專利名稱：黃瓜枯萎病的膏狀生防制劑、制備方法、應(yīng)用及其專用菌株的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及微生物領(lǐng)域，具體而言，涉及一種黃瓜枯萎病的膏狀生防制劑、
制備方法、應(yīng)用及其專用菌株。
背景技術(shù)：
黃瓜是一種全球性的重要蔬菜作物。近年來，由于黃瓜栽培面積逐年擴大，加之大規(guī)模的南菜北運，使黃瓜成了可以周年供應(yīng)的重要蔬菜，在“菜籃子工程”中占重要地位。但是，隨著黃瓜生產(chǎn)的規(guī)模化、基地化、專業(yè)化，以及相關(guān)的生態(tài)環(huán)境變化，黃瓜生產(chǎn)上的病害問題顯得十分突出，發(fā)生程度日趨嚴重，尤其是黃瓜枯萎病等土傳病害危害更大，嚴重影響 了瓜類蔬菜作物的產(chǎn)量和品質(zhì)。黃瓜枯萎病又稱蔓割病、萎蔫病，是由尖孢鐮刀菌(.Fusarium axysporum f. sp. Ci/c臟 引起典型的土傳病害。在長年栽培黃瓜品種的地區(qū)，黃瓜枯萎病發(fā)病率為10°/Γ20%左右，嚴重的能達50%以上。據(jù)有經(jīng)驗的菜農(nóng)估計，一般在采收前期發(fā)病的減產(chǎn)率為發(fā)病率的709Γ100%，中期為30°/Γ50%，生長末期的減產(chǎn)率則較小，嚴重時還可能造成絕收。因此，黃瓜枯萎病已成為嚴重阻礙黃瓜種植業(yè)的發(fā)展和農(nóng)民的增收的重要病害。生產(chǎn)上一般采用選育抗病品種、嫁接育苗、藥劑防治等方法減少枯萎病對生產(chǎn)造成的損失?，F(xiàn)有的黃瓜品種，即使少數(shù)品種具有一定的抗、耐病能力(如中農(nóng)5號、津春5號等)，不能從根本上解決病害的發(fā)生；嫁接技術(shù)難度較大，很難大面積推廣；藥劑防治作為簡單、快速、有效的防治途徑，得到人們的青睞，但尚無有效的農(nóng)藥可以防治這類病害，且長期使用現(xiàn)有的化學藥物容易產(chǎn)生抗藥性，而且會容易對環(huán)境造成嚴重污染。因此，通過尋求新型的防病、治病手段，達到有效地控制黃瓜枯萎病的危害，已成為生產(chǎn)實踐中迫切需要解決的課題。微生物農(nóng)藥源于自然，具有環(huán)境兼容性好、持效期長、低毒安全等特點，成為各種果樹病害防治的重要綠色環(huán)保途徑之一。然而迄今為止，利用真菌及其膏狀生防制劑高效防治黃瓜枯萎病的基因工程菌菌株則鮮有報道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于解決上述現(xiàn)有技術(shù)中存在的不足和問題，提供一種用于防治高效防治黃瓜枯萎病的基因工程菌菌株、含該菌株的膏狀生防制劑及其制備方法和應(yīng)用。為了實現(xiàn)本發(fā)明的目的，本發(fā)明提供了一株基因工程菌菌株，其分類命名為棘孢木霉(Jrichoderma asperellum) GY20,其保藏編號為CGMCC NO :4899。本發(fā)明還提供了一種黃瓜枯萎病的膏狀生防制劑，其中，所述制劑的活性成分為上述提及的所述棘孢木霉(Trichoderma asperellum ) GY20的菌絲與厚垣孢子。進一步地，所述菌絲與厚垣孢子的比例，由以下培養(yǎng)方法決定
