食細菌類Plectus線蟲的培養方法
【專利摘要】本發明涉及一種食細菌類Plectus線蟲的培養方法，本發明是為了解決食細菌類Plectus線蟲室內可控可持續培養的問題，方法為：一、稱取NaCl，KCl，酵母粉、蛋白胨、?胰蛋白胨和瓊脂，放入燒杯中，用蒸餾水定容，再滅菌，冷卻后獲得培養膠；二、將培養膠搗碎后，加入無菌純水中，攪拌均勻，加入KH2PO4、K2HPO4、CaCl2、MgSO4和膽固醇，再用磷酸調節pH值，得到培養液；三、在培養液中加入大腸桿菌，培養得到菌液；四、取菌液倒入培養皿中，加入繞線屬食細菌線蟲培養，即完成。本發明實現了食細菌類Plectus線蟲的可控培養，本發明應用于微生物領域。
【專利說明】食細菌類Plectus線蟲的培養方法
【技術領域】
[0001]本發明涉及一種食細菌類Plectus線蟲的培養方法。
【背景技術】
[0002]線蟲被譽為地球上數量最豐富的動物類群，是進行自然生態健康風險評價和環境污染評價的指示生物。實現這種利用線蟲進行污染界定的生態監測，需要通過室內模式和野外控訴試驗，揭示污染環境下線蟲的脅迫響應機制；而實現在室內對線蟲進行可控培養，是保證利用線蟲作為指示生物的基礎和保證。繞線屬(Plectus)食細菌線蟲是一類數量豐富、具有重要生態功能的土壤線蟲，生活介質需要有附著物又喜游動，對生活環境的水分要求高。
[0003]Plectus線蟲在常規的線蟲培養基(NGM培養基)上無法長期生存，而在液體培養基中也不能生長。目前食細菌類Plectus線蟲的無法可控培養，影響利用食細菌類Plectus線蟲進行模擬試驗的 進行。

【發明內容】

[0004]本發明的目的是為了解決食細菌類Plectus線蟲室內可控可持續培養的問題，而提供食細菌類Plectus線蟲的培養方法。
[0005]本發明食細菌類Plectus線蟲的培養方法按以下步驟進行:一、稱取1.5~2.5gNaCl、L0~2.0g KC1、0.4~0.6g酵母粉、(λ 8~L 2g蛋白胨、(λ 8~1.2g胰蛋白胨和0.8~1.2g瓊脂，放入燒杯中，然后用蒸餾水定容至IOOmL,再放入高壓蒸汽滅菌鍋中120°C滅菌20min，冷卻后得到培養膠；二、將步驟一得到的培養膠搗碎后，加入100mL無菌水中，攪拌均勻，加入 20 ~50mgKH2P04、20 ~50mg K2HPO4UOmg CaCl2UOmg MgSO4 和 IOmg 膽固醇，再用質量濃度為98%的磷酸調節pH值為6.0，得到培養液；三、在步驟二得到的培養液中加入0.1~0.2mL濃度為1父109個/1^~2\109個/1^的大腸桿菌，在371:培養箱中培養4~6h，得到菌液；四、取步驟三得到的菌液20ml倒入培養皿中，加入繞線屬食細菌線蟲,放入20 °C恒溫培養箱中培養，即完成。
[0006]本發明實現了對食細菌類Plectus線蟲的室內持續穩定培養。
[0007]本發明的有益效果:
[0008]繞線屬(Plectus)食細菌線蟲在常用的NGM培養基上不生長，在完全液體的培養液中也不生長。本發明解決了這類喜游動線蟲室內持續培養的難題，這種培養基具有固液混合特性，模擬了繞線屬(Plectus)食細菌線蟲在土壤毛細水層中的生境，最大限度的滿足了繞線屬(Plectus)食細菌線蟲對水閾值的要求。利用這種固液混合培養基培養細菌，也提高了細菌在培養基中的覆蓋度，保證了這類游動線蟲充分獲取食物。本發明方法實現了食細菌類Plectus線蟲的可控可持續培養，有利于食細菌類Plectus線蟲進行模擬試驗的進行。【專利附圖】

【附圖說明】
[0009]圖1為食細菌類Plectus線蟲在試驗I培養基中的生存圖片；
[0010]圖2為食細菌類Plectus線蟲在試驗I培養基中的生存圖片。
