專利名稱：金銀花快速組培繁殖方法
技術領域：
本發明涉及植物生物技術中植物組織培養方法，特別是金銀花的快速組培繁殖方法。
背景技術：
金銀花屬于忍冬科植物，全草均可入藥，花蕾含有揮發性芳香油、肌醇、皂苷、綠原酸、黃酮類化合物、肉桂酸、橙花醇、茉莉醛等，莖中含有生物堿，葉中含有忍冬甙和木犀素等，是傳統中藥材之一，也是藥食兩用的原料，具有清熱解毒，涼散風熱，保肝利膽的功效，在中醫領域一直用于癰腫疔瘡，喉痹，丹毒，熱毒血痢，風熱感冒，溫熱發病的治療；現在更多的用于保健養生茶飲，金銀花茶香氣宜人，可以制作飲料，對防治盛夏中暑、上呼吸道感染、風熱感冒和腸胃疾病有良好的效果，對清除人體自由基、延緩衰老、提高人體免疫機能等具有良好的作用，因而也是高血壓和心血管系統患者降低膽固醇的保健佳品；金銀花集觀賞藥用于一身，經濟價值高，市場需求量很大，因而需要大量繁殖金銀花。目前，金銀花主要以扦插、播種、嫁接、壓條等傳統方法進行繁殖，不僅受季節限制，而且成活率很低，不能滿足大規模生產的需要；嫁接繁殖雖然植株適應性強，根系發達的優點，但須大量采集野生資源，而且工序繁雜，成活率也很低。發明專利申請號200610050985. 4公開了“灰氈毛忍冬金銀花高效繁殖技術”，采用先進的扦插方法，但其方法繁雜，其成活率也只有70%。已公開的發明專利申請號201110292502. 2是申請人于2011年申請的“金銀花組培繁殖方法”專利，該方法采用金銀花植物組織成功培養出了金銀花植株，但由于該申請沒有詳細注明培養基的單位，以致說明不完整。同時，經過一年的繼續研究實踐，申請人發明了組培繁殖更快速，生根率更高的技術方法。

發明內容
本發明所要解決的技術問題是提供一種方便大面積推廣且不受季節限制，可快速大量繁殖金銀花的組培繁殖方法。為解決上述技術問題，本發明所采用的技術方案是金銀花的快速組培繁殖方法，其步驟如下。⑴制備培養基。①用二水氯化鈣400mg/L、硝酸鉀1900mg/L、硝酸銨250mg/L、磷酸二氫鉀170mg/L、硫酸銨220mg/L、硝酸鎂320mg/L、磷酸二氫鈉40mg/L、七水硫酸亞鐵27. 8mg/L、乙二胺四乙酸二鈉37. 3mg/L、六水氯化鈷O. 025mg/L、五水硫酸銅O. 025mg/L、碘化鉀O. 83mg/L、七水硫酸鋅8. 6mg/L、硼酸6. 2mg/L、四水硫酸錳22. 3mg/L、二水鑰酸鈉O. 25mg/L、肌醇IOOmg/L、鹽酸硫胺素 O. lmg/L、鹽酸批P多辛 O. 5mg/L、甘氨酸 2mg/L、煙酸 O. 5mg/L、IBA0. 0001mg/L、6-BAO. 0004mg/L、白糖30g/L、卡拉膠6g/L制備pH=5. 8的分化和叢生芽培養基，稱為MBl培養基。②用二水氯化1丐200mg/L、硝酸鉀950mg/L、硝酸銨125mg/L、磷酸二氫鉀85mg/L、硫酸銨110mg/L、硝酸鎂160mg/L、磷酸二氫鈉20mg/L、七水硫酸亞鐵27. 8mg/L、乙二胺四乙酸二鈉37. 3mg/L、六水氯化鈷O. 025mg/L、五水硫酸銅O. 025mg/L、碘化鉀O. 83mg/L、七水硫酸鋅8. 6mg/L、硼酸6. 2mg/L、四水硫酸錳22. 3mg/L、二水鑰酸鈉O. 25mg/L、肌醇100mg/L、鹽酸硫胺素O. lmg/L、鹽酸批卩多辛O. 5mg/L、甘氨酸2mg/L、煙酸O. 5mg/L、IBAO. 003mg/L、卡拉膠6g/L、白糖20g/L、活性炭500mg/L制備pH=5. 8的生根培養基，稱為MB2培養基。③將配制好的各培養基裝進滅菌器里滅菌，調節溫度達到121°C時，記時滅菌21分鐘，滅菌完后，把滅菌好的培養基迅速轉移儲存起來后待用。⑵金銀花外植體的采集從室外選取健壯、無病蟲害帶腋芽或頂芽的金銀花嫩莖段,剪去葉，留葉柄基部。⑶金銀花外植體的消毒將采集的金銀花外植體放入1%濃度的洗衣粉水中沖洗3-5分鐘，再放到濃度為O. 1%的升汞液中處理15-17分鐘，同時加入O. 1%的鏈霉素，然后用無菌水清洗4-5次，徹底除去升汞。⑷誘導和分化培養接著取出外植體，接種在分化培養基上，每管接種I芽，培養溫度25-28°C，濕度50%，光照強度1500-3000LX，光照時間為每天10-12小時；材料接種15天后，基部產生少量黃白色的愈傷組織，19-21天逐漸形成叢生芽，24-26天腋芽長出2_3cm0(5)增殖培養待腋芽長出2-3cm時，再進行分段處理，剪切成長度為2. 0-2. 5cm的莖段，將莖段轉接至叢生芽增殖培養基上，每瓶培養4-6芽，培養溫度25-28 °C，濕度50%，光照強度1500-3000LX，光照時間為每天10-12小時，經過24-26天，芽苗長到2. 0-3. 0cm，在叢生芽增殖倍率達3-5倍時，調低培養溫度至21°C，每天增加光照時間至12-14小時，以培養壯苗，為生根打下基礎。(6)生根培養選取生長健壯，高達2. 5cm的無根小苗，切成單株后接種到生根培養基上，在溫度23-25°C、濕度50%，光照強度1500-3000LX，光照時間為每天10-12小時的環境下培養13-15天，小苗將長出白色短根，生根率達50%，20天時，生根率達85%。本發明的有益效果是本方法容易快速成苗，植株一致性強，生長健壯整齊，便于管理，生產成本低，操作簡單，繁殖周期短，僅需70天即可成苗，生根率可達85%，生產量大，移栽成活率在95%以上，可根據市場情況大批量生產優質金銀花苗。