將在馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基上長好的棘孢木霉(斤icAoofe/ma asperellum) GY20孢子用無菌水洗下，調(diào)節(jié)成孢子含量為IO5孢子/mL的接種液，按5% (V/V)接種量接種于馬鈴薯葡萄糖液體培養(yǎng)基中，振蕩培養(yǎng)48小時；將上步所得培養(yǎng)液以10% (V/V)的接種量再次接種于馬鈴薯葡萄液體培養(yǎng)基中振蕩培養(yǎng)48小時進一步擴增后，再將所得培養(yǎng)液以10%(V/V)的接種量再次接種于含20L發(fā)酵培養(yǎng)液的發(fā)酵罐中進行發(fā)酵培養(yǎng)后離心得到。優(yōu)選地，所述發(fā)酵罐中的發(fā)酵培養(yǎng)液各組分的重量份含量為甜菜液380-420、七水硫酸鎂3-5、磷酸二氫鉀38-42 ;所述發(fā)酵的條件為溶氧100%，攪拌速度為300-400轉(zhuǎn)/分，發(fā)酵溫度25-27攝氏度，發(fā)酵時間48小時，pH 7. 0-7. 2 ;所述振蕩培養(yǎng)的條件均為140-160轉(zhuǎn)/分、25-27攝氏度；所述發(fā)酵培養(yǎng)后離心的條件為7500-8500轉(zhuǎn)/分，離心10分鐘。最佳條件為所述發(fā)酵罐中的發(fā)酵培養(yǎng)液含量為甜菜液400. 0g、七水硫酸鎂4. 0g、磷酸二氫鉀40. Og ;所述發(fā)酵的條 件為溶氧100%，攪拌速度為350轉(zhuǎn)/分，發(fā)酵溫度26攝氏度，發(fā)酵時間48小時，pH 7.0-7. 2。所述發(fā)酵罐中的發(fā)酵培養(yǎng)液含量為甜菜液400. 0g、七水硫酸鎂4. 0g、磷酸二氫鉀40. Og ;所述發(fā)酵的條件為溶氧100%，攪拌速度為350轉(zhuǎn)/分，發(fā)酵溫度26攝氏度，發(fā)酵時間48小時，pH 7. 0-7. 2。優(yōu)選地，所述振蕩培養(yǎng)的條件均為150轉(zhuǎn)/分、26攝氏度；所述發(fā)酵培養(yǎng)后離心的條件為8000轉(zhuǎn)/分離心10分鐘。優(yōu)選地，所述膏狀生防制劑還包括O. 00Γ0. 05%的銅離子抑制劑。優(yōu)選地，所述膏狀生防制劑還包括5 10%的可溶性淀粉。優(yōu)選地，所述可溶性淀粉為土豆淀粉。本發(fā)明還提供了一種制備上述黃瓜枯萎病的膏狀生防制劑的方法，其中，所述方法包括
I)將在馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基上長好的棘孢木霉(Trichoderma asperellum) GY20孢子用無菌水洗下，調(diào)節(jié)成孢子含量為IO5孢子/mL的接種液，按5% (V/V)接種量接種于馬鈴薯葡萄糖液體培養(yǎng)基中，振蕩培養(yǎng)48小時；將上步所得培養(yǎng)液以10% (V/V)的接種量再次接種于馬鈴薯葡萄液體培養(yǎng)基中振蕩培養(yǎng)48小時進一步擴增后，再將所得培養(yǎng)液以10%(V/V)的接種量再次接種于含20L發(fā)酵培養(yǎng)液的發(fā)酵罐中進行發(fā)酵培養(yǎng)后離心得到。2)調(diào)節(jié)pH值將上述菌絲與厚垣孢子混合體的pH值調(diào)節(jié)為3. (Γ4. O ；