【具體實施方式】
[0011]【具體實施方式】一:本實施方式食細菌類Plectus線蟲的培養方法按以下步驟進行:一、稱取 1.5 ~2.5g NaCl、1.0 ~2.0g KC1、0.4 ~0.6g 酵母粉、0.8 ~1.2g 蛋白胨、
0.8~1.2g胰蛋白胨和0.8~1.2g瓊脂,放入燒杯中，然后用蒸懼水定容至IOOmL,再放入高壓蒸汽滅菌鍋中120°C滅菌20 min，冷卻后得到培養膠；二、將步驟一得到的培養膠搗碎后，加入100mL無菌水中，攪拌均勻，加入20~50mgKH2P04、20~50mg K2HPO4UOmg CaCl2,IOmg MgSO4和IOmg膽固醇，再用質量濃度為98%的磷酸調節pH值為6.0，得到培養液；三、在步驟二得到的培養液中加入0.1~0.2mL濃度為I X IO9個/mL~2X IO9個/mL的大腸桿菌，在37°C培養箱中培養4~6h，得到菌液；四、取步驟三得到的菌液20ml倒入培養皿中，加入繞線屬食細菌線蟲，放入20°C恒溫培養箱中培養，即完成。
[0012]本實施方式實現了對食細菌類Plectus線蟲的室內持續穩定培養。
[0013]本實施方式的有益效果:
[0014]繞線屬(Plectus)食細菌線蟲在常用的NGM培養基上不生長，在完全液體的培養液中也不生長。本實施方式解決了這類喜游動線蟲室內持續培養的難題，這種培養基具有固液混合特性，模擬了繞線屬(Plectus)食細菌線蟲在土壤毛細水層中的生境，最大限度的滿足了繞線屬(Plectus)食細菌線蟲對水閾值的要求。利用這種固液混合培養基培養細菌，也提高了細菌在培養`基中的覆蓋度，保證了這類游動線蟲充分獲取食物。
[0015]【具體實施方式】二:本實施方式與【具體實施方式】二相同的是:食細菌類Plectus線蟲的培養方法按以下步驟進行:一、稱取1.5~2.0g NaCl、1.5~2.0g KC1、0.4~0.6g酵母粉、0.8~1.2g蛋白胨、0.8~1.2g胰蛋白胨和0.8~1.2g瓊脂,放入燒杯中，然后用蒸餾水定容至IOOmL,再放入高壓蒸汽滅菌鍋中120°C滅菌20 min，冷卻后得到培養膠；二、將步驟一得到的培養膠搗碎后，加入100mL無菌水中，攪拌均勻，加入30~40mgKH2P04、30~40mg K2HPO4UOmg CaCl2UOmg MgSO4和IOmg膽固醇，再用質量濃度為98%的磷酸調節pH值為6.0，得到培養液；三、在步驟二得到的培養液中加入0.1~0.2mL濃度為IX IO9個/mL~2X IO9個/mL的大腸桿菌，在37°C培養箱中培養4~6小時；四、取步驟三得到的菌液20ml倒入培養皿中，加入繞線屬食細菌線蟲，放入20°C恒溫培養箱中培養，即完成。
[0016]其它與【具體實施方式】一相同。
[0017]【具體實施方式】三:本實施方式與【具體實施方式】一或二不同的是:食細菌類Plectus線蟲的培養方法按以下步驟進行:一、稱取1.5~2.5g NaCl、1.0~2.0g KC1、
0.4~0.6g酵母粉、0.8~1.2g蛋白胨、0.8~1.2g胰蛋白胨和0.8~1.2g瓊脂，放入燒杯中，然后用蒸餾水定容至IOOmL,再放入高壓蒸汽滅菌鍋中120°C滅菌20 min，冷卻后得到培養膠；二、將步驟一得到的培養膠搗碎后，加入100mL無菌水中，攪拌均勻后，加入20~50mgKH2P04，20 ~50mg K2HPO4UOmg CaCl2UOmg MgSO4和 IOmg 膽固醇，再用質量濃度為 98%的磷酸調節PH值為6.0，得到培養液；三、在步驟二得到的培養液中加入0.1~0.2mL濃度為2X IO9個/mL的大腸桿菌，在37°C培養箱中培養5小時；四、取20ml步驟三得到的菌液倒入9cm培養皿中，加入繞線屬食細菌線蟲，放入20°C恒溫培養箱中培養，即完成。
