專利名稱：防治小麥赤霉病的地衣芽孢桿菌及其應用的制作方法
技術領域：
本發明涉及微生物菌劑，具體地涉及防治小麥赤霉病的地衣芽孢桿菌及其應用。
背景技術：
禾谷鐮刀菌(Fusarium graminearum),又稱禾谷鐮孢,可引起小麥、大麥、水稻、燕麥的穗枯或“穗瘡痂”病和玉米的莖腐病與穗腐爛病，也稱為赤霉病。禾谷鐮刀菌引起的小麥赤霉病是世界性流行病害。小麥受到禾谷鐮刀病菌的侵染后，病穗上往往出現粉紅色或橘紅色的霉狀物，因此被稱為赤霉病。赤霉病是溫暖潮濕麥區廣泛發生的一種病害，已在世界上五大洲30多個國家發生和流行。近年來，隨著全球氣候的變暖，還有蔓延擴散的趨勢。在我國，小麥赤霉病造成的損失僅次于小麥條銹病，且分布范圍廣泛。在世界范同內，赤霉病在美國中北 部、加拿大南部、歐洲和南美地區都呈蔓延趨勢。赤霉病會造成糧食嚴重減產和籽粒品質下降；同時，感病籽粒帶有真菌毒素，導致小麥不適于磨粉和食用，也不能當作飼料麥銷售，從而造成雙重的經濟損失。隨著化學農藥不斷施用所造成的病原菌抗藥性產生、耐藥性增強和農藥殘留等問題的出現，赤霉病的生物防治的優點逐漸顯現，禾谷鐮刀菌拮抗菌株的開發和抗菌株生物防治的研究已成為熱點。

發明內容
本發明的目的是提供一種地衣芽孢桿菌及其在防治小麥赤霉病中的應用。本發明從活性污泥中，分離純化得到地衣芽孢桿菌Bacillus licheniformis UTM110菌株。UTMl 10菌株于2013年I月8日保存于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心(簡稱CGMCCJia:北京市朝陽區北辰西路I號院3號，中國科學院微生物研究所，郵編 100101)，保藏號=CGMCC N0.7098。所述地衣芽孢桿菌UTM 110菌株的鑒定特征是:菌落形狀不規則，具有波浪狀邊緣，表面粗糙不透明，有粘液珠，污白色；革蘭氏陽性桿菌，能運動；芽孢橢圓或柱狀，位于菌體中央或稍偏。SEQ ID N0.1為地衣芽孢桿菌UTM 110的16S rDNA序列。所述菌株通過R2A培養基(蛋白胨0.5g,淀粉0.5g,葡萄糖0.5g,酵母粉0.5g,干酪素水解物0.5g，磷酸氫二鉀0.3g，丙酮酸鈉0.3g，硫酸鎂0.024g,水1L，瓊脂粉20%)分尚培養。生產菌株采用LB培養基(蛋白胨10g，酵母粉10g，氯化鈉IOg,水1L)，28_35°C，培養24小時，發酵液5000rpm離心5分鐘，得到上清液即可。本發明還提供一種含有所述地衣芽孢桿菌UTM 110的菌劑。所述菌劑的制備方法包括以下步驟:接種地衣芽孢桿菌UTM 110于LB培養液培養基中，置于28-35°C下培養24小時。其他培養基也可以使用，培養溫度及時間可做適當調整，其他培養如R2A、PDA、KB等。擴繁后的菌液可做成水劑或粉劑，向有機肥中添加。菌劑含有地衣芽孢桿菌UTM 110的活菌數為108/ml。
本發明的有益效果:本發明菌株經平板對峙實驗證實該地衣芽孢桿菌能夠有效抑制谷鐮刀病菌的生長，環境安全性好，經發酵后可加入有機肥中，作為的微生物肥料使用，也可作為好氧堆肥的微生物菌種。