3)制得膏狀生防制劑向所述步驟2)得到的混合體中加入0. 00Γ0. 05%的銅離子抑制劑，最后加入5 10%的可溶性淀粉，攪拌均勻即可。優(yōu)選地，所述發(fā)酵罐中的發(fā)酵培養(yǎng)液各組分的重量份含量為甜菜液380-420、七水硫酸鎂3-5、磷酸二氫鉀38-42 ;所述發(fā)酵的條件為溶氧100%，攪拌速度為300-400轉(zhuǎn)/分，發(fā)酵溫度25-27攝氏度，發(fā)酵時間48小時，pH 7. 0-7. 2 ;所述振蕩培養(yǎng)的條件均為140-160轉(zhuǎn)/分、25-27攝氏度；所述發(fā)酵培養(yǎng)后離心的條件為7500-8500轉(zhuǎn)/分，離心10分鐘。最佳條件為所述振蕩培養(yǎng)的條件均為150轉(zhuǎn)/分、26攝氏度；所述發(fā)酵罐中的發(fā)酵培養(yǎng)液含量為甜菜液400. 0g、七水硫酸鎂4. 0g、磷酸二氫鉀40. Og ;所述發(fā)酵的條件為溶氧100%，攪拌速度為350轉(zhuǎn)/分，發(fā)酵溫度26攝氏度，發(fā)酵時間48小時，pH 7. 0-7. 2 ；所述發(fā)酵培養(yǎng)后離心的條件為8000轉(zhuǎn)/分離心10分鐘；所述可溶性淀粉為土豆淀粉。
再者，本發(fā)明還提供了所述的基因工程菌菌株棘孢木mTrichodenmasperellum) GY20及所制得的膏狀生防制劑在防治黃瓜枯萎病中的應(yīng)用。本發(fā)明用于防治黃瓜枯萎病的含基因工程菌菌株棘孢木霉(Trichodermaasperellum^ GY20的膏狀生防制劑與現(xiàn)有的“綠色木霉”膏狀生防制劑相比，具有以下優(yōu)
占-
^ \\\ ·
1、本發(fā)明膏狀生防制劑由活性組分與輔料組成，活性組分為棘孢木霉(Trich ο dermaasperellum)GY20菌絲與厚垣孢子,其厚垣孢子分散在木霉菌絲中,其制備成的膏狀生防制劑產(chǎn)品質(zhì)量穩(wěn)定，可室溫保存18個月，冷藏條件下保存3年；
2、本發(fā)明膏狀生防制劑對黃瓜枯萎病有良好防效溫室試驗結(jié)果表明，GY20對黃瓜枯 萎病的防治效果均可達90%以上，顯著高于“綠色木霉”綠色木霉”膏狀生防制劑對黃瓜枯萎病的防治效果58. 40% ；
3、無公害本發(fā)明棘孢木霉(TricAoofezmaGY20可安全釋放的真菌,故不會因農(nóng)藥的使用帶來的一系列環(huán)境負效應(yīng)，同時含該木霉的膏狀生防制劑的使用極大的減少了黃瓜生產(chǎn)中化學農(nóng)藥的施用量，不會產(chǎn)生任何廢水廢氣廢渣，為黃瓜無公害生物防治提供可靠保證，造福于現(xiàn)代高效農(nóng)業(yè)；
4、成本較低本發(fā)明棘孢木霉(TricAoofezmaGY20及其膏狀生防制劑生產(chǎn)成本很低，企業(yè)獲取的利潤空間極大。。
具體實施例方式本發(fā)明的生物材料棘孢木霉(Trichoderma asperellum ) GY20的保藏日期為2011年5月25日，保藏單位全稱為中國微生物生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，簡稱CGMCC，地址為北京.中國科學院微生物研究所，其保藏編號為CGMCC NO :4899。所述棘孢木霉GY20具有如下特征25°C黑暗條件下培養(yǎng)4d，菌落直徑53-55mm，菌絲體白色，絮狀，茂盛；分生孢子結(jié)構(gòu)大量產(chǎn)生，產(chǎn)孢區(qū)均勻分布，灰綠色；瓶梗式產(chǎn)孢，分生孢子橢圓形、近球形，表面有細刺。木霉菌對多種重要植物病原真菌有作用，如腐霉菌、輪枝菌、鐮刀菌、長孺孢菌、交鏈孢菌、絲核菌、葡萄孢菌等。一種黃瓜枯萎病的膏狀生防制劑，其中，所述制劑的活性成分為權(quán)利要求1所述棘抱木霉(Trichoderma asperellum ) GY20的菌絲與厚垣抱子。其中，所述菌絲與厚垣孢子的比例，由以下培養(yǎng)方法決定
