1.一種誘導(dǎo)重樓未成熟合子胚產(chǎn)生體細(xì)胞胚的組織培養(yǎng)方法,其特征在于,步驟包括:
1)取樣及消毒:每年的8-9月,將帶肉質(zhì)種皮的重樓種子去掉附著的纖維組織后流水清洗后自來(lái)水浸泡24小時(shí),在無(wú)菌條件下經(jīng)0.1%濃度HgCl2消毒5min后,無(wú)菌水清洗10次;
2)未成熟合子胚剝離:無(wú)菌條件下將已消毒的種子剝離掉肉質(zhì)種皮,體式解剖顯微鏡下用組培鑷子固定住剝?nèi)シN皮的胚乳,用手術(shù)刀片縱切胚乳;
3)體細(xì)胞胚誘導(dǎo):將剝離的未成熟胚接種于pH為5.8的培養(yǎng)基上,20±1℃下持續(xù)暗光培養(yǎng);
4)胚性組織培養(yǎng)體系建立:培養(yǎng)6個(gè)月后,誘導(dǎo)成功的體細(xì)胞胚生長(zhǎng)至紡錘形后未成熟胚剝離并置于新的誘導(dǎo)培養(yǎng)基上繼續(xù)培養(yǎng)使其獲得90%誘導(dǎo)成功率的重樓體細(xì)胞胚。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述誘導(dǎo)重樓未成熟合子胚產(chǎn)生體細(xì)胞胚的組織培養(yǎng)方法,其特征在于,所述培養(yǎng)基為1/2MS、瓊脂粉濃度為7.5g/L、蔗糖濃度為30g/L。