本發明涉及植物種子處理領域，具體而言，涉及一種促進紅花龍膽種子萌發的方法及其種苗。
背景技術：
紅花龍膽gentianarhodantha，又名龍膽草、土白連、九月花、星秀花、冷風吹或雪里梅，為龍膽科龍膽屬植物，生長于海拔570～1750米的高山灌叢、草地及林下，是《中華人民共和國藥典》2015年版新收載品種。紅花龍膽以根及全草入藥，味苦，性寒，歸肝、膽經，具有清熱利濕、消炎止咳，解毒之功效。中醫臨床常用于急性黃疸型肝炎，痢疾，小兒肺炎，支氣管炎，支氣管哮喘，肺結核，淋巴結結核，小便不利，眼結膜炎以及外用治癰癤瘡瘍，燒燙傷等病癥。
紅花龍膽為典型的高山植物，喜冷涼氣候，有較強的耐寒性；生長過程中對溫度要求不嚴格，但種子萌發時，必須有適宜的溫度和一定的光照條件，否則種子出芽率很低，已經嚴重限制了人們對這種優良資源的研究和利用。
目前對紅花龍膽種子萌發方面的研究鮮有人涉及，更沒有大面積人工種植紅花龍膽的先例。因此，為促進紅花龍膽資源的可持續利用、改善品質和紅花龍膽優良品種的推廣，進行紅花龍膽萌發方面的研究顯得十分的必要。
有鑒于此，特提出本發明。
技術實現要素：
本發明的第一目的在于提供一種促進紅花龍膽種子萌發的方法，所述紅花龍膽種子萌發方法通過用種子處理液在萌發前對種子進行浸種處理，可快速高效的破除紅花龍膽種子休眠并使其在10～20天中的萌發率比蒸餾水浸種萌發處理高出10～30％，且種子發芽整齊，節省了紅花龍膽種子育種的時間。
本發明的第二目的在于提供一種紅花龍膽種苗，該紅花龍膽種苗通過上述促進紅花龍膽種子萌發的方法制得，其出苗率高，出苗整齊度均勻。
本發明提供的一種促進紅花龍膽種子萌發的方法，所述方法包括如下步驟：
(1)配制種子處理液：配制硝酸鉀、氯化鈣或赤霉素溶液作為種子處理液；
(2)種子萌發前浸種處理：將紅花龍膽種子用紗布包裹，置于步驟(1)種子處理液中，在18～22℃的環境下浸種20～30小時，隨后放入3～5℃的環境下浸種10～15小時，然后棄浸種液，將種子清洗干凈，完成浸種處理；
(3)萌發出芽：將步驟(2)浸種處理后的種子放入鋪有濕潤濾紙的培養皿上，隨后放入培養箱中培養10～20天，并保持濾紙濕潤，得到發芽后的紅花龍膽種子。
進一步地，任選地進行步驟(4)萌發出苗：將步驟(2)浸種處理后的紅花龍膽種子與草木灰拌勻，均勻播種于苗床上進行萌發出苗90～120天，得到紅花龍膽種苗。
進一步地，上述步驟(1)中硝酸鉀溶液質量百分濃度為1％～5％；上述步驟(1)中氯化鈣溶液質量百分濃度為0.25％～2％；上述步驟(1)中赤霉素溶液質量體積濃度為50mg/l～800mg/l。
進一步地，上述步驟(2)種子清洗的方法為用蒸餾水沖洗4～5次，每次3～8分鐘。
進一步地，上述步驟(3)中培養箱為光照培養箱，上述光照培養箱的培養溫度為23～28℃，光照強度為2～4級，每12小時光照12小時黑暗交替。
進一步地，上述步驟(2)浸種處理后的紅花龍膽種子與草木灰的質量比為1:500～1000。
進一步地，上述步驟(2)浸種處理后的紅花龍膽種子播種前2～4天，用0.05～0.1％的高錳酸鉀溶液均勻潑灑于苗床，對土壤進行消毒，并在播種前2～3小時用清水澆透苗床。
進一步地，上述萌發出苗的環境要求為土壤含水量45～65％，地表空氣濕度60～70％，溫度20～25℃。
進一步地，上述促進紅花龍膽種子萌發的方法，所述方法具體包括如下步驟：
