1.胚胎玻璃化冷凍器,其特征在于:包括殼體(1)、拉桿(2)、壓桿(3)、拉桿活塞(4)、壓桿活塞(5)、彈簧(6)、冷凍液吸管(14)及胚胎針(10);所述殼體(1)內腔的上半部被分隔形成了相互獨立的壓縮腔Ⅰ(91)和壓縮腔Ⅱ(92),殼體(1)內腔的下半部為廢液腔(93),所述壓縮腔Ⅰ(91)和壓縮腔Ⅱ(92)均與廢液腔(93)相連通;
所述殼體(1)頂端設置有兩個各自連通壓縮腔Ⅰ(91)、壓縮腔Ⅱ(92)的開口;
位于壓縮腔Ⅰ(91)內的拉桿活塞(4)與壓縮腔Ⅰ(91)的內側壁密封的滑動相連,拉桿(2)的底部穿過連通壓縮腔Ⅰ(91)的開口后與拉桿活塞(4)固定相連;在壓縮腔Ⅰ(91)的上下端分別設置用于限定拉桿活塞(4)滑動位置的拉桿活塞上限限定環(7)、拉桿活塞下限限定環(11);
位于壓縮腔Ⅱ(92)內的壓桿活塞(5)與壓縮腔Ⅱ(92)的內側壁密封的滑動相連,壓桿(3)的底部穿過連通壓縮腔Ⅱ(92)的開口后與壓桿活塞(5)固定相連;在壓縮腔Ⅱ(92)的上下端分別設置用于限定壓桿活塞(5)滑動位置的壓桿活塞上限限定環(8)和彈簧固定環(12),在壓桿活塞(5)和彈簧固定環(12)之間設置彈簧(6),
所述殼體(1)側壁上設置有連通廢液腔(93)頂部的冷凍液吸管(14);所述冷凍液吸管(14)下端設置有冷凍腔(15),胚胎針(10)的端部位于冷凍腔(15)內。
2.根據權利要求1所述的胚胎玻璃化冷凍器,其特征在于:所述胚胎針(10)包括均中空且上下相連通的胚胎針上段(101)和胚胎針下段(102),胚胎針上段(101)的頂部伸入冷凍腔(15)內;
所述胚胎針上段(101)的頂部為網狀半球形,網孔的孔徑小于胚胎的直徑;
胚胎針下段(102)的下端為開口端。
3.根據權利要求2所述的胚胎玻璃化冷凍器,其特征在于:
所述胚胎針上段(101)與胚胎針下段(102)的夾角為145~155°。
4.根據權利要求2或3所述的胚胎玻璃化冷凍器,其特征在于:所述拉桿(2)頂端設置有拉板(21),拉板(21)的尺寸大于連通壓縮腔Ⅰ(91)的開口的尺寸,所述拉板(21)位于壓縮腔Ⅰ(91)的上方;
壓桿(3)頂端設置有壓板(31),壓板(31)的尺寸大于連通壓縮腔Ⅱ(92)的開口的尺寸,所述壓板(31)位于壓縮腔Ⅱ(92)的上方。
5.根據權利要求2或3所述的胚胎玻璃化冷凍器,其特征在于:所述壓縮腔Ⅰ(91)的容積大于壓縮腔Ⅱ(92)的容積。
6.根據權利要求5所述的胚胎玻璃化冷凍器,其特征在于:所述壓縮腔Ⅰ(91)的橫截面大于壓縮腔Ⅱ(92)的橫截面。
7.根據權利要求2或3所述的胚胎玻璃化冷凍器,其特征在于:所述殼體(1)的外表面設置有平衡液刻度線(16)。
8.根據權利要求2或3所述的胚胎玻璃化冷凍器,其特征在于:所述冷凍腔(15)為球狀空腔。
9.胚胎玻璃化冷凍器的使用方法,其特征在于包括以下步驟:
1)、先向下按動拉板(21),使拉桿(2)在壓縮腔Ⅰ(91)中向下移動,直至拉桿活塞(4)與拉桿活塞下限限定環(11)相接觸為止;然后向下按動壓板(31),壓桿(3)在壓縮腔Ⅱ(92)中向下移動,壓桿活塞(5)壓縮彈簧(6),直至彈簧(6)被壓縮至極限為止;殼體(1)內的空氣被壓縮后通過冷凍液吸管(14)、再經胚胎針(10)排出殼體(1)外;
先將胚胎針下段(102)開口端置入含有胚胎的培養液中,之后松開壓板(31),壓桿(3)在彈簧(6)彈力的作用下復原,使殼體(1)內的壓力小于環境壓力,產生的吸力吸取含有胚胎的培養液;含有胚胎的培養液依次經過胚胎針下段(102)、胚胎針上段(101)進入位于冷凍腔(15)內的胚胎針上段(101)的頂部;胚胎被截留在胚胎針上段(101)的頂部;培養液先通過胚胎針上段(101)頂部的網孔進入冷凍腔(15)內,再沿著冷凍液吸管(14)流入廢液腔(93)內;
2)、將胚胎針下段(102)開口端置入平衡液中,向上拉動拉板(21),使拉桿(2)在壓縮腔Ⅰ(91)中向上移動,在殼體(1)內外空氣壓差的作用下胚胎針下段(102)開口端吸取平衡液,平衡液依次經過胚胎針下段(102)、胚胎針上段(101)、胚胎針上段(101)頂部的網孔進入冷凍腔(15)從而實現培養液的被置換;當于拉桿(2)的作用下拉桿活塞(4)被拉升至底端與平衡液刻度線(16)平行時,保持6~10分鐘然后進行下述步驟3);
3)、將胚胎針下段(102)開口端置入冷凍液中,往上繼續拉動拉板(21),直至拉桿活塞(4)與拉桿活塞上限限定環(7)相接觸為止,在殼體(1)內外空氣壓差的作用下胚胎針下段(102)開口端吸取冷凍液;冷凍液依次經過胚胎針下段(102)、胚胎針上段(101)、胚胎針上段(101)頂部的網孔進入冷凍腔(15)從而實現平衡液的被置換;保持30±3秒然后進行下述的步驟4)
4)、向下按動壓板(31),壓桿(3)在壓縮腔Ⅱ(92)中向下移動,在殼體(1)內外空氣壓差的作用下,殼體(1)內的氣體將位于胚胎針上段(101)頂部內的胚胎從胚胎針(10)中排出至載桿的胚胎載片上。
10.根據權利要求9所述的胚胎玻璃化冷凍器的使用方法,其特征在于:
當在拉桿(2)的作用下拉桿活塞(4)被拉升至底端與平衡液刻度線(16)平行時,從胚胎針下段(102)開口端吸入的平衡液為200μL;
當拉桿活塞(4)被繼續拉升至與拉桿活塞上限限定環(7)相接觸時,從胚胎針下段(102)開口端吸入的冷凍液為200μL。