將在馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基上長好的棘孢木霉(斤icAoofe/ma asperellum) GY20孢子用無菌水洗下，調(diào)節(jié)成孢子含量為IO5孢子/mL的接種液，按5% (V/V)接種量接種于馬鈴薯葡萄糖液體培養(yǎng)基中，振蕩培養(yǎng)48小時；將上步所得培養(yǎng)液以10% (V/V)的接種量再次接種于馬鈴薯葡萄液體培養(yǎng)基中振蕩培養(yǎng)48小時進一步擴增后，再將所得培養(yǎng)液以10%(V/V)的接種量再次接種于含20L發(fā)酵培養(yǎng)液的發(fā)酵罐中進行發(fā)酵培養(yǎng)后離心得到。其中，所述發(fā)酵罐中的發(fā)酵培養(yǎng)液含量為甜菜液400.(^、七水硫酸鎂4.(^、磷酸二氫鉀40. Og ;所述發(fā)酵的條件為溶氧100%，攪拌速度為350轉(zhuǎn)/分，發(fā)酵溫度26攝氏度，發(fā)酵時間48小時，pH 7. 0-7. 2 ;所述振蕩培養(yǎng)的條件均為150轉(zhuǎn)/分、26攝氏度；所述發(fā)酵培養(yǎng)后離心的條件為8000轉(zhuǎn)/分離心10分鐘。進一步地，所述膏狀生防制劑的PH值為3. (Γ4. 0，優(yōu)選PH值為3. 5。
進一步地，所述膏狀生防制劑還包括O. 00Γ0. 05%的銅離子抑制劑，優(yōu)選所述膏狀生防制劑包括O. ΟΟΓΟ. 05%的銅離子抑制劑，優(yōu)選O. 01%的MDA-5。進一步地，所述膏狀生防制劑還包括5 10%的可溶性淀粉。優(yōu)選地，所述膏狀生防制劑還包括5 10%的可溶性淀粉。優(yōu)選地，所述可溶性淀粉為8%的土豆淀粉。另一方面，本發(fā)明保護一種制備上述所述的黃瓜枯萎病的膏狀生防制劑的方法，其中，所述方法包括
I)將在馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基上長好的棘孢木霉(Trichoderma asperellum) GY20孢子用無菌水洗下，調(diào)節(jié)成孢子含量為IO5孢子/mL的接種液，按5% (V/V)接種量接種于馬鈴薯葡萄糖液體培養(yǎng)基中，振蕩培養(yǎng)48小時；將上步所得培養(yǎng)液以10% (V/V)的接種量再次接種于馬鈴薯葡萄液體培養(yǎng)基中振蕩培養(yǎng)48小 時進一步擴增后，再將所得培養(yǎng)液以10%(V/V)的接種量再次接種于含20L發(fā)酵培養(yǎng)液的發(fā)酵罐中進行發(fā)酵培養(yǎng)后離心得到。2)調(diào)節(jié)pH值將上述菌絲與厚垣孢子混合體的pH值調(diào)節(jié)為3. (Γ4. O ；
3)制得膏狀生防制劑向所述步驟2)得到的混合體中加入0. 00Γ0. 05%的銅離子抑制劑，最后加入5 10%的可溶性淀粉，攪拌均勻即可。其中，所述振蕩培養(yǎng)的條件均為150轉(zhuǎn)/分、26攝氏度；所述發(fā)酵罐中的發(fā)酵培養(yǎng)液含量為甜菜液400. 0g、七水硫酸鎂4. 0g、磷酸二氫鉀40. Og ;所述發(fā)酵的條件為溶氧100%，攪拌速度為350轉(zhuǎn)/分，發(fā)酵溫度26攝氏度，發(fā)酵時間48小時，pH 7. 0-7. 2 ;所述發(fā)酵培養(yǎng)后離心的條件為8000轉(zhuǎn)/分離心10分鐘；所述可溶性淀粉為土豆淀粉。具體地，本發(fā)明的防治黃瓜枯萎病菌株GY20制備的膏狀生防制劑，其制備方法包括以下步驟
