一種采用胚胎生物技術超常規繁育良種奶牛的方法
【專利摘要】本發明涉及一種采用胚胎生物技術超常規繁育良種奶牛的方法，選擇優秀且適宜母奶牛作為供體，所述方法包括以下步驟：a、超數排卵，b、人工授精，c、沖胚，d、胚胎的檢查，e、胚胎冷凍，f、胚胎解凍，g、胚胎分離，h、胚胎移植。采取上述方法，可以有效地控制母犢的出生率，而且降低了生產成本，提高了奶牛以及牛奶的品質，達到了超常快速繁育母奶牛的目的。
【專利說明】一種采用胚胎生物技術超常規繁育良種奶牛的方法

【技術領域】
[0001] 本發明涉及一種生物工程技術，具體為一種采用胚胎生物技術超常規繁育良種奶 牛的方法。

【背景技術】
[0002] 牛奶作為一種營養最全面和完善的食品之一，歷來被人們所重視。特別是隨著人 們生活水平的提高和膳食結構的不斷改善，牛奶的社會需求不斷增加，按照常規的奶牛繁 育發展速度，難以滿足人們對牛奶日益增長的需求。如何利用高新技術超常規繁育奶牛是 擺在廣大科技工作者特別畜牧工作者面前的一項重要而緊迫的任務。
[0003] 我國從70年代開始對胚胎生物工程技術進行研究，80年代后研究發展速度加快， 近年來，在胚胎生物工程單項技術方面取得了可喜的研究成果。特別是超數排卵、體外受 精、胚胎收集、性別鑒定、胚胎分割、胚胎克隆、胚胎冷凍保存及胚胎移植等工程技術方面， 有了較大突破和進展，在一定程度上加速了奶牛的繁殖和品質的改良，但在控制奶牛出生 性別技術方面，無法突破，將嚴重制約著奶牛超常超繁育的發展速度。


【發明內容】

[0004] 本發明的目的是提供一種采用胚胎生物技術超常規繁育良種奶牛的方法，本發明 是通過以下技術來實現的： 一種采用胚胎生物技術超常規繁育良種奶牛的方法，選擇優秀且適宜母奶牛作為供 體，所述方法包括以下步驟： a、 超數排卵：在所選母奶牛發情的前4d，即發情周期的第16天或第17天，在肌肉或皮 下注射 PMSG1500-3000IU ; b、 人工授精：經過超數排卵處理的母奶牛發情后，選擇優良公牛的的精液，在適宜時間 進行人工授精； c、 沖胚：利用二路式導管沖卵器，將沖洗液通過內管注入子宮角內，然后導出沖洗液， 及可獲得所需胚胎沖洗液； d、 胚胎的檢查：把步驟c收集到的沖洗液，靜置lOmin，待胚胎下沉后，移去上層液，放 在顯微鏡下檢查數量和發育情況； e、 胚胎冷凍：把胚胎放在含有防凍劑的杜氏培養液中采取緩慢降溫冷凍； f、 胚胎解凍：可直接放在室溫中解凍，解凍清除掉防凍劑； g、 胚胎分離：利用顯微操作儀對胚胎進行半胚以上分割； h、 胚胎移植：采用非手術移植，一只手伸入直腸，檢查黃體位于哪一側和發育情況，然 后握住子宮頸，另一手將移植管插入與黃體同側的子宮角內，注入胚胎。
[0005] 所述步驟a中一次肌注上述量的PMSG，隔日再注射PGF2a3(T40mg。
[0006] 所述步驟b中，人工授精應使用活率高密度大的精液，而且將授精次增加到2次或 3次，兩次間隔8~10h。
【權利要求】
1. 一種采用胚胎生物技術超常規繁育良種奶牛的方法，選擇優秀且適宜母奶牛作為供 體，其特征在于：所述方法包括以下步驟： a、 超數排卵：在所選母奶牛發情的前4d，即發情周期的第16天或第17天，在肌肉或皮 下注射 PMSG1500-3000IU ; b、 人工授精：經過超數排卵處理的母奶牛發情后，選擇優良公牛的的精液，在適宜時間 進行人工授精； c、 沖胚：利用二路式導管沖卵器，將沖洗液通過內管注入子宮角內，然后導出沖洗液， 及可獲得所需胚胎沖洗液； d、 胚胎的檢查：把步驟c收集到的沖洗液，靜置lOmin，待胚胎下沉后，移去上層液，放 在顯微鏡下檢查數量和發育情況； e、 胚胎冷凍：把胚胎放在含有防凍劑的杜氏培養液中采取緩慢降溫冷凍； f、 胚胎解凍：可直接放在室溫中解凍，解凍清除掉防凍劑； g、 胚胎分離：利用顯微操作儀對胚胎進行半胚以上分割； h、 胚胎移植：采用非手術移植，一只手伸入直腸，檢查黃體位于哪一側和發育情況，然 后握住子宮頸，另一手將移植管插入與黃體同側的子宮角內，注入胚胎。
2. 根據權利要求1所述一種采用胚胎生物技術超常規繁育良種奶牛的方法，其特征在 于：所述步驟a中一次肌注上述量的PMSG，隔日再注射PGF2a3(T40mg。
3. 根據權利要求1所述一種采用胚胎生物技術超常規繁育良種奶牛的方法，其特征在 于：所述步驟b中，人工授精應使用活率高密度大的精液，而且將授精次增加到2次或3次， 兩次間隔8~10h。
4. 根據權利要求1所述一種采用胚胎生物技術超常規繁育良種奶牛的方法，其特征在 于：步驟c中所述沖洗液為杜氏磷酸鹽緩沖液。
5. 根據權利要求1所述一種采用胚胎生物技術超常規繁育良種奶牛的方法，其特征在 于：所述沖胚一般在人工授精6~8d進行。
6. 根據權利要求1所述一種采用胚胎生物技術超常規繁育良種奶牛的方法，其特征在 于：所述步驟e，在冷凍前需先依次經過含有由低濃度到高濃度防凍劑的杜氏培養液，防凍 劑的最高梯度為1. (Tl. 5mol/l，每種深度中停留5~10min，在最后一種深度中降溫冷凍。
7. 根據權利要求1所述一種采用胚胎生物技術超常規繁育良種奶牛的方法，其特征在 于：所述步驟e，在冷凍時必須采取緩慢降溫，由室溫降至-5°C ~_7°C，每分鐘降1 °C，在此溫 度下進行誘發結冰，然后按每分鐘降〇. 3°C ~0. 5°C的速度降至-33°C ~-38°C，此后可直接浸 入液氮保存。
8. 根據權利要求1所述一種采用胚胎生物技術超常規繁育良種奶牛的方法，其特征在 于：所述步驟f，解凍后加入蔗糖液稀釋。
9. 根據權利要求1所述一種采用胚胎生物技術超常規繁育良種奶牛的方法，其特征在 于：所述步驟h，胚胎移植的受體可以選擇黃牛或其它種牛。
10. 根據權利要求1所述一種采用胚胎生物技術超常規繁育良種奶牛的方法，其特征 在于：為了控制和提商奶牛母續的出生率，將提供精液的公牛右辜丸帶陽性精子的輸精管 人工結扎，確保左睪丸排出帶陰性的X精子，以及將供體母牛右卵巢輸卵管進行結扎，確保 左卵管排出帶陰性的X卵。
【文檔編號】A61D19/00GK104042355SQ201410281737
【公開日】2014年9月17日 申請日期:2014年6月23日 優先權日:2014年6月23日
【發明者】不公告發明人 申請人:南通惠然生物科技有限公司