(1)配制種子處理液：配制硝酸鉀、氯化鈣或赤霉素溶液作為種子處理液；
所述硝酸鉀溶液質量百分濃度為1％、2％、3％、4％和5％；
所述氯化鈣溶液質量百分濃度為0.25％、0.5％、1％、1.5％和2％；
所述赤霉素溶液質量體積濃度為50mg/l、100mg/l、200mg/l、400mg/l和800mg/l；
(2)種子萌發前浸種處理：將紅花龍膽種子用2～3層紗布包裹，置于步驟(1)種子處理液中，在18～22℃的環境下浸種20～30小時，隨后放入3～5℃的環境下浸種10～15小時，然后棄浸種液，將種子用蒸餾水沖洗4～5次，每次3～8分鐘，完成浸種處理；
(3)萌發出芽：將步驟(2)浸種處理后的種子放入鋪有2～3層濕潤濾紙的培養皿上，隨后放入光照培養箱中，在溫度為23～28℃，光照強度為2～4級，每12小時光照12小時黑暗交替培養10～20天，并保持濾紙濕潤，得到發芽后的紅花龍膽種子；
任選地進行，
(4)萌發出苗：將步驟(2)浸種處理后的紅花龍膽種子與草木灰以1:500～1000的質量比拌勻，均勻播種于苗床上進行萌發出苗90～120天，萌發出苗的環境要求為土壤含水量45～65％，地表空氣濕度60～70％，溫度20～25℃，得到紅花龍膽種苗。
本發明提供的一種紅花龍膽種苗，所述紅花龍膽種苗由上述的促進紅花龍膽種子萌發的方法制得。
與現有技術相比，本發明的有益效果為：
(1)本發明提供的促進紅花龍膽種子萌發的方法，上述種子萌發方法通過將硝酸鉀、氯化鈣或赤霉素溶液作為種子處理液，在種子萌發前進行浸種處理，首先在18～22℃的環境下浸種20～30小時，隨后放入3～5℃的環境下浸種10～15小時，然后在培養箱中進行每12小時光照12小時黑暗交替的恒溫培養，得到的紅花龍膽種子的發芽率十分理想，種子的發芽率比應用蒸餾水浸種進行萌發的方法高出20～30％，解決了紅花龍膽作為高山植物，在其種子萌發時，不能快速高效的破除紅花龍膽種子休眠，以及在萌發培養過程中環境溫度，光照等條件不易控制，導致種子的發芽率很低，育種時間長等問題，并最終為促進紅花龍膽資源的可持續利用提供了基礎。
(2)本發明提供的紅花龍膽種苗，該紅花龍膽種苗通過上述促進紅花龍膽種子萌發的方法制得，其出苗率明顯高于用蒸餾水萌發后進行出苗的種子的出苗率，且種子出苗整齊。
具體實施方式
下面將結合實施例對本發明的實施方案進行詳細描述，但是本領域技術人員將會理解，下列實施例僅用于說明本發明，而不應視為限制本發明的范圍。實施例中未注明具體條件者，按照常規條件或制造商建議的條件進行。所用試劑或儀器未注明生產廠商者，均為可以通過市售購買獲得的常規產品。
根據本發明的一個方面一種促進紅花龍膽種子萌發的方法，所述方法包括如下步驟：
(1)配制種子處理液：配制硝酸鉀、氯化鈣或赤霉素溶液作為種子處理液；
(2)種子萌發前浸種處理：將紅花龍膽種子用2～3層紗布包裹，置于步驟(1)種子處理液中，在18～22℃的環境下浸種20～30小時，隨后放入3～5℃的環境下浸種10～15小時，然后棄浸種液，將種子清洗干凈，完成浸種處理；
(3)萌發培養：將步驟(2)浸種處理后的種子放入鋪有濕潤濾紙的培養皿上，隨后放入培養箱中培養10～20天，并保持濾紙濕潤，得到發芽后的紅花龍膽種子。