具體實施例方式下面結合實施例對本發明作進一步說明。I.配制培養基為了適用于大量生產，首先要把上述的MBl和MB2培養基成分分別配制成大量元素、微量元素、鐵鹽、有機維生素、細胞分裂素以及植物生長素等母液，詳細如下表。
權利要求
1.金銀花快速組培繁殖方法，其特征在于該方法包括以下步驟 ⑴制備培養基 ①用二水氯化韓400mg/L、硝酸鉀1900mg/L、硝酸銨250mg/L、磷酸二氫鉀170mg/L、硫酸銨220mg/L、硝酸鎂320mg/L、磷酸二氫鈉40mg/L、七水硫酸亞鐵27. 8mg/L、乙二胺四乙酸二鈉37. 3mg/L、六水氯化鈷0. 025mg/L、五水硫酸銅0. 025mg/L、碘化鉀0. 83mg/L、七水硫酸鋅8. 6mg/L、硼酸6. 2mg/L、四水硫酸錳22. 3mg/L、二水鑰酸鈉0. 25mg/L、肌醇100mg/L、鹽酸硫胺素0. lmg/L、鹽酸卩比卩多辛0. 5mg/L、甘氨酸2mg/L、煙酸0. 5mg/L、IBAO. 0001mg/L、6-BAO. 0004mg/L、白糖30g/L、卡拉膠6g/L制備pH=5. 8的分化和叢生芽培養基； ②用二水氯化韓200mg/L、硝酸鉀950mg/L、硝酸銨125mg/L、磷酸二氫鉀85mg/L、硫酸銨110mg/L、硝酸鎂160mg/L、磷酸二氫鈉20mg/L、七水硫酸亞鐵27. 8mg/L、乙二胺四乙酸二鈉37. 3mg/L、六水氯化鈷0. 025mg/L、五水硫酸銅0. 025mg/L、碘化鉀0. 83mg/L、七水硫酸鋅8.6mg/L、硼酸6. 2mg/L、四水硫酸錳22. 3mg/L、二水鑰酸鈉0. 25mg/L、肌醇100mg/L、鹽酸硫胺素0. lmg/L、鹽酸批卩多辛0. 5mg/L、甘氨酸2mg/L、煙酸0. 5mg/L、IBA0. 003mg/L、卡拉膠6g/L、白糖20g/L、活性炭500mg/L制備pH=5. 8的生根培養基； ③將配制好的各培養基裝進滅菌器里滅菌，調節溫度達到121°C時，記時滅菌21分鐘，滅菌完后，把滅菌好的培養基迅速轉移儲存起來后待用； ⑵金銀花外植體的采集從室外選取健壯、無病蟲害帶腋芽或頂芽的金銀花嫩莖段，剪去葉，留葉柄基部； ⑶金銀花外植體的消毒將采集的金銀花外植體放入1%濃度的洗衣粉水中沖洗3-5分鐘，再放到濃度為0. 1%的升汞液中處理15-17分鐘，同時加入0. 1%的鏈霉素，然后用無菌水清洗4-5次，徹底除去升汞； ⑷誘導和分化培養接著取出外植體，接種在分化培養基上，每管接種I芽，培養溫度25-28°C，濕度50%，光照強度1500-3000LX，光照時間為每天10-12小時；材料接種15天后，基部產生少量黃白色的愈傷組織，19-21天逐漸形成叢生芽，24-26天腋芽長出2-3cm ； (5)增殖培養待腋芽長出2-3cm時，再進行分段處理，剪切成長度為2.0-2. 5cm的莖段，將莖段轉接至叢生芽增殖培養基上，每瓶培養4-6芽，培養溫度25-28 °C，濕度50%，光照強度1500-3000LX，光照時間為每天10-12小時，經過24-26天，芽苗長到2. 0-3. 0cm，在叢生芽增殖倍率達3-5倍時，調低培養溫度至21°C，每天增加光照時間至12-14小時； (6)生根培養選取生長健壯，高達2.5cm的無根小苗，切成單株后接種到生根培養基上，在溫度23-25°C、濕度50%，光照強度1500-3000LX，光照時間為每天10-12小時的環境下培養13-15天，小苗將長出白色短根，生根率達50%，20天時，生根率達85%。
全文摘要
金銀花快速組培繁殖方法，包括培養基的制備、金銀花外植體的采集和消毒、組織誘導和分化培養、增殖培養和生根培養，通過組織培養，可以使金銀花快速成苗，植株一致性強，生長健壯整齊，便于管理，生產成本低，操作簡單，繁殖周期短，僅需70天即可成苗，生根率可達85%，生產量大，移栽成活率在95%以上，可根據市場情況大批量生產優質金銀花苗。
文檔編號A01H4/00GK102972294SQ20121050993
公開日2013年3月20日 申請日期2012年12月4日 優先權日2012年12月4日
發明者何全慧, 羅朝遠, 劉湘鳳, 袁自強, 祝利 申請人:重慶市秀山紅星中藥材開發有限公司