本發明涉及植物組織培養方法，尤其是涉及野茉莉種胚苗莖段的離體快速繁殖方法。

背景技術：

野茉莉是安息香科野茉莉屬植物，落葉小喬木或灌木，花期 4~7月，木材為散孔材，黃白色至淡褐色，紋理致密，材質稍堅硬，可作器具、雕刻等細工用材；種子油可作肥皂或機器潤滑油，油粕可作肥料；花美麗、芳香，可作庭園觀賞植物，具有較高的經濟和觀賞價值。野茉莉多處于野生狀態，具有較大的開發利用潛力。野茉莉種子9~11月成熟，其種子外皮堅硬，透水性差，內種皮中有一層致密保護膜包裹著種胚，對種子發芽有抑制作用，對野茉莉進行過發芽繁殖研究，未取得良好效果。建立野茉莉組織培養和快速繁殖技術，對野茉莉種質資源的保護以及開發利用有一定的參考價值。野茉莉的組織培養目前尚未見報道。

技術實現要素：

一種野茉莉種胚苗莖段離體快繁方法，其特征在于包括以下步驟：

A.選取野茉莉種子消毒處理后，無菌條件下分離種胚并接種于MS培養基，獲得無菌種胚苗；

B.切取步驟A種胚苗莖段，接種于增殖培養基中誘導叢生芽；

C.將步驟B形成的芽接種于生根培養基中，誘導生根，以獲得生根苗；

D.將步驟C小苗先后經溫室煉苗、溫室移栽，得到健壯的野茉莉苗。

所述的野茉莉組培方法，其特征在于步驟A中所述種子消毒具體方法為：選用飽滿野茉莉種子，剝除木質種皮，流水沖洗12h，蒸餾水沖洗1遍，于超凈工作臺上用75% 酒精浸泡1min，期間進行攪拌，然后轉入 0.1% NaCIO溶液中滅菌15 min，無菌水沖洗 5 ~6次。

所述的野茉莉組培方法，其特征在于步驟A所選外植體材料為野茉莉成熟種胚。

所述的野茉莉組培方法，其特征在于步驟A中所述初代培養基為MS培養基。

所述的野茉莉組培方法，其特征在于步驟B中所述無菌苗的莖段每2~3個節剪成一段，插入增殖培養基誘導叢生芽，增殖培養基為：MS+細胞分裂素6- 芐氨基腺嘌呤 0.3mgL^-1 和MS+6- 芐氨基腺嘌呤 0.3mgL^-1+吲哚丁酸0.3mgL^-1。

所述的野茉莉組培方法，其特征在于步驟D誘導生根的具體步驟是：將無菌苗轉入MS+吲哚丁酸(IBA)100 mgL^-1處理7d，再轉入1/2MS培養基中進行培養。

所述的野茉莉組培方法，其特征在于步驟D中所述煉苗移栽方法為：將生根苗從組培室轉移到室溫散射光條件下，先擰松瓶蓋煉苗7 d， 然后揭開瓶蓋，于室內放置 4~5 d，取出生根苗（ 根長約2.0 ～ 3.0cm），洗凈根部培養基，溫室移栽，基質為珍珠巖與草炭按照1:1 比例混合而成， 基質濕度為70% 左右， 覆膜保濕，待長出新葉后，逐步撤去覆膜。

所述的野茉莉組培方法，其特征在于培養基均添加3%蔗糖和0.8%瓊脂，pH 為5.8 ～ 6.0。

所述的野茉莉組培方法，其特征在于步驟A-D中材料培育的環境條件為：溫度24±2℃，光照時間12h/d，光照強度2500 ～ 2800lux。

附圖說明

圖1-4：本發明所述野茉莉種胚苗莖段的離體快速繁殖情況。

其中：圖1：種胚初代培養； 圖2：芽增殖；圖3：芽增殖后壯苗；圖4：生根情況。

具體實施方式

本發明提供了一種野茉莉種胚莖段離體快繁方法，其包括以下步驟：

1、選用飽滿野茉莉種子，剝除木質種皮，流水沖洗12h，蒸餾水沖洗1遍，于超凈工作臺上用75%酒精浸泡1min，期間進行攪拌，然后轉入0.1%的NaCIO溶液中滅菌15min，無菌水沖洗5~6次后，切取種胚置于MS培養基中獲得無菌苗。

2、將長成的種胚苗莖段每2 ~3個節剪成一段，插入增殖培養基誘導叢生芽，25d后最大增殖系數達5.55。

3、將無菌苗（>2.5cm有效無根苗）轉入MS+吲哚丁酸(IBA)100 mgL^-1處理7d，再轉入MS培養，25d后生根率( 生根苗數/ 接入的莖段苗數×100％ ) 為77.8％，平均根數為3條，根長約2.0 ～ 3.0cm 。

4、將生根苗（根長約2.0 ～ 3.0cm）從組培室轉移到室溫散射光條件下，先擰松瓶蓋煉苗7 d， 然后揭開瓶蓋，于室內放置 3~4d，取出生根苗， 洗凈根部培養基，溫室移栽，基質為珍珠巖與草炭按照1:1 比例混合而成， 基質濕度為70% 左右， 覆膜保濕，待長出新葉后，逐步撤去覆膜。

并且上述MS培養基具體配方為：硝酸銨1650.0mg/L，硝酸鉀1900.0mg/L，二水合氯化鈣440.0mg/L，七水硫酸鎂370.0mg/L，磷酸二氫鉀170mg/L，乙二胺四乙酸二鈉37.3mg/L，七水硫酸鐵27.8mg/L，碘化鉀0.83mg/L，四水硫酸錳22.3mg/L，二水鉬酸鈉0.25mg/L，硼酸6.2mg/L，五水硫酸銅0.025mg/L，六水氯化鈷0.025mg/L，肌醇100.0mg/L，鹽酸硫胺素0.1mg/L，鹽酸吡哆醇0.5 mg/L，甘氨酸2.0 mg/L。

1/2 MS培養基組分為：硝酸銨825.0mg/L，硝酸鉀950.0mg/L，二水合氯化鈣220.0mg/L，七水硫酸鎂185.0mg/L，磷酸二氫鉀85.0mg/L，乙二胺四乙酸二鈉37.3mg/L，七水硫酸鐵27.8mg/L，碘化鉀0.83mg/L，四水硫酸錳22.3mg/L，二水鉬酸鈉0.25mg/L，硼酸6.2mg/L，五水硫酸銅0.025mg/L，六水氯化鈷0.025mg/L，肌醇100.0mg/L，鹽酸硫胺素0.1mg/L，鹽酸吡哆醇0.5 mg/L，甘氨酸2.0 mg/L）。

上述初代培養基、增殖培養基、生根培養基，pH均為5.8～6.0；上述材料培育過程中的環境條件均為：溫度24±2℃，光照時間12h/d，光照強度2500 ～ 2800lux。

當然，以上說明僅僅為本發明的較佳實施案例，本發明并不限于列舉上述實施案例，應當說明的是，任何熟悉本領域的技術人員在本說明書的教導下，所做出的所有等同替代、明顯變形等形式，均在本說明書的實質范圍之內，理應受到本發明的保護。