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愈傷組織誘導培養基及其制備方法、使用方法與流程

文檔序號:12199670閱讀:來源:國知局

技術特征:

1.第一愈傷組織誘導培養基,其特征在于:培養基原料包括6-芐氨基腺嘌呤、萘乙酸、噻苯隆、2,4-二氯苯氧乙酸、蔗糖、瓊脂粉,以及第一基礎培養基MS培養基;

第一基礎培養基MS培養基pH值為5.5-5.8;

第一基礎培養基MS培養基以MS培養基為基礎,在其它成分不變的條件下調整大量元素的含量為原量的1/4,微量元素為原量的1/2,調整肌醇、鹽酸硫胺素、鹽酸吡哆醇和煙酸的含量分別為:1~5mg/L、3~6mg/L、0.5~2mg/L、0.5~3mg/L,并添加精氨酸50mg/L、天冬氨酸100mg/L、谷氨酸150mg/L。

2.如權利要求1所述的第一愈傷組織誘導培養基,其特征在于:所述6-芐氨基腺嘌呤的濃度為2.0mg/L、萘乙酸的濃度為0.2mg/L、蔗糖20-30g/L、瓊脂粉7g/L、噻苯隆0.1mg/L、2,4-二氯苯氧乙酸0.05mg/L。

3.如權利要求1所述的第一愈傷組織誘導培養基的制備方法,其特征在于:包括以下步驟:

步驟一:將6-芐氨基腺嘌呤、萘乙酸、蔗糖、、噻苯隆、2,4-二氯苯氧乙酸、瓊脂粉分別滅菌,3-5℃保存備用;

步驟二:第一基礎培養基MS培養基溶解,加入6-芐氨基腺嘌呤、萘乙酸、蔗糖、噻苯隆、2,4-二氯苯氧乙酸、瓊脂粉溶液,制得愈傷組織誘導培養基;

步驟三:將定容好的的培養基PH調到5.5-5.8。

步驟四:將配制好的培養基進行高溫滅菌,制得第一愈傷組織誘導培養基。

4.如權利要求3所述的愈傷組織誘導培養基的制備方法,其特征在于:所述步驟一中的滅菌方法為抽濾滅菌或高溫滅菌;滅菌完成后20-25℃放置。

5.如權利要求3所述的愈傷組織誘導培養基的制備方法,其特征在于:所述步驟三中高溫滅菌的溫度為121℃,滅菌時間為30min。

6.第二愈傷組織誘導培養基,其特征在于:培養基原料包括6-芐氨基腺嘌呤、6-糠基氨基嘌呤、萘乙酸、吲哚丁酸、水解酪蛋白、蔗糖、瓊脂粉,以及第二基礎培養基MS培養基;

第二基礎培養基MS培養基pH值為5.5-5.8;

第二基礎培養基MS培養基是以MS培養基為基礎,在其它成分不變的條件下調整大量元素的含量為原量的1/2,調整肌醇、鹽酸硫胺素、鹽酸吡哆醇和煙酸的含量分別為:1~5mg/L、3~6mg/L、0.5~2mg/L、0.5~3mg/L,并添加精氨酸100mg/L、天冬氨酸50mg/L、谷氨酸200mg/L。

7.如權利要求6所述的第二愈傷組織誘導培養基,其特征在于:所述6-芐氨基腺嘌呤的濃度為3.0mg/L、6-糠基氨基嘌呤0.1mg/L、吲哚丁酸的濃度為0.1mg/L、蔗糖20-30g/L、萘乙酸0.2mg/L、瓊脂粉7g/L。

8.一種愈傷組織誘導培養基的使用方法:將綠蘿莖段消毒后在無菌條件下切割成小段,將其接種于愈傷組織誘導培養基中誘導形成愈傷組織后接種于愈傷組織的繼代培養基中增殖獲得致密愈傷組織。

9.根據權利要求8所述的愈傷組織誘導培養基的使用方法,其特征在于,所述誘導增殖的步驟包括:

步驟一:利用第一愈傷組織誘導培養基在溫度為23~25℃、濕度為50~65%的條件下,黑暗培養5~15天后給予1500~20001x光照繼續培養,15~25天得到初期綠蘿愈傷組織;

步驟二:將初期綠蘿愈傷組織轉接于第二愈傷組織誘導培養基在溫度為25~28℃、濕度為50~65%條件下,暗培養一周后給予光照條件20001x,繼續培養,加速愈傷組織的形成。

10.根據權利要求8所述的愈傷組織誘導培養基的使用方法,其特征在于,所述綠蘿莖段消毒后在無菌條件下切割成小段;小段的長度為2~3cm;常規消毒后用可溶性聚乙烯吡硌烷酮2g/L浸泡10~15分鐘。

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