本發明中，上述硝酸鉀屬于二元復合肥。其植物營養素鉀、氮的總含量可達50％左右，具有良好的物理化學性質。在本發明紅花龍膽種子萌發過程中應用特定濃度的硝酸鉀溶液對種子進行處理具有打破休眠，提高種子活力，提高出苗率的作用。硝酸鉀中的k+作為多種酶(如nad激酶、atp酶等)的激活劑，可以在一定程度上提高或促進多種酶的活性，也使細胞膜得到部分修復，還可參與誘導植物體內促性激素的生物合成及其活力調控，從而使紅花龍膽種子生活力提高，促進發芽。
本發明中，上述氯化鈣作為細胞的結構成分，參與并維持生物體的代謝活動，維持生物體內的酸堿平衡，維持細胞的滲透壓，尤其對于植物吸收養分有重要作用。氯化鈣中的鈣離子既是一種營養元素，而且還是偶聯胞外信號與胞內生理生化反應的第二信使，對植物的生長發育有重要的調控作用。
本發明中，上述赤霉素作為一種植物激素被應用于紅花龍膽種子的萌發，赤霉素可以提高植物體內生長素的含量，進而加速細胞的伸長，對細胞的分裂也有促進作用，它可以促進細胞的擴大，除此之外，赤霉素還有著抑制側芽休眠作用。
本發明中，上述紅花龍膽種子為經過篩選的完整、無損傷的淡褐色成熟種子，上述紅花龍膽種子均為選取長2.275～1.550mm，寬1.900～1.125mm，種子長寬比1.444～1.000，每千粒種子重為0.1296～0.1248g的種子。
在本發明的一種優選實施方式中，任選地進行步驟(4)萌發出苗：將步驟(2)浸種處理后的紅花龍膽種子與草木灰拌勻，均勻播種于苗床上進行萌發出苗90～120天，得到紅花龍膽種苗。
在本發明的一種優選實施方式中，上述步驟(1)中硝酸鉀溶液質量百分濃度為1％～5％；上述步驟(1)中氯化鈣溶液質量百分濃度為0.25％～2％；上述步驟(1)中赤霉素溶液質量體積濃度為50mg/l～800mg/l。
本發明中，通過對上述硝酸鉀、氯化鈣和赤霉素溶液的濃度比例的進一步調整和優化，從而進一步優化了本發明紅花龍膽種子萌發的效果。
在本發明的一種優選實施方式中，上述步驟(2)種子清洗的方法為用蒸餾水沖洗4～5次，每次3～8分鐘。
在本發明的一種優選實施方式中，上述步驟(3)中培養箱為光照培養箱，光照培養箱的培養溫度為23～28℃，光照強度為2～4級，每12小時光照12小時黑暗交替。
在本發明的一種優選實施方式中，上述步驟(2)浸種處理后的紅花龍膽種子與草木灰的質量比為1:500～1000。
在本發明的一種優選實施方式中，上述步驟(2)浸種處理后的紅花龍膽種子播種前2～4天，用0.05～0.1％的高錳酸鉀溶液均勻潑灑于苗床，對土壤進行消毒，并在播種前2～3小時用清水澆透苗床。
上述在萌發出苗前用高錳酸鉀溶液對苗床進行消毒，可以有效殺死土壤里的病菌，使紅花龍膽更好的出苗生長，避免苗期病蟲害的發生。
在本發明的一種優選實施方式中，上述萌發出苗的環境要求為土壤含水量45～65％，地表空氣濕度60～70％，溫度20～25℃。
本發明萌發出苗的培養過程中，根據土壤濕度、溫度、天氣情況適時對苗床澆水，保持土壤濕潤，一般晴天每天一次，陰天2～3天一次，雨天不澆水，定期清除雜草、防蟲，定時觀察、記錄。
在上述優選實施方式中，在苗床上搭建一個遮陽網，遮陽網的遮蔭度為60％～70％。
在本發明的一種優選實施方式中，所述方法具體包括如下步驟：
(1)配制種子處理液：配制硝酸鉀、氯化鈣或赤霉素溶液作為種子處理液；
所述硝酸鉀溶液質量百分濃度為1％、2％、3％、4％和5％；
所述氯化鈣溶液質量百分濃度為0.25％、0.5％、1％、1.5％和2％；