[0018]其它與【具體實施方式】一或二相同。
[0019]【具體實施方式】四:本實施方式與【具體實施方式】一至三之一不同的是:食細菌類Plectus線蟲的培養方法按以下步驟進行:一、稱取2.5g NaCl,2.0g KC1、0.6g酵母粉、
0.8g蛋白胨、0.8g胰蛋白胨和0.8g瓊脂,放入燒杯中，用蒸懼水定容至IOOmL,放入高壓蒸汽滅菌鍋中120°C滅菌20 min，冷卻后得到培養膠；二、將步驟一得到的培養膠，用玻璃棒搗碎后，加入100mL無菌水中，攪拌均勻后，加入20mgKH2P04、50mg K2HPO4UOmg CaCl2、IOmgMgSO4和IOmg膽固醇，再用質量濃度為98%的磷酸調節pH值為6.0，得到培養液；三、在步驟二得到的培養液中加入0.1~0.2mL濃度為I X IO9個/mL~2X IO9個/mL的大腸桿菌，在37°C培養箱中培養4~6h，得到菌液；四、取20ml步驟三得到的菌液倒入9cm培養皿中，加入繞線屬食細菌線蟲，放入20°C恒溫培養箱中培養，即完成。其它與【具體實施方式】一至三之一相同。
[0020]【具體實施方式】五:本實施方式與【具體實施方式】一至四之一不同的是:食細菌類Plectus線蟲的培養方法按以下步驟進行:一、稱取2.5g NaCl,2.0g KC1、0.6g酵母粉、
0.8g蛋白胨、0.8g胰蛋白胨和0.8g瓊脂,放入250mL燒杯中，用蒸懼水定容至IOOmL,放入高壓蒸汽滅菌鍋中120°C滅菌20 min，冷卻后得到培養膠；二、將步驟一得到的培養膠，用玻璃棒搗碎后，加入100mL無菌水中，攪拌均勻后,加入20mgKH2P04、50mg K2HPO4UOmgCaCl2, IOmgMgSO4和IOmg膽固醇，再用質量濃度為98%的磷酸調節pH值為6.0，得到培養液；三、在步驟二得到的培養液中加入0.1~0.2mL濃度為12 X IO9個/mL的大腸桿菌，在37°C培養箱中培養6h，得到菌液；四、取20ml步驟三得到的菌液倒入9cm培養皿中，加入繞線屬食細菌線蟲，放入20°C恒溫培養箱中培養，即完成。其它與【具體實施方式】一至四之一相同。`
[0021]【具體實施方式】六:本實施方式與【具體實施方式】一至五之一不同的是:食細菌類Plectus線蟲的培養方法按以下步驟進行:一、稱取1.5g NaCl, 1.0g KC1、0.4g酵母粉、
0.8g蛋白胨、0.8g胰蛋白胨和1.0g瓊脂,放入250mL燒杯中，用蒸懼水定容至IOOmL,放入高壓蒸汽滅菌鍋中120°C滅菌20 min，冷卻后得到培養膠；二、將步驟一得到的培養膠，用玻璃棒搗碎后，加入100mL無菌水中，攪拌均勻后，加入20mgKH2P04、20mg K2HPO4^lOmgCaCl2, IOmgMgSO4和IOmg膽固醇，再用質量濃度為98%的磷酸調節pH值為6.0，得到培養液；三、在步驟二得到的培養液中加入0.1~0.2mL濃度為I X IO9個/mL個/mL的大腸桿菌，在37°C培養箱中培養6小時，得到菌液；四、取20ml步驟三得到的菌液倒入9cm培養皿中，加入繞線屬食細菌線蟲，放入20°C恒溫培養箱中培養，即完成。其它與【具體實施方式】一至五之一相同。
[0022]【具體實施方式】七:本實施方式與【具體實施方式】一至六之一不同的是:食細菌類Plectus線蟲的培養方法按以下步驟進行:一、稱取2.0g NaClU.5g KC1、0.5g酵母粉、