圖1為地衣芽孢桿菌UTMllO菌株的系統發育樹；圖2為地衣芽孢桿菌UTMllO光學顯微鏡照片；圖3為地衣芽孢桿菌UTMllO對禾谷鐮刀菌絲的抑制作用，A顯示地衣芽孢桿菌UTMllO對禾谷鐮刀菌絲較強的抑制作用，B為陰性對照。
具體實施例方式以下實施例用于說明本發明，但不用來限制本發明的范圍。在不背離本發明精神和實質的情況下，對本發明方法、步驟或條件所作的修改或替換，均屬于本發明的范圍。若未特別指明，實施例中所用的技術手段為本領域技術人員所熟知的常規手段。實施例1菌株的分離和培養取污水處理廠活性污泥lg，溶于IOml無菌蒸餾水中，梯度稀釋后涂布于R2A培養基(蛋白胨0.5g，淀粉0.5g，葡萄 糖0.5g，酵母粉0.5g，干酪素水解物0.5g，磷酸氫二鉀
0.3g，丙酮酸鈉0.3g，硫酸鎂0.024g,水1L，瓊脂粉20%), 28°C培養，分離單菌落。將禾谷鐮刀菌接種在PDA平板上(去皮馬鈴薯200g，葡萄糖20g，瓊脂10g，水1000ml)，28°C培養5-7天后備用。挑取活性污泥分離平板上的細菌單菌落接種到20ml LB培養液中，置于28°C下150rpm/min的搖床上發酵培養10小時，取100 μ I發酵液涂布于LB瓊脂平板上，28°C培養10小時。使用直徑4_打孔器取I塊禾谷鐮刀菌菌塊，置于PDA平板中央，用打孔器在平板四周打4個孔，注入待測拮抗菌發酵液上清液100 μ L，28°C下培養，觀察結果，篩選拮抗效果好的單菌落，進行菌種鑒定。實施例2菌株的鑒定1、分離方法UTMllO菌株，分離于活性污泥。2、菌株特征經廣州工業微生物檢測中心鑒定為地衣芽孢桿菌(Bacillus licheniformis),菌株編號UTM110。該菌株的培養特征是菌落形狀不規則，具有波浪狀邊緣，表面粗糙不透明，有粘液珠，污白色；革蘭氏陽性桿菌，能運動；芽孢橢圓或柱狀，位于菌體中央或稍偏。SEQID N0.1地衣芽孢桿菌UTMl 10的16S rDNA序列。圖1為地衣芽孢桿菌UTMllO菌株的系統發育樹。圖2為地衣芽孢桿菌UTMllO光學顯微鏡照片。3、菌株生化檢測指標
權利要求
1.地衣芽孢桿菌(Bacilluslicheniformis) UTM110，其保藏號為=CGMCC N0.7098。
2.含有權利要求1所述地衣芽孢桿菌UTMllO的菌劑。
3.根據權利要求2所述的菌劑，其特征在于，含有地衣芽孢桿菌UTMllO的活菌數為108/mlo
4.權利要求2或3所述菌劑的制備方法，其特征在于，在LB培養基中發酵地衣芽孢桿菌UTMllO制得。
5.根據權利要求4所述的制備方法，其特征在于，所述發酵條件為:28-35°C下培養24小時。
6.權利要求1所述地衣芽孢桿菌UTMllO或權利要求2或3所述菌劑在防治小麥赤霉病中的應用 。
全文摘要
本發明涉及防治小麥赤霉病的地衣芽孢桿菌及其應用。所述地衣芽孢桿菌保藏號為CGMCC No.7098。本發明的地衣芽孢桿菌能夠有效抑制禾谷鐮刀病菌的生長，環境安全性好，可作為的微生物肥料使用，也可作為好氧堆肥的微生物菌種。
文檔編號A01N63/00GK103184178SQ201310076629
公開日2013年7月3日 申請日期2013年3月11日 優先權日2013年3月11日
發明者劉永躍, 周順桂, 許宜北, 汪涌 申請人:大地綠源環保科技(北京)有限公司