本發明屬于生物
技術領域：
中的植物組織培養技術，提供了一種草莓培養基的制備方法。
背景技術：
：草莓（Fragaria×ananassaDuch.）是薔薇科草莓屬植物。因其鮮艷或綺麗的色澤、較高的營養價值及鮮美的口感而備受人們的歡迎。目前我國草莓的栽培面積超過200萬畝，為世界上最大的草莓生產國。草莓屬于多年生草本植物，匍匐莖繁殖是其繁殖的主要方式。因此傳統草莓育苗多是采用無性繁殖的方法。而通過無性繁殖，草莓苗易攜帶和積累病毒，造成嚴重的品種退化。使得植株抵抗力變弱、產量變低、品種變差。因此采用傳統繁殖方式會給草莓種植者造成嚴重的經濟損失。而植物組織培養技術的出現，使得利用草莓莖尖進行脫毒和擴繁成為現實。但是植物組織培養需要適宜的營養和生長條件，才能使植物細胞進行正常的分化和生長。而培養基則是給植物細胞提供養分的場所。培養基包括大量元素、微量元素、鐵鹽及螯合劑、糖和瓊脂。目前最常用的培養基是MS培養基，該培養基的配制需要添加無機營養元素、蔗糖、鐵鹽、瓊脂和超純水。需要分步配制母液，步驟繁瑣，費時費力。而商業化的MS培養基，則價格較貴，不利于大面積、規模化育苗使用。技術實現要素：本發明的目的是針對上技術中存在的問題，提供一種草莓培養基的制備方法，使用蚯蚓糞提取液替代基本MS培養基，有效的提高了草莓苗的生長勢，大大的降低了生產成本，簡化了配置流程，為大規模進行草莓幼苗培養提供了有利條件。本發明的目的是這樣實現的，包括用于草莓苗生長的培養基的蚯蚓糞提取液，其特征是，1.蚯蚓糞樣品風干后，將樣品磨碎，然后過2mm土壤篩，取2mm篩下樣品50g浸于125mL蒸餾水中，充分振蕩8小時，然后靜置12小時，通過4層紗布過濾并離心，制成蚯蚓糞水浸液原液，于4oC保存備用。2.所述含蚯蚓糞提取液的培養基包括蚯蚓糞提取液20%，蔗糖30g/L和瓊脂7g/L，PH值為5.8。3.蚯蚓糞提取液培養基的具體應用步驟是：步驟A：先用70%酒精浸泡草莓種子30s，除去液體；再用20%的次氯酸鈉浸泡種子20分鐘，期間每隔2分鐘震蕩一次，除去液體；再用滅菌水洗3次后，浸泡24h，浸泡后的種子，除去蒸餾水；再用70%的酒精洗30s，去除酒精，用滅菌水再洗2遍。步驟B：將步驟A處理的種子，播種于MS培養基中進行催芽，直到長出第三片葉，培養條件為溫度23~25oC，光照1800~2200lx，光照時間為16h/d。步驟C：將長出3片葉子的草莓苗，轉入含有20%蚯蚓糞提取液的培養基中培養4周，進行性狀調查。培養條件為溫度23~25oC，光照1800~2200lx，光照時間為16h/d。與現有技術相比，本發明的有益效果為：第一，利用蚯蚓糞提取液培養基取代MS培養基，能夠產生比MS培養基更好的效果，且大大的降低了生產成本。第二，提供了一種綠色環保、配制簡單的培養基制作方法，減少了在培養基配制過程中的時間消耗，為大規模組織培養提供了有利條件。第三，實現蚯蚓糞資源的高效利用，提高了蚯蚓糞的利用價值，且在生態環境上更加環保。附圖說明：圖1不同濃度蚯蚓糞提取液培養基中草莓幼苗的生長狀況圖2在MS培養基中添加不同濃度蚯蚓糞提取液后草莓幼苗的生長狀況。表1不同濃度蚯蚓糞提取液培養基中草莓幼苗的根長、葉柄長、葉面積、葉片數和株高。表2在MS培養基中添加不同濃度蚯蚓糞提取液后草莓幼苗的根長、葉柄長、葉面積、葉片數和株高。具體實施方式：下面結合實例對本發明做進一步說明由圖1可知，從左到右，0%Q，不含蚯蚓糞提取液培養基；20%Q，20%蚯蚓糞提取液培養基；40%Q，40%蚯蚓糞提取液培養基；60%Q，60%蚯蚓糞提取液培養基；80%Q，80%蚯蚓糞提取液培養基；100%Q，100%蚯蚓糞提取液培養基；其中20%蚯蚓糞提取液培養基草莓幼苗的生長狀況最好。由圖2可知，從左到右，20%Q，20%蚯蚓糞提取液培養基；MS,MS培養基；MS+20%Q，MS和20%蚯蚓糞提取液的混合培養基；MS+40%Q，MS和40%蚯蚓糞提取液的混合培養基；MS+60%Q，MS和60%蚯蚓糞提取液的混合培養基；MS+80%Q，MS和80%蚯蚓糞提取液的混合培養基；MS+100%Q，MS和100%蚯蚓糞提取液的混合培養基；比較分析發現，20%蚯蚓糞提取液培養基中的草莓幼苗比單獨的MS培養基及MS和不同濃度蚯蚓糞提取液混合培養基中的幼苗生長狀況都好。