專利名稱：金銀花組培繁殖方法
技術領域：
本發明涉及一種植物的繁殖方法，特別是金銀花的組培繁殖方法。
背景技術：
金銀花屬于忍冬科植物，全草均可入藥，花蕾含有揮發性芳香油、肌醇、皂苷、綠原酸、 黃酮類化合物、肉桂酸、橙花醇、茉莉醛等，莖中含有生物堿，葉中含有忍冬甙和木犀素等， 是傳統中藥材之一，也是藥食兩用的原料，具有清熱解毒，涼散風熱，保肝利膽的功效，在中醫領域一直用于癰腫疔瘡，喉痹，丹毒，熱毒血痢，風熱感冒，溫熱發病的治療；現在更多的用于保健養生茶飲，金銀花茶香氣宜人，可以制作飲料，對防治盛夏中暑、上呼吸道感染、風熱感冒和腸胃疾病有良好的效果，對清除人體自由基、延緩衰老、提高人體免疫機能等具有良好的作用，因而也是高血壓和心血管系統患者降低膽固醇的保健佳品；金銀花集觀賞藥用于一身，經濟價值高，市場需求量很大，因而需要大量繁殖金銀花。目前，金銀花主要以扦插、播種、嫁接、壓條等傳統方法進行繁殖，不僅受季節限制，而且成活率很低，不能滿足大規模生產的需要；嫁接繁殖雖然植株適應性強，根系發達的優點，但須大量采集野生資源， 而且工序繁雜，成活率也很低。發明專利申請號200610050985. 4公開了 “灰氈毛忍冬金銀花高效繁殖技術”，采用先進的扦插方法，但其方法繁雜，其成活率也只有70%。

發明內容
本發明所要解決的技術問題是提供一種方便大面積推廣且不受季節限制，可快速大量繁殖的金銀花組培繁殖方法。為解決上述技術問題，本發明所采用的技術方案是以帶腋芽的金銀花枝條為材料，進行金銀花腋條組織培養繁殖，其步驟如下
1.引種和滅菌從室外選取健壯、無病蟲害帶腋芽或頂芽的金銀花嫩莖段，截成 10-13cm的小段，剪去葉，留葉柄基部，用洗衣粉溶解于水清洗3-5分鐘，再放到濃度為0. 1% 的升汞液中處理15-17分鐘，為防止污染，可適當加入少量鏈霉素，然后用無菌水清洗4-5 次，徹底除去升汞。2.誘導和分化培養接著取出外植體，用無菌濾紙吸干多余水分，接種在分化培養基上，培養溫度25-28°C，濕度50%，光照強度1500-3000LX，光照時間為每天10-12小時； 材料接種15天后，基部產生少量黃白色的愈傷組織，20天左右逐漸形成叢生芽，25天左右腋芽長出2-3cm。3.增殖培養待腋芽長出2-3cm時，再進行分段處理，剪切成2. 0-2. 5cm長的莖段，將莖段轉接至叢生芽增殖培養基上，培養溫度2548°C，濕度50%，光照強度 1500-3000Lx,光照時間為每天10-12小時；經過25天左右，芽苗可長到2. 0-3. Ocm高，在叢生芽增殖倍率達6-7倍時，調低培養溫度至21°C，每天增加光照時間至12-14小時，以培養壯苗，為生根打下基礎。4.生根培養選取生長健壯，高達2. 5cm的無根小苗，切成單株后接種到生根培養基上，在溫度23-25°C、濕度50%，光照強度1500-3000LX，光照時間為每天10-12小時的環境下培養2周左右，小苗將長出白色短根，生根率達80%，20天時，生根率達98%。
其中，MB母液的配制成分和重量比為大量元素硝酸鉀1.5g、二水氯化鈣 0. 3g、硝酸鎂0. 22g、磷酸二氫鉀0. 17g、硝酸銨0. 15g、硫酸銨0. 2g、磷酸二氫鈉0. 04g ；鐵鹽=EDTAO. 0373g、硫酸亞鐵0. 0278g ；微量元素碘化鉀0. 00083g、七水硫酸鋅0. 0086g/ L、硼酸0. 0062g、一水硫酸猛0. 0223g、二水鉬酸鈉0. 00025g、無水硫酸銅0. 00002 、氯化鈷0. 000025g ；有機物甘氨酸0. 002g、煙酸0. 0005g、鹽酸吡哆辛0. 0005g、鹽酸硫胺 0. 0004g、肌醇 0. 05g ；激素(單獨配制):6-BAlg/L、IBAlg/L、NAAlg/L。分化培養基為MB+BA1.0-2. 0mg/L+NAA0. 3-0. 5mg/L+30g/L 蔗糖+6g/L 瓊脂，pH 值為 5. 