所述赤霉素溶液質量體積濃度為50mg/l、100mg/l、200mg/l、400mg/l和800mg/l；
(2)種子萌發前浸種處理：將紅花龍膽種子用2～3層紗布包裹，置于步驟(1)種子處理液中，在18～22℃的環境下浸種20～30小時，隨后放入3～5℃的環境下浸種10～15小時，然后棄浸種液，將種子用蒸餾水沖洗4～5次，每次3～8分鐘，完成浸種處理；
(3)萌發培養：將步驟(2)浸種處理后的種子放入鋪有2～3層濕潤濾紙的培養皿上，隨后放入光照培養箱中，在溫度為23～28℃，光照強度為2～4級，每12小時光照12小時黑暗交替培養10～20天，并保持濾紙濕潤，得到發芽后的紅花龍膽種子；
任選地進行，
(4)萌發出苗：將步驟(2)浸種處理后的紅花龍膽種子與草木灰以1:500～1000的質量比拌勻，均勻播種于苗床上進行萌發出苗90～120天，萌發出苗的環境要求為土壤含水量45～65％，地表空氣濕度60～70％，溫度20～25℃，得到紅花龍膽種苗。
在上述優選實施方式中，優選地，所述方法具體包括如下步驟：
(1)配制種子處理液：配制硝酸鉀、氯化鈣或赤霉素溶液作為種子處理液；
所述硝酸鉀溶液質量百分濃度為1％、2％、3％、4％、5％；
所述氯化鈣溶液質量百分濃度為0.25％、0.5％、1％、1.5％和2％；
所述赤霉素溶液質量體積濃度為50mg/l、100mg/l、200mg/l、400mg/l和800mg/l；
(2)種子萌發前浸種處理：將紅花龍膽種子用2層紗布包裹，置于步驟(1)種子處理液中，在20℃的環境下浸種24小時，隨后放入4℃的環境下浸種12小時，然后棄浸種液，將種子用蒸餾水沖洗4次，每次5分鐘，完成浸種處理；
(3)萌發培養：將步驟(2)浸種處理后的種子放入鋪有2層濕潤濾紙的培養皿上，隨后放入光照培養箱中，在溫度為25℃，光照強度為3級，每12小時光照12小時黑暗交替培養18天，并保持濾紙濕潤，得到發芽后的紅花龍膽種子；
任選地進行，
(4)萌發出苗：將步驟(2)浸種處理后的紅花龍膽種子與草木灰以1:500～1000的質量比拌勻，均勻播種于苗床上進行萌發出苗90～120天，萌發出苗的環境要求為土壤含水量45～65％，地表空氣濕度60～70％，溫度20～25℃，得到紅花龍膽種苗。
根據本發明的一個方面，一種紅花龍膽種苗，所述紅花龍膽種苗由上述的促進紅花龍膽種子萌發的方法制得。
實施例1
一種促進紅花龍膽種子萌發的方法，所述方法包括如下步驟：
(1)選取450粒紅花龍膽種子，分為三組，每組150粒紅花龍膽種子，隨后各用2層紗布包裹，分別置于濃度為1％、2％和3％的硝酸鉀種子處理液中，其中，
第一組置于1％的硝酸鉀種子處理液中；
第二組置于2％的硝酸鉀種子處理液中；
第三組置于3％的硝酸鉀種子處理液中；
然后將三組種子在20℃的環境下浸種24小時，隨后放入4℃的環境下浸種12小時，棄浸種液；
(2)將棄浸種液后的三組種子用蒸餾水沖洗4次，每次5分鐘，完成浸種處理；
(3)將上述三組步驟(2)浸種處理后的種子分別放入鋪有2層濕潤濾紙的培養皿上，隨后放入培養箱中培養20天，并保持濾紙濕潤，得到發芽后的紅花龍膽種子；
(4)在上述步驟(3)培養箱培養過程中，對種子出芽期內連續觀測，并分別對三組種子的發芽數進行統計，計算出紅花龍膽種子發芽率、發芽勢和發芽指數。
實施例2
一種促進紅花龍膽種子萌發的方法，所述方法包括如下步驟：
