芐氨基腺嘌呤出-BA)、蔗糖、瓊脂粉和活性炭的培養(yǎng)基中生根率高，且生根后根生長迅速，成活率高。其中，萘乙酸和6-芐氨基腺嘌呤均為常用的植物生長激素，其不同濃度對植物生根生長所起的作用不同，濃度過高時(shí)會抑制植物生根，當(dāng)濃度過小時(shí)對植物生根又不能起到足夠的促進(jìn)作用。本發(fā)明人經(jīng)不斷探索，確定該兩種激素促進(jìn)龍爪柳生根的最佳濃度，經(jīng)多次試驗(yàn)證明，該兩種激素在此濃度下能夠有效誘導(dǎo)龍爪柳未生根組培苗生根。同時(shí)，本發(fā)明人在培養(yǎng)基中加入一定濃度的活性炭，一是可以吸附植物生長中產(chǎn)生的次生代謝物質(zhì)，促進(jìn)生根；二是其僅對根部提供黑暗環(huán)境，有利于龍爪柳根的生長。 [0010]因此，本發(fā)明以MS、萘乙酸(NAA)、6-芐氨基腺嘌呤(6_BA)、蔗糖、瓊脂粉、活性炭制備培養(yǎng)基，并在此培養(yǎng)基中培養(yǎng)龍爪柳未生根組培苗使其生根，從而完成本發(fā)明。
[0011]本發(fā)明的目的在于提供以下幾方面:
[0012]第一方面，本發(fā)明提供一種龍爪柳未生根組培苗的生根方法，其特征在于，包括以下步驟:
[0013]將龍爪柳未生根組培苗葉片的形態(tài)學(xué)上端剪去，保留0.5~1cm，將剪葉后的龍爪柳未生根組培苗的形態(tài)學(xué)下端插入培養(yǎng)基中，每個(gè)培養(yǎng)基中接種I個(gè)龍爪柳未生根組培苗，置于組織培養(yǎng)室中在以下培養(yǎng)條件下培養(yǎng):
[0014]溫度27°C，光照30001x，10小時(shí)光周期；
[0015]其中，
[0016]所述培養(yǎng)基包括:
[0017]
MS;
萘乙酸(NAA ):0.01-1 mg/L;
6-芐氨基腺嘌呤(6-BA):0.01~lmg/L;
篇糖:3 Og/L;
[0018]
琮脂粉:6.5g/L; 活性炭:0.5~3g/L;
[0019]其中，所述g/L是基于每升培養(yǎng)基所述成分的重量。
[0020]第二方面，本發(fā)明提供上述龍爪柳未生根組培苗的生根方法，其特征在于，所述培養(yǎng)基包括:
[0021]MS;
萘乙酸(NAA ):0.05~0.5mg/L;
6-芐氨基腺嘌呤(6-BA):0.1~I mg/L;
蔗糖:30 g/L;
瓊脂粉:6.5 g/L;
活性炭:0.7-2 g/L;
[0022]其中，所述g/L是基于每升培養(yǎng)基所述成分的重量。
[0023]第三方面，本發(fā)明提供上述龍爪柳未生根組培苗的生根方法，其特征在于，所述培養(yǎng)基包括:
[0024]
MS；
萘乙酸(NAA ):0.1 5-0.3 mg/L;
6-芐氨基腺嘌呤(6-BA)’.0.5~I mg/L;
蔗糖:30 g/L;
瓊脂粉:6.5 g/L;
活性炭:0.8~1.2 g/L;
[0025]其中，所述g/L是基于每升培養(yǎng)基所述成分的重量。
[0026]第四方面，本發(fā)明提供上述龍爪柳未生根組培苗的生根方法，其特征在于，所述培養(yǎng)基由以下步驟制得:
[0027](I)調(diào)節(jié)MS培養(yǎng)基pH至5.8~6.0，加入瓊脂粉，后于121 °C下高溫蒸汽滅菌20~30min，冷卻至50~60°C待用；
[0028](2)萘乙酸和6-芐氨基腺嘌呤滅菌待用；
[0029](3)將活性炭、步驟(2)中滅菌后的萘乙酸和6-芐氨基腺嘌呤加入步驟(1)中制備的瓊脂_MS中,凝固制備完成。
[0030]第五方面，本發(fā)明提供上述龍爪柳未生根組培苗的生根方法，其特征在于，所述滅菌方式為通過濾膜過濾滅菌，其中，濾膜孔徑為0.22 μ m。
[0031]第六方面，本發(fā)明還提供一種用于龍爪柳未生根組培苗生根的培養(yǎng)基，其特征在于，其包括:
[0032]
【權(quán)利要求】