由表1可知，與其他濃度蚯蚓糞提取液培養基所生長的草莓幼苗相比，蚯蚓糞提取液20%的培養基中草莓幼苗的根長、葉柄長、葉面積、葉片數和株高都顯著提高。由表2可知，與MS培養基及MS和不同濃度蚯蚓糞提取液混合培養基所生長的草莓幼苗相比，蚯蚓糞提取液20%的培養基中的草莓幼苗在根長、葉柄長、葉面積、葉片數和株高都顯著提高。以下結合對比實例詳細說明本發明。對比實例是為更好的理解本發明，但不限定于本發明。以下實施方法中的實驗方法均為常規方法，所涉及的實驗試劑均為常規試劑。實例1不同濃度蚯蚓糞提取液培養基對草莓幼苗生長狀況的影響1、蚯蚓糞樣品風干后，將樣品磨碎，然后過2mm土壤篩，取2mm篩下樣品50g浸于125mL蒸餾水中，充分振蕩8小時，然后靜置12小時，通過4層紗布過濾并離心，上清液即為蚯蚓糞水浸液原液，于4oC保存備用。2、將原液分別按0、20%、40%、60%、80%、100%的體積比添加到蒸餾水中。每組處理除添加的提取液體積不同外，其余條件均相同，同時添加蔗糖30g/L和瓊脂7g/L，然后調節PH值為5.8。每個處理設置10次重復。3、蚯蚓糞提取液培養基的應用包括以下步驟：步驟A：先用70%酒精浸泡草莓種子30s，除去液體；再用20%的次氯酸鈉浸泡種子20分鐘，每隔2分鐘震蕩一次，除去液體；再用滅菌水洗3次后，浸泡24h，浸泡后的種子，除去蒸餾水；再用70%的酒精洗30s，去除酒精，用滅菌水再洗2遍。步驟B：將步驟A處理的種子，播種于MS培養基中進行催芽，直到長出第三片葉，培養條件為溫度23~25oC，光照1800~2200lx，光照時間為16h/d。步驟C：將長出3片葉子的草莓苗，轉入含有20%蚯蚓糞提取液的培養基中培養4周，進行性狀調查。培養條件為溫度23~25oC，光照1800~2200lx，光照時間為16h/d。一個月后進行性狀調查并拍照（如表1；圖1）。實例2蚯蚓糞提取液20%培養基與MS培養基及MS和不同濃度蚯蚓糞提取液混合培養基中的幼苗生長狀況的比較1、蚯蚓糞樣品風干后，將樣品磨碎，然后過2mm土壤篩，取2mm篩下樣品50g浸于125mL蒸餾水中，充分振蕩8小時，然后靜置12小時，4層紗布過濾并離心，上清液即為蚯蚓糞水浸液原液，于4oC保存備用。2、將原液分別按20%，40%，60%，80%，100%的比例添加到MS培養基中，比例是原液占培養基的比例，同時設置MS培養基和不添加蚯蚓糞提取液的培養基作為對照，共計7個處理，每個處理設置10次重復。調整培養基pH值為5.8。3、蚯蚓糞提取液培養基的應用包括以下步驟：步驟A：先用70%酒精浸泡草莓種子30s，除去液體；再用20%的次氯酸鈉浸泡種子20分鐘，每隔2分鐘震蕩一次，除去液體，再用滅菌水洗3次后，浸泡24h，浸泡后的種子，除去蒸餾水；再用70%的酒精洗30s，去除酒精，用滅菌水再洗2遍。步驟B：將步驟A處理的種子，播種于MS培養基中進行催芽，直到長出第三片葉，培養條件為溫度23~25oC，光照1800~2200lx，光照時間為16h/d。步驟C：將長出3片葉子的草莓苗，轉入含有20%蚯蚓糞提取液的培養基中培養4周，進行性狀調查。培養條件為溫度23~25oC，光照1800~2200lx，光照時間為16h/d。一個月后進行性狀調查并拍照（如表2；圖2）。表1處理根長/cm葉柄長/cm葉面積/mm2葉片數株高/cm04.06a1.49c28.00c4.75c1.63c20%Q3.28b4.79a74.00a7.25ab5.23a40%Q2.34c4.73a72.00a7.63a5.30a60%Q2.28c4.44a63.67a7.63a5.11a80%Q1.58d3.40b63.33a6.50b4.03b100%Q1.03d1.69c42.00b4.75c2.00c表2處理根長/cm葉柄長/cm葉面積/mm2葉片數株高/cmMS2.91ab3.28c64.80ab6.88abc4.08bMS+20%Q2.76abc3.89b75.75a7.75a4.74aMS+40%Q2.60bc3.28c46.00cd7.25ab3.90bMS+60%Q2.23c2.96cd56.67bc6.75bc3.56bMS+80%Q1.53d2.43d37.67de6.25c2.80cMS+100%Q1.33d1.70e26.33e6.88abc2.08d20%Q3.28a4.79a67.20ab7.25ab5.23a當前第1頁1 2 3