(A)菌液的獲得
用無菌接種刀挑取事先在馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基(PDA)上培養(yǎng)好的GY20孢子，用無菌水洗下調(diào)節(jié)成孢子含量為IO5孢子/mL的接種液，按5% (V/V)接種量接種于裝有200mL馬鈴薯葡萄液體培養(yǎng)基(PD)的容積為750 mL的三角瓶中，于26 °C >150 rpm/min條件下振蕩培養(yǎng)48 h，將上步所得培養(yǎng)液200 mL等份接種于4個裝有500mL H)培養(yǎng)液的容積為2000 mL的三角瓶中，150 rpm、26°C條件下振蕩培養(yǎng)48 h ;把所得的2000mL培養(yǎng)液接種于裝有20L培養(yǎng)液的容積為30L的發(fā)酵罐(鎮(zhèn)江東方GUS-30)，20L發(fā)酵培養(yǎng)液含量為甜菜液400. 0g、七水硫酸鎂4. 0g、磷酸二氫鉀40. 0g，設(shè)置發(fā)酵條件為溶氧100%，攪拌速度為350rpm，發(fā)酵溫度26 °C，發(fā)酵時間48 h，pH 7· 0_7· 2。(B)膏狀生防制劑加工工藝
將發(fā)酵好的發(fā)酵液按如下方法加工成膏狀生防制劑先將發(fā)酵液在8000rpm/min條件下離心lOmin，得菌絲及厚垣孢子混合體，用鹽酸調(diào)節(jié)pH至3. 0^4. O,并加入0. 00Γ0. 05%的銅離子抑制劑，最后加入5 10%的可溶性淀粉，攪拌均勻即制成了膏狀生防制劑。優(yōu)選地，上述步驟(B)中用鹽酸調(diào)節(jié)菌絲及厚垣孢子混合體pH至3. (Γ4. O后，力口入0. 001%的銅離子抑制劑，最后加入8%的可溶性淀粉。再一方面，本發(fā)明保護的是所述的基因工程菌菌株棘孢木霉(Trichooferfflaasperellum) GY20及上述任一所述的膏狀生防制劑在防治黃瓜枯萎病中的應(yīng)用。根據(jù)以下實施例，可以更好的理解本發(fā)明。實施案例中所描述的具體的物料配比，工藝條件及其結(jié)果僅用于說明本發(fā)明，而不應(yīng)當也不會限制權(quán)利要求書中所詳細描述的本發(fā)明。實施例1膏狀生防制劑及其制備方法 膏狀生防制劑的組分為
活性組分棘孢木霉(Trichoderma asperellum ) GY20菌絲及厚垣孢子混合體94. 999%
銅離子抑制劑MDA-5 O. 001%
土豆淀粉5%
PH值3
上述所述百分比為重量百分比。上述膏狀生防制劑的制備方法包括以下步驟
(A)菌液的獲得
用無菌接種刀挑取事先在馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基(PDA)上培養(yǎng)好的GY20孢子，用無菌水洗下調(diào)節(jié)成孢子含量為IO5孢子/mL的接種液，按5% (V/V)接種量接種于裝有200mL馬鈴薯葡萄液體培養(yǎng)基(PD)的容積為750 mL的三角瓶中，于26 °C >150 rpm/min條件下振蕩培養(yǎng)48 h，將上步所得培養(yǎng)液200 mL等份接種于4個裝有500mL PD培養(yǎng)液的容積為2000 mL的三角瓶中，150 rpm、26°C條件下振蕩培養(yǎng)48 h ;把所得的2000mL培養(yǎng)液接種于裝有20L培養(yǎng)液的容積為30L的發(fā)酵罐(鎮(zhèn)江東方GUS-30)，20L發(fā)酵培養(yǎng)液含量為甜菜液400. 0g、七水硫酸鎂4. 0g、磷酸二氫鉀40. 0g，設(shè)置發(fā)酵條件為溶氧100%，攪拌速度為350rpm，發(fā)酵溫度26 °C，發(fā)酵時間48 h，pH 7· 0_7· 2。(B)膏狀生防制劑加工工藝