1.一種龍爪柳未生根組培苗的生根方法，其特征在于，包括以下步驟: 將龍爪柳未生根組培苗葉片的形態(tài)學(xué)上端剪去，保留0.5~1cm，將剪葉后的龍爪柳未生根組培苗的形態(tài)學(xué)下端插入培養(yǎng)基中，每個(gè)培養(yǎng)基中接種I個(gè)龍爪柳未生根組培苗，置于組織培養(yǎng)室中在以下培養(yǎng)條件下培養(yǎng): 溫度27°C，光照30001x，10小時(shí)光周期； 其中， 所述培養(yǎng)基包括:
MS；蔡乙酸(NAA ):0.01-1 mg/L;6-芐氨基腺嘌呤(6-BA):0.01-1 mg/L; 蔗糖:30 g/L; 瓊脂粉:6.5 g/L；活性炭:0.5-3 g/L; 其中，所述g/L是基于每升培養(yǎng)基所述成分的重量。
2.根據(jù) 權(quán)利要求1所述的一種龍爪柳未生根組培苗的生根方法，其特征在于，所述培養(yǎng)基包括:
MS;萘乙酸(NAA):0.05~0.5mg/L; 6-芐氨基腺嘌呤(6-BA):0.1~I mg/L; 蔗糖:30 g/L; 瓊脂粉:6.5 g/L; 活性炭:0.7-2 g/L; 其中，所述g/L是基于每升培養(yǎng)基所述成分的重量。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種龍爪柳未生根組培苗的生根方法，其特征在于，所述培養(yǎng)基包括:
MS；萘乙酸(NAA):0.15~0.3mg/L;
6-芐氨基腺嘌呤(6-BA):0.5~I mg/L 蔗糖..30 g/L; 瓊脂粉:6.5 g/L; 活性炭:0,8~1,2 g/L;其中，所述g/L是基于每升培養(yǎng)基所述成分的重量。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種龍爪柳未生根組培苗的生根方法，其特征在于，所述培養(yǎng)基由以下步驟制得: (1)調(diào)節(jié)MS培養(yǎng)基pH至5.8~6.0，加入瓊脂粉和活性炭后于121°C下高溫蒸汽滅菌20~30min，冷卻至50~60°C待用； (2)萘乙酸和6-芐氨基腺嘌呤滅菌待用； (3)將步驟(2)中滅菌后的萘乙酸和6-芐氨基腺嘌呤加入步驟(1)中制備的瓊脂-MS中，凝固制備完成。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種龍爪柳未生根組培苗的生根方法，其特征在于，所述滅菌方式為通過濾膜過濾滅菌，其中，濾膜孔徑為0.22 μ m。
6.一種用于龍爪柳未生根組培苗生根的培養(yǎng)基，其特征在于，其包括:
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的一種用于龍爪柳未生根組培苗生根的培養(yǎng)基,其特征在于，其包括:
8.根據(jù)權(quán)利要求6所述的一種用于龍爪柳未生根組培苗生根的培養(yǎng)基,其特征在于，其包括:MS;萘乙酸(NAA ):0.1 5-0.3 mg/L; 6-芐氨基腺嘌呤(6-BA):0.5-1 mg/L; 蔗糖:30 g/L; 瓊脂粉:6.5 g/L;活性炭:0.8~1.2 g/L; 其中，所述g/L是基于每升培養(yǎng)基所述成分的重量。
9.根據(jù)權(quán)利要求6所述的一種用于龍爪柳未生根組培苗生根的培養(yǎng)基,其特征在于，所述培養(yǎng)基由以下步驟制得: (1)調(diào)節(jié)MS培養(yǎng)基pH至5.8~6.0,加入瓊脂粉，后于1211:下高溫蒸汽滅菌20~30min，冷卻至50~60°C待用； (2)萘乙酸和6-芐氨基腺嘌呤滅菌待用； (3)將活性炭、步驟(2)中滅菌后的萘乙酸和6-芐氨基腺嘌呤加入步驟(1)中制備的瓊脂_MS中，凝固制備完成。
10.根據(jù)權(quán)利要求6所述的一種用于龍爪柳未生根組培苗生根的培養(yǎng)基,其特征在于，所述滅菌方式為通過濾膜過濾滅菌，其中，濾膜孔徑為0.22 μ m。
【文檔編號】A01H4/00GK103535279SQ201310495800
【公開日】2014年1月29日 申請日期:2013年10月21日 優(yōu)先權(quán)日:2013年10月21日
【發(fā)明者】張建國, 饒國棟, 睢金凱 申請人:中國林業(yè)科學(xué)研究院林業(yè)研究所