1.0g蛋白胨、1.0g胰蛋白胨和1.0g瓊脂,放入250mL燒杯中，用蒸懼水定容至IOOmL,放入高壓蒸汽滅菌鍋中120°C滅菌20 min，冷卻后得到培養膠；二、將步驟一得到的培養膠，用玻璃棒搗碎后，加入100mL無菌水中，攪拌均勻后，加入25mgKH2P04、25mg K2HPO4^lOmgCaCl2, IOmgMgSO4和IOmg膽固醇，再用質量濃度為98%的磷酸調節pH值為6.0，得到培養液；三、在步驟二得到的培養液中加入0.1~0.2mL濃度為lX109f/mL~2X109f/mI^3大腸桿菌，在37°C培養箱中培養4小時，得到菌液；四、取20ml步驟三得到的菌液倒入9cm培養皿中，加入繞線屬食細菌線蟲，放入20°C恒溫培養箱中培養，即完成。其它與【具體實施方式】一至六之一相同。
[0023]【具體實施方式】八:本實施方式與【具體實施方式】一至七之一不同的是:食細菌類Plectus線蟲的培養方法按以下步驟進行:一、稱取2.5g NaCl,2.0g KC1、0.6g酵母粉、
1.2g蛋白胨、1.2g胰蛋白胨和1.2g瓊脂,放入250mL燒杯中，用蒸懼水定容至IOOmL,放入高壓蒸汽滅菌鍋中120°C滅菌20 min，冷卻后得到培養膠；二、將步驟一得到的培養膠，用玻璃棒搗碎后，加入100mL無菌水中，攪拌均勻后，加入50mgKH2P04、50mg K2HPO4^lOmgCaCl2, IOmgMgSO4和IOmg膽固醇，再用質量濃度為98%的磷酸調節pH值為6.0，得到培養液；三、在步驟二得到的培養液中加入0.1~0.2mL濃度為2X IO9個/mL的大腸桿菌，在37°C培養箱中培養6小時，得到菌液；四、取20ml步驟三得到的菌液倒入9cm培養皿中，加入繞線屬食細菌線蟲，放入20°C恒溫培養箱中培養，即完成。其它與【具體實施方式】一至七之一相同。
[0024]通過以下試驗驗證本發明的有益效果:
[0025]試驗1、本試驗食細菌類Plectus線蟲的培養方法如下:一、稱取2.5g NaCl>2.0gKCl、0.6g酵母粉、1.2g蛋白胨、1.2g胰蛋白胨和1.2g瓊脂，放入250mL燒杯中，用蒸餾水定容至IOOmL,放入高壓蒸汽滅菌鍋中120°C滅菌20 min，冷卻后得到培養膠；二、將步驟一得到的培養膠，用玻璃棒搗碎后，加入100mL無菌水中，攪拌均勻后，加入50mgKH2P04、50mgK2HPO4UOmg CaCl2UOmg MgSO4和IOmg膽固醇，再用質量濃度為98%的磷酸調節pH值為
6.0，得到培養液；三、在步驟二得到的培養液中加入0.1~0.2mL濃度為2X IO9個/mL的大腸桿菌，在37°C培養箱中培養6小時，得到菌液；四、取20ml步驟三得到的菌液倒入9cm培養皿中，加入繞線屬食細菌線蟲，放入20°C恒溫培養箱中培養10d，即完成。
`[0026]圖1和圖2為食細菌類Plectus線蟲在本試驗培養基中的生存圖，由圖1和圖2可知，培養10天后食細菌類Plectus線蟲在本試驗培養基中的生存良好，證明本試驗方法實現了食細菌類Plectus線蟲室內可控可持續培養。
【權利要求】
1.食細菌類Plectus線蟲的培養方法，其特征在于食細菌類Plectus線蟲的培養方法按以下步驟進行:一、稱取1.5~2.5g NaCl、l.0~2.0g KC1、0.4~0.6g酵母粉、0.8~1.2g蛋白胨、0.8~1.2g胰蛋白胨和0.8~1.2g瓊脂,放入燒杯中，然后用蒸懼水定容至IOOmL,再放入高壓蒸汽滅菌鍋中120°C滅菌20 min，冷卻后得到培養膠；二、將步驟一得到的培養膠搗碎后，加入100mL無菌水中，攪拌均勻，加入20~50mgKH2P04、20~50mgK2HPO4UOmg CaCl2UOmg MgSO4和IOmg膽固醇，再用質量濃度為98%的磷酸調節pH值為6.0，得到培養液；三、在步驟二得到的培養液中加入0.1~0.2mL濃度為IX IO9個/mL~2X IO9個/mL的大腸桿菌，在37°C培養箱中培養4~6h，得到菌液；四、取步驟三得到的菌液20ml倒入培養皿中，加入繞線屬食細菌線蟲，放入20°C恒溫培養箱中培養，即完成。