將發(fā)酵好的發(fā)酵液按如下方法加工成膏狀生防制劑先將發(fā)酵液在8000rpm/min條件下離心lOmin，得菌絲及厚垣孢子混合體，用鹽酸調(diào)節(jié)pH至3. O,并加入O. 001%的銅離子抑制劑，最后加入5%的可溶性淀粉，攪拌均勻即制成了膏狀生防制劑。實施例2-3
按照實施例1的方法制備實施例2-3，不同之處如表I所示
表I實施例2-3制備方法
權(quán)利要求
1.一株基因工程菌菌株，其分類命名為棘孢木霉(TricAoiferffl3 asperellum) GY20, 其保藏編號為CGMCC NO :4899。
2.—種黃瓜枯萎病的膏狀生防制劑，其特征在于，所述制劑的活性成分為權(quán)利要求1 所述棘抱木霉(asperellum) GY20的菌絲與厚垣抱子。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的膏狀生防制劑，其特征在于，所述菌絲與厚垣孢子的比例， 由以下培養(yǎng)方法決定將在馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基上長好的棘孢木霉(Trichoderma asperellum) GY20孢子用無菌水洗下，調(diào)節(jié)成孢子含量為IO5孢子/mL的接種液，按V/V 5%接種量接種于馬鈴薯葡萄糖液體培養(yǎng)基中，振蕩培養(yǎng)48小時；將上步所得培養(yǎng)液以V/V 10%的接種量再次接種于馬鈴薯葡萄液體培養(yǎng)基中振蕩培養(yǎng)48小時進一步擴增后，再將所得培養(yǎng)液以V/V 10% 的接種量再次接種于含20L發(fā)酵培養(yǎng)液的發(fā)酵罐中進行發(fā)酵培養(yǎng)后離心得到。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的膏狀生防制劑，其特征在于，所述發(fā)酵罐中的發(fā)酵培養(yǎng)液各組分的重量份含量為甜菜液380-420、七水硫酸鎂3-5、磷酸二氫鉀38-42 ;所述發(fā)酵的條件為溶氧100%，攪拌速度為300-400轉(zhuǎn)/分，發(fā)酵溫度25-27攝氏度，發(fā)酵時間48小時， pH 7. 0-7. 2 ;所述振蕩培養(yǎng)的條件均為140-160轉(zhuǎn)/分、25-27攝氏度；所述發(fā)酵培養(yǎng)后離心的條件為7500-8500轉(zhuǎn)/分，離心10分鐘。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的膏狀生防制劑，其特征在于，所述發(fā)酵罐中的發(fā)酵培養(yǎng)液含量為甜菜液400. 0g、七水硫酸鎂4. 0g、磷酸二氫鉀40. Og ;所述發(fā)酵的條件為溶氧100%， 攪拌速度為350轉(zhuǎn)/分，發(fā)酵溫度26攝氏度，發(fā)酵時間48小時，pH 7. 0-7. 2 ;所述振蕩培養(yǎng)的條件均為150轉(zhuǎn)/分、26攝氏度；所述發(fā)酵培養(yǎng)后離心的條件為8000轉(zhuǎn)/分離心10分鐘；所述膏狀生防制劑還包括重量百分比O. OOfO. 05%的銅離子抑制劑。