8。叢生芽增殖培養基為MB50ml+微量元素3. 3ml+鐵鹽5ml+有機物 5ml+6-BA0. 4ml+IBA0. Iml+ 白糖 30g+ 卡拉膠 6g, pH 值為 5. 8。生根培養基為MB25ml+有機物、鐵鹽、微量元素各5ml+IBA;3ml+糖20g+卡拉膠 6g+AC0. 5g，pH 值為 5.8。各培養基需滅菌，將配制好的培養基裝進滅菌器里，調節溫度達到121°C時，記時滅菌21分鐘，滅菌完后，把滅菌好的培養基迅速轉移到無菌室儲存起來。步驟2中，分化培養時每管接種1芽，以免交叉感染；增殖培養可用繁殖瓶，每瓶可接種多一些，以5芽為宜。步驟2中，分化培養時每管接種1芽，以免交叉感染；增殖培養可用繁殖瓶，每瓶可接種多一些，以5芽為宜。本發明的有益效果是本方法生產成本低，操作簡單，繁殖周期短，成活率高，生產量大，可根據市場情況大批量生產優質金銀花苗。
具體實施例方式
下面結合實施例對本發明作進一步說明。1.配制培養基。MB母液培養基由大量元素、鐵鹽、微量元素、有機物和激素組成，其具體配制成分和重量比為
-大量元素硝酸鉀1. 5g、二水氯化鈣0. 3g、硝酸鎂0. 22g、磷酸二氫鉀0. 17g、硝酸銨 0. 15g、硫酸銨0. 2g、磷酸二氫鈉0. 04g ；
⑵鐵鹽EDTA0. 0373g、硫酸亞鐵0. 0278g ；
⑶微量元素碘化鉀0. 00083g、七水硫酸鋅0. 0086g/L、硼酸0. 0062g、一水硫酸錳 0. 0223g、二水鉬酸鈉 0. 00025g、無水硫酸銅 0. 000025g、氯化鈷 0. 000025g ；
⑷有機物甘氨酸0. 002g、煙酸0. 0005g、鹽酸吡哆辛0. 0005g、鹽酸硫胺0. 0004g、肌醇 0. 05g ；
？激素(單獨配制):6-BAlg/L、IBAlg/L、NAAlg/L。分化培養基為MB+BA1.0-2. 0mg/L+NAA0. 3-0. 5mg/L+30g/L 蔗糖+6g/L 瓊脂，pH 值為 5. 8。叢生芽增殖培養基為MB50ml+微量元素3. 3ml+鐵鹽5ml+有機物 5ml+6-BA0. 4ml+IBA0. Iml+ 白糖 30g+ 卡拉膠 6g, pH 值為 5. 8。生根培養基為MB25ml+有機物、鐵鹽、微量元素各5ml+IBA;3ml+糖20g+卡拉膠 6g+AC0. 5g，pH 值為 5.8。
然后將各培養基滅菌，將配制好的培養基裝進滅菌器里，調節溫度達到121°C，記時滅菌21分鐘，滅菌完后，把滅菌好的培養基迅速轉移到無菌室儲存起來。2.取材從室外選取健壯、無病蟲害帶腋芽或頂芽的金銀花嫩莖段，截成10-13cm 的小段100段，剪去葉，留葉柄基部。3.用洗衣粉溶解于水清洗5分鐘，再放到濃度為0. 1%的升汞液中處理16分鐘，然后用無菌水清洗5次；接著取出外植體，用無菌濾紙吸干多余水分。4.誘導和分化培養每管接種1芽，接種在分化培養基上，調節培養溫度25_28°C， 濕度50%，光照強度1500-3000LX，光照時間為每天10-12小時；材料接種15天后，基部產生少量黃白色的愈傷組織，20天后逐漸形成叢生芽，25天后腋芽長出2-3cm。5.增殖培養待腋芽長出2-3cm時，進行分段處理，剪切成2. 0-2. 5cm長的莖段，將莖段轉接至叢生芽增殖培養基上，調節培養溫度25-28°C，濕度50%，光照強度 1500-3000LX，光照時間為每天10-12小時；25天后，芽苗平均長到2. 5cm高，在叢生芽增殖倍率達6-7倍時，調低培養溫度至21°C，每天增加光照時間至12-14小時。6.生根培養將2. 5cm的無根小苗，切成單株后接種到生根培養基上，每瓶5芽， 在溫度23-25°C，濕度50%，光照強度1500-3000LX，光照時間為每天10-12小時的環境下培養15天后，小苗將長出白色短根，生根率達80%，20天時，生根率達98%，每株生根數2-3條。經過70天的組織培養，獲得了生長健康的金銀花小苗。