2.根據權利要求1所述的食細菌類Plectus線蟲的培養方法，其特性在于食細菌類Plectus線蟲的培養方法按以下步驟進行:一、稱取1.5~2.0g NaCl、1.5~2.0g KC1、0.4~0.6g酵母粉、0.8~1.2g蛋白胨、0.8~1.2g胰蛋白胨和0.8~1.2g瓊脂，放入燒杯中，然后用蒸餾水定容至IOOmL,再放入高壓蒸汽滅菌鍋中120°C滅菌20 min，冷卻后得到培養膠；二、將步驟一得到的培養膠搗碎后，加入100mL無菌水中，攪拌均勻，加入30~40mgKH2P04、30 ~40mg K2HPO4UOmg CaCl2UOmg MgSO4和 IOmg 膽固醇，再用質量濃度為 98%的磷酸調節PH值為6.0，得到培養液；三、在步驟二得到的培養液中加入0.1~0.2mL濃度為I X IO9個/mL~2 X IO9個/mL的大腸桿菌，在37°C培養箱中培養4~6小時；四、取步驟三得到的菌液20ml倒入培養皿中，加入繞線屬食細菌線蟲，放入20°C恒溫培養箱中培養，即完成。
3.根據權利要求1所述的食細菌類Plectus線蟲的培養方法，其特性在于食細菌類Plectus線蟲的培養方法按以下步驟進行:一、稱取1.5~2.5g NaCl、1.0~2.0g KC1、0.4~0.6g酵母粉、0.8~1.2g蛋白胨、0.8~1.2g胰蛋白胨和0.8~1.2g瓊脂，放入燒杯中，然后用蒸餾水定容至IO Om L,再放入高壓蒸汽滅菌鍋中120°C滅菌20 min，冷卻后得到培養膠；二、將步驟一得到的培養膠搗碎后，加入100mL無菌水中，攪拌均勻后，加入20~50mgKH2P04, 20 ~50mg K2HPO4UOmg CaCl2UOmg MgSO4 和 IOmg 膽固醇，再用質量濃度為98%的磷酸調節pH值為6.0,得到培養液；三、在步驟二得到的培養液中加入0.1~0.2mL濃度為2 X IO9個/mL的大腸桿菌，在37°C培養箱中培養5小時；四、取20ml步驟三得到的菌液倒入9cm培養皿中，加入繞線屬食細菌線蟲，放入20°C恒溫培養箱中培養，即完成。
4.根據權利要求1所述的食細菌類Plectus線蟲的培養方法，其特性在于食細菌類Plectus線蟲的培養方法按以下步驟進行:一、稱取2.5g NaCl,2.0g KC1、0.6g酵母粉、0.8g蛋白胨、0.8g胰蛋白胨和0.8g瓊脂,放入250mL燒杯中，用蒸懼水定容至IOOmL,放入高壓蒸汽滅菌鍋中120°C滅菌20 min，冷卻后得到培養膠；二、將步驟一得到的培養膠，用玻璃棒搗碎后，加入100mL無菌水中，攪拌均勻后，加入20mgKH2P04、50mg K2HPO4^lOmgCaCl2UOmg MgSO4和IOmg膽固醇，再用質量濃度為98%的磷酸調節pH值為6.0，得到培養液；三、在步驟二得到的培養液中加入0.1~0.2mL濃度為IX IO9個/mL~2X IO9個/mL的大腸桿菌，在37°C培養箱中培養4~6h，得到菌液；四、取20ml步驟三得到的菌液倒入9cm培養皿中，加入繞線屬食細菌線蟲,放入20 V恒溫培養箱中培養，即完成。