6.根據(jù)權(quán)利要求2或5所述的膏狀生防制劑，其特征在于，所述膏狀生防制劑還包括重量百分比5 10%的可溶性淀粉；所述的銅離子抑制劑為MDA-5。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的膏狀生防制劑，其特征在于，所述可溶性淀粉為土豆淀粉。
8.一種制備權(quán)利要求2 7所述的黃瓜枯萎病的膏狀生防制劑的方法，其特征在于，所述方法包括1)將在馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基上長好的棘孢木霉(Trichodermaasperellum) GY20 孢子用無菌水洗下，調(diào)節(jié)成孢子含量為IO5孢子/mL的接種液，按5% (V/V)接種量接種于馬鈴薯葡萄糖液體培養(yǎng)基中，振蕩培養(yǎng)48小時；將上步所得培養(yǎng)液以10% (V/V)的接種量再次接種于馬鈴薯葡萄液體培養(yǎng)基中振蕩培養(yǎng)48小時進一步擴增后，再將所得培養(yǎng)液以10% (V/V)的接種量再次接種于含20L發(fā)酵培養(yǎng)液的發(fā)酵罐中進行發(fā)酵培養(yǎng)后離心得到；2)調(diào)節(jié)pH值將上述菌絲與厚垣孢子混合體的pH值調(diào)節(jié)為3.(Γ4. O ；3)制得膏狀生防制劑向所述步驟2)得到的混合體中加入O.00Γ0. 05%的銅離子抑制劑，最后加入5 10%的可溶性淀粉，攪拌均勻即可。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的膏狀生防制劑，其特征在于，所述振蕩培養(yǎng)的條件均為150 轉(zhuǎn)/分、26攝氏度；所述發(fā)酵罐中的發(fā)酵培養(yǎng)液含量為甜菜液400. 0g、七水硫酸鎂4. 0g、 磷酸二氫鉀40. Og;所述發(fā)酵的條件為溶氧100%，攪拌速度為350轉(zhuǎn)/分，發(fā)酵溫度26攝氏度，發(fā)酵時間48小時，pH 7. 0-7. 2 ;所述發(fā)酵培養(yǎng)后離心的條件為8000轉(zhuǎn)/分離心10 分鐘；所述可溶性淀粉為土豆淀粉。
10.權(quán)利要求1所述的基因工程菌菌株及權(quán)利要求2 7任一所述的膏狀生防制劑在防治黃瓜枯萎病中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種黃瓜枯萎病的膏狀生防制劑、制備方法、應(yīng)用及其專用菌株。所述專用菌株分類命名為棘孢木霉(Trichodermaasperellum)GY20,其保藏編號為CGMCCNO4899。本發(fā)明膏狀生防制劑的所述制劑的活性成分為上述所述棘孢木霉(Trichodermaasperellum)GY20的菌絲與厚垣孢子。本發(fā)明的膏狀生防制劑最大的優(yōu)點是產(chǎn)品質(zhì)量穩(wěn)定，可室溫保存18個月，冷藏條件下保存3年，且對黃瓜枯萎病有良好防效，不產(chǎn)生任何廢水廢氣廢渣，利于環(huán)境保護。
文檔編號A01N25/00GK103013839SQ20121054206
公開日2013年4月3日 申請日期2012年12月14日 優(yōu)先權(quán)日2012年12月14日
發(fā)明者李楠, 張海軍, 羅志會, 劉慕蘭, 李惠 申請人:江蘇耕耘化學有限公司