權利要求
1.金銀花組培繁殖方法，其特征在于以帶腋芽的金銀花枝條為材料，進行金銀花腋條組織培養繁殖，其步驟如下引種和誘導從室外選取健壯、無病蟲害帶腋芽或頂芽的金銀花嫩莖段，截成 10-13cm的小段，剪去葉，留葉柄基部，用洗衣粉溶解于水清洗3-5分鐘，再放到濃度為0. 1% 的升汞液中處理15-17分鐘，然后用無菌水清洗4-5次，徹底除去升汞；接著取出外植體，用無菌濾紙吸干多余水分；⑵分化培養接種在分化培養基上，培養溫度25- °C，濕度50%，光照強度 1500-3000Lx，光照時間為每天10-12小時；⑶增殖培養腋芽長出2-3cm時，進行分段處理，剪切成2. 0-2. 5cm長的莖段，將莖段轉接至叢生芽增殖培養基上，培養溫度25-28°C，濕度50%，光照強度1500-3000LX，光照時間為每天10-12小時；⑷生根培養選取生長健壯高達2. 5cm的無根小苗，切成單株后接種到生根培養基上， 在溫度23-25°C、濕度50%，光照強度1500-3000LX，光照時間為每天10-12小時的環境下培養20天。
2.根據權利要求1所述的金銀花組培繁殖方法，其特征在于分化培養基為MB +BAl. 0-2. 0mg/L+NAA0. 3-0. 5mg/L+30g/L 蔗糖 +6g/L 瓊脂，pH 值為 5. 8。
3.根據權利要求1所述的金銀花組培繁殖方法，其特征在于叢生芽增殖培養基為 MB50ml+ 微量元素 3. 3ml+ 鐵鹽 5ml+ 有機物 5ml+6_BA0. 4ml+IBA0. Iml+ 白糖 30g+ 卡拉膠 6g，pH 值為 5.8。
4.根據權利要求1所述的金銀花組培繁殖方法，其特征在于生根培養基為MB25ml+有機物、鐵鹽、微量元素各5ml+IBA;3ml+糖20g+卡拉膠6g+AC0. 5g，pH值為5. 8。
5.根據權利要求2-4所述的金銀花組培繁殖方法，其特征在于MB母液培養基由大量元素、鐵鹽、微量元素、有機物和激素組成，其具體配制成分和重量比為大量元素硝酸鉀1. 5g、二水氯化鈣0. 3g、硝酸鎂0. 22g、磷酸二氫鉀0. 17g、硝酸銨 0. 15g、硫酸銨0. 2g、磷酸二氫鈉0. 04g ；⑵鐵鹽EDTA0. 0373g、硫酸亞鐵0. 0278g ；⑶微量元素碘化鉀0. 00083g、七水硫酸鋅0. 0086g/L、硼酸0. 0062g、一水硫酸錳 0. 0223g、二水鉬酸鈉 0. 00025g、無水硫酸銅 0. 000025g、氯化鈷 0. 000025g ；⑷有機物甘氨酸0. 002g、煙酸0. 0005g、鹽酸吡哆辛0. 0005g、鹽酸硫胺0. 0004g、肌醇 0. 05g ；^ 激素(單獨配制)6-BAlg/L、IBAlg/L、NAAlg/L。
6.根據權利要求2-5所述的金銀花組培繁殖方法，其特征在于各培養基需要滅菌，將配制好的培養基裝進滅菌器里，調節溫度達到121°C時，記時滅菌21分鐘，滅菌完后，迅速儲存到無菌室。
7.根據權利要求1所述的金銀花組培繁殖方法，其特征在于步驟2中，分化培養時每管接種1芽。
8.根據權利要求1所述的金銀花組培繁殖方法，其特征在于步驟3中，增殖培養時每瓶接種3-5芽。
全文摘要
金銀花組培繁殖方法，以帶腋芽的金銀花枝條為材料，進行金銀花腋條組織培養繁殖，通過引種和滅菌、誘導和分化培養、增殖培養、生根培養可得到大量優質金銀花苗；其有益效果是生產成本低，操作簡單，繁殖周期短，成活率高，生產量大，可根據市場情況大批量生產優質金銀花苗。
文檔編號A01H4/00GK102405839SQ20111029250
公開日2012年4月11日 申請日期2011年10月4日 優先權日2011年10月4日
發明者何全慧, 李大根, 楊再江, 祝利, 趙勇彪 申請人:重慶市秀山紅星中藥材開發有限公司