5.根據權利要求1所述的食細菌類Plectus線蟲的培養方法，其特性在于食細菌類Plectus線蟲的培養方法按以下步驟進行:一、稱取2.5g NaCl,2.0g KC1、0.6g酵母粉、.0.8g蛋白胨、0.8g胰蛋白胨和0.8g瓊脂,放入250mL燒杯中，用蒸懼水定容至IOOmL,放入高壓蒸汽滅菌鍋中120°C滅菌20 min，冷卻后得到培養膠；二、將步驟一得到的培養膠，用玻璃棒搗碎后，加入100mL無菌水中，攪拌均勻后,加入20mgKH2P04、50mg K2HPO4UOmgCaCl2UOmg MgSO4和IOmg膽固醇，再用質量濃度為98%的磷酸調節pH值為6.0，得到培養液；三、在步驟二得到的培養液中加入0.1~0.2mL濃度為12X IO9個/mL的大腸桿菌，在37°C培養箱中培養6h，得到菌液；四、取20ml步驟三得到的菌液倒入9cm培養皿中，加入繞線屬食細菌線蟲，放入20°C恒溫培養箱中培養，即完成。
6.根據權利要求1所述的食細菌類Plectus線蟲的培養方法，其特性在于食細菌類Plectus線蟲的培養方法按以下步驟進行:一、稱取1.5g NaClU.0g KC1、0.4g酵母粉、0.8g蛋白胨、0.8g胰蛋白胨和1.0g瓊脂,放入250mL燒杯中，用蒸懼水定容至IOOmL,放入高壓蒸汽滅菌鍋中120°C滅菌20 min，冷卻后得到培養膠；二、將步驟一得到的培養膠，用玻璃棒搗碎后，加入100mL無菌水中，攪拌均勻后，加入20mgKH2P04、20mg K2HPO4^lOmgCaCl2UOmg MgSO4和IOmg膽固醇，再用質量濃度為98%的磷酸調節pH值為6.0，得到培養液；三、在步驟二得到的培養液中加入0.1~0.2mL濃度為I X IO9個/mL個/mL的大腸桿菌，在37°C培養箱中培養6小時，得到菌液；四、取20ml步驟三得到的菌液倒入9cm培養皿中，加入繞線屬食細菌線蟲，放入20°C恒溫培養箱中培養，即完成。
7.根據權利要求1所述的食細菌類Plectus線蟲的培養方法，其特性在于食細菌類Plectus線蟲的培養方法按以下步驟進行:一、稱取2.0g NaClU.5g KC1、0.5g酵母粉、1.0g蛋白胨、1.0g胰蛋白胨和1.0g瓊脂,放入250mL燒杯中，用蒸懼水定容至IOOmL,放入高壓蒸汽滅菌鍋中120°C滅菌20 min，冷卻后得到培養膠；二、將步驟一得到的培養膠，用玻璃棒搗碎后，加入100mL無菌水中，攪拌均勻后，加入25mgKH2P04、25mg K2HPO4^lOmgCaCl2UOmg MgSO4和IOmg膽固醇，再用質量濃度為98%的磷酸調節pH值為6.0，得到培養液；三、在步驟二得到的培養液中加入0.1~0.2mL濃度為lX109f/mL~2X109f/mI^3大腸桿菌，在37°C培養箱中培養4小時，得到菌液；四、取20ml步驟三得到的菌液倒入9cm培養皿中，加入繞線屬食細菌線蟲，放入20°C恒溫培養箱中培養，即完成。
8.根據權利要求1所述的食細菌類Plectus線蟲的培養方法，其特性在于食細菌類Plectus線蟲的培養方法按以下步驟進行:一、稱取2.5g NaCl,2.0g KC1、0.6g酵母粉、1.2g蛋白胨、1.2g胰蛋白胨和1.2g瓊脂,放入250mL燒杯中，用蒸懼水定容至IOOmL,放入高壓蒸汽滅菌鍋中120°C滅菌20 min，冷卻后得到培養膠；二、將步驟一得到的培養膠，用玻璃棒搗碎后，加入100mL無菌水中，攪拌均勻后，加入50mgKH2P04、50mg K2HPO4^lOmgCaCl2UOmg MgSO4和IOmg膽固醇，再用質量濃度為98%的磷酸調節pH值為6.0，得到培養液；三、在步驟二得到的培養液中加入0.1~0.2mL濃度為2X IO9個/mL的大腸桿菌，在37°C培養箱中培養6小時，得到菌液；四、取20ml步驟三得到的菌液倒入9cm培養皿中，加入繞線屬食細菌線蟲，放入20°C恒溫培養箱中培養，即完成。
【文檔編號】A01K67/033GK103875605SQ201410089794
【公開日】2014年6月25日 申請日期:2014年3月12日 優先權日:2014年3月12日
【發明者】王云彪 申請人:中國科學院東北地理與農業生態研究所