(1)選取750粒紅花龍膽種子，分為五組，每組150粒紅花龍膽種子，隨后各用2層紗布包裹，分別置于濃度為0.25％、0.5％、1％、1.5％和2％的氯化鈣種子處理液中，其中，
第一組置于0.25％的氯化鈣種子處理液中；
第二組置于0.5％的氯化鈣種子處理液中；
第三組置于1％的氯化鈣種子處理液中；
第四組置于1.5％的氯化鈣種子處理液中；
第五組置于2％的氯化鈣種子處理液中，
然后將五組種子在20℃環境下浸種24小時，隨后放入4℃的環境下浸種12小時，然后棄浸種液；
(2)將棄浸種液后的五組種子用蒸餾水沖洗4次，每次5分鐘，完成浸種處理；
(3)將上述五組步驟(2)浸種處理后的種子分別放入鋪有2層濕潤濾紙的培養皿上，隨后放入培養箱中培養20天，并保持濾紙濕潤，得到發芽后的紅花龍膽種子；
(4)在上述步驟(3)培養箱培養過程中，對種子出芽期內連續觀測，并分別對五組種子的發芽數進行統計，計算出紅花龍膽種子發芽率、發芽勢和發芽指數。
實施例3
一種促進紅花龍膽種子萌發的方法，所述方法包括如下步驟：
(1)選取750粒紅花龍膽種子，分為五組，每組150粒紅花龍膽種子，隨后各用2層紗布包裹，分別置于濃度為50mg/l、100mg/l、200mg/l、400mg/l和800mg/l的赤霉素種子處理液中，其中，
第一組置于50mg/l的赤霉素種子處理液；
第二組置于100mg/l的赤霉素種子處理液中；
第三組置于200mg/l的赤霉素種子處理液中；
第四組置于400mg/l的赤霉素種子處理液中；
第五組置于800mg/l的赤霉素種子處理液中，
然后將五組種子在20℃環境下浸種24小時，隨后放入4℃的環境下浸種12小時，然后棄浸種液；
(2)將棄浸種液后的五組種子用蒸餾水沖洗4次，每次5分鐘，完成浸種處理；
(3)將上述五組步驟(2)浸種處理后的種子分別放入鋪有2層濕潤濾紙的培養皿上，隨后放入培養箱中培養20天，并保持濾紙濕潤，得到發芽后的紅花龍膽種子；
(4)在上述步驟(3)培養箱培養過程中，對種子出芽期內連續觀測，并分別對五組種子的發芽數進行統計，計算出紅花龍膽種子發芽率、發芽勢和發芽指數。
對比例1
一種促進紅花龍膽種子萌發的方法，所述方法包括如下步驟：
(1)取150粒紅花龍膽種子，隨后用2層紗布包裹，置于蒸餾水中，在20℃環境下浸種24小時，隨后放入4℃的環境下浸種12小時，然后棄浸種液；
(2)將棄浸種液后的種子用蒸餾水沖洗4次，每次5分鐘，完成浸種處理；
(3)將上述步驟(2)浸種處理后的種子放入鋪有2層濕潤濾紙的培養皿上，隨后放入培養箱中培養20天，并保持濾紙濕潤，得到發芽后的紅花龍膽種子；
(4)在上述步驟(3)培養箱培養過程中，對種子出芽期內連續觀測，并對發芽數進行統計，計算出紅花龍膽種子發芽率、發芽勢和發芽指數。
效果例1
為表明本發明促進紅花龍膽種子萌發的方法具有快速高效的破除紅花龍膽種子休眠，提高種子發芽率，縮短種子育種時間的技術效果。
特選擇實施例1～3與對比例1，針對其種子萌發后的發芽率、發芽勢、發芽指數、發芽時滯和發芽歷時對使用不同試劑濃度浸種的實施方式進行萌發對比評價，試驗結果如下表1所示：
表1：不同試劑濃度浸種對紅花龍膽種子萌發的影響
效果評價：
由上述表1可知，經過萌發前種子處理液處理過的種子其發芽率明顯高于對比例1中未經種子處理液處理的種子，其中，濃度為1％的硝酸鉀溶液處理后的種子發芽率為72.67％，比對比例1高出20.67％，濃度為100mg/l的赤霉素浸溶液處理后的種子發芽率為82％，比對比例1提高了30％。
實施例4
選擇4月中下旬一天，在肥沃松軟、透氣性與保水性好的土壤上進行種子播種，播種前3天將土壤深翻25cm，開廂挖溝，廂長10m，寬1m，溝深20cm，并用0.1％高錳酸鉀溶液均勻潑灑于苗床消毒土壤，播種前2小時用清水澆透苗床；
使用實施例1的方法浸種處理后的三組紅花龍膽種子分別與草木灰按1:500的混合比例拌勻，均勻播撒于苗床上，種子播種量為50g/畝。萌發出苗的環境要求為土壤含水量為50％，地表空氣濕度為60％，溫度為20℃，并搭建遮陽網，遮陽網的遮蔭度為70％。根據土壤濕度、溫度、天氣情況適時澆水，保持土壤濕潤，進行為期100天的出苗實驗。定期清除雜草、防蟲，定時觀察、記錄。
實施例5
選擇4月中下旬一天，在肥沃松軟、透氣性與保水性好的土壤上進行種子播種，播種前3天將土壤深翻25cm，開廂挖溝，廂長10m，寬1m，溝深20cm，并用0.1％高錳酸鉀溶液均勻潑灑于苗床消毒土壤，播種前2小時用清水澆透苗床；
使用實施例3的方法浸種處理后的第二組、第三組和第四組紅花龍膽種子分別與草木灰按1:500的混合比例拌勻，均勻播撒于苗床上，種子播種量為50g/畝。萌發出苗的環境要求為土壤含水量為50％，地表空氣濕度為60％，溫度為20℃，并搭建遮陽網，遮陽網的遮蔭度為70％。根據土壤濕度、溫度、天氣情況適時澆水，保持土壤濕潤，進行為期100天的出苗實驗。定期清除雜草、防蟲，定時觀察、記錄。
對比例2
選擇4月中下旬一天，在肥沃松軟、透氣性與保水性好的土壤上進行種子播種，播種前3天將土壤深翻25cm，開廂挖溝，廂長10m，寬1m，溝深20cm，并用0.1％高錳酸鉀溶液均勻潑灑于苗床消毒土壤，播種前2小時用清水澆透苗床；
使用對比例1的方法浸種處理后的紅花龍膽種子與草木灰按1:500的混合比例拌勻，均勻播撒于苗床上，種子播種量為50g/畝。萌發出苗的環境要求為土壤含水量為50％，地表空氣濕度為60％，溫度為20℃，并搭建遮陽網，遮陽網的遮蔭度為70％。根據土壤濕度、溫度、天氣情況適時澆水，保持土壤濕潤，進行為期100天的出苗實驗。定期清除雜草、防蟲，定時觀察、記錄。
效果例2
為表明本發明促進紅花龍膽種子萌發的方法具有快速高效的破除紅花龍膽種子休眠，提高種子發芽率，并可以提高已發芽種子出苗率的技術效果。
特選擇實施例4和實施例5的出苗方法與對比例2的出苗方法，針對地面出苗實驗的出苗數和出苗率進行出苗對比評價，試驗結果如下表2所示：
表2：地面出苗率實驗結果
效果評價：
由上述表2可知，使用本發明促進紅花龍膽種子萌發的方法得到的發芽后的種子，其出苗率明顯高于對比例2中未經本方法處理的種子，其中，濃度為1％的硝酸鉀溶液處理后的種子出苗數為183，比對比例2的73株，高出110株，濃度為100mg/l的赤霉素溶液處理后的種子出苗率為136株，比對比例2的73株，高出63株。由上述結果可知，使用本發明促進紅花龍膽種子萌發的方法得到的發芽后的種子，其出苗率明顯高于未經本發明方法處理的種子。
盡管已用具體實施例來說明和描述了本發明，然而應意識到，在不背離本發明的精神和范圍的情況下可以作出許多其它的更改和修改。因此，這意味著在所附權利要求中包括屬于本發明范圍內的所有這些變化和修改。