一種馬屬動物胚胎切割操作液配制方法和應用的制作方法
【專利摘要】本發明公開了一種馬屬動物胚胎切割操作液配制方法和應用，其中，胚胎切割操作液包括乳酸鈉混合液、青霉素、鏈霉素，以及牛血清白蛋白、犢牛血清和滅活馬血清中的一種、兩種或三種；其配制方法包括：將乳酸鈉混合液置于37℃的恒溫箱中0.5-6小時后，備用，按照組分含量向乳酸鈉混合液中加入青霉素、鏈霉素以及牛血清白蛋白、犢牛血清和滅活馬血清中的一種或兩種或三種，即得到胚胎切割操作液。適用于馬、牛、驢的非手術法胚胎移植技術。本發明的有益效果是：具有取材方便、價格低廉、配制簡單、使用方便等優點，非常適用于馬屬動物非手術法胚胎移植的規?；a，有利于胚胎移植技術的推廣應用。
【專利說明】一種馬屬動物胚胎切割操作液配制方法和應用
【技術領域】
[0001]本發明屬于動物胚胎移植領域，特別是涉及一種馬屬動物胚胎切割操作液及其配制方法和應用。
【背景技術】
[0002]胚胎分割技術(Embryo bisection)是借助顯微操作技術或徒手操作方法切割早期胚胎成二、四等多等份再移植給受體母畜，從而獲得同卵雙胎或多胎的生物學新技術。來自同一胚胎的后代有相同的遺傳物質，因此胚胎分割可看成動物無性繁殖或克隆的方法之
[0003]胚胎分割操作液是用于獲取胚胎后進行胚胎分割操作時營養保護性液體。胚胎分割操作液多數為組織培養液，目前國內常用的胚胎切割操作液主要有杜氏磷酸鹽緩沖液(D-PBS)、布林斯特氏液、合成輸卵管液(S0F)、惠屯氏液、Ham’s F-110以及TCM-199。上述幾種液體均存在藥品來源困難，價格昂貴，配制步驟繁瑣且需現用現配等問題，為胚胎移植的規模化生產帶來極大的不便。
[0004]
【發明內容】

為了解決傳統的胚胎分割操作液藥品來源困難、價格昂貴、配制步驟繁瑣且需現用現配等問題，本發明提供了一種適用于規模化生產的馬屬動物非手術法胚胎移植用胚胎切割操作液及其配制方法和應用。
[0005]為了實現上述發明目的，本發明提供了一種馬屬動物胚胎分割操作液，所述胚胎切割操作液包括乳酸鈉混合液、青霉素、鏈霉素，以及牛血清白蛋白或犢牛血清或滅活馬血清中的一種、兩種或三種。
[0006]所述乳酸鈉混合液包括乳酸鈉、氯化鈉、氯化鉀、氯化鈣、氯化鎂和黃芪多糖中的一種或多種。
[0007]所述胚胎切割操作液中各組分的含量為:每1000ml乳酸鈉混合液中含有青霉素30-180萬單位、鏈霉素20-200萬單位，以及牛血清白蛋白0.05%-1.5%、犢牛血清0.5%-15%和/或滅活馬血清0.5%-14%。其中，所述血清白蛋白、所述犢牛血清以及所述滅活馬血清的百分比為體積百分比。
[0008]所述胚胎分割操作液中各組分的含量為:每1000ml乳酸鈉混合液中含有青霉素50-150萬單位、鏈霉素50-150萬單位，以及牛血清白蛋白0.1%-0.9%、犢牛血清1%_10%和/或滅活馬血清1%-10%。其中，所述血清白蛋白、所述犢牛血清以及所述滅活馬血清的百分比為體積百分比。
[0009]所述乳酸鈉混合液中各組分的含量為:每1000ml混合液中含有乳酸鈉l_7g、氯化鈉l_5g、氯化鉀2-7g、氯化鈣0.5-2g、氯化鎂0.05-0.5g和黃芪多糖0.01-0.3g。
[0010]所述乳酸鈉混合液中各組分的含量優選為?每1000ml混合液中含有乳酸鈉3_7g、氯化鈉2-5g、氯化鉀3-7g、氯化鈣0.5-1.5g、氯化鎂0.1-0.4g和黃芪多糖0.01-0.lg。
[0011]所述乳酸鈉混合液中各組分的含量還可以優選為:每1000ml混合液中含有乳酸鈉5.4g、氯化鈉3.2g、氯化鉀4.6g、氯化鈣1.lg、氯化鎂0.32g和黃芪多糖0.08g。
[0012]為了更好的實現上述發明目的，本發明還提供了一種馬屬動物胚胎切割操作液的配制方法，包括:
(1)按照各組分的含量稱取乳酸鈉、氯化鈉、氯化鉀、氯化鈣和氯化鎂，并加入蒸餾水混合，置于37°C的恒溫箱中0.5-6小時后,備用；
(2)稱取黃芪多糖放入無菌燒杯中，向無菌燒杯中加入步驟(1)中得到的混合液，攪拌使黃芪多糖充分溶解，得到乳酸鈉混合液；
(3)胚胎分割操作前，按照組分含量向乳酸鈉混合液中加入青霉素、鏈霉素以及牛血清白蛋白、犢牛血清和滅活馬血清中的一種或兩種或三種，即可得到胚胎分割操作液。
[0013]本發明的馬屬動物胚胎切割操作液適用于馬、牛、驢的非手術法胚胎移植技術。
[0014]本發明實施例提供的技術方案帶來的有益效果是:本發明以乳酸鈉混合液作為主液，可提前配制待用，使用前只需向主液中加入適量抗生素及牛血清白蛋白或犢牛血清或滅活馬血清即可。具有取材方便、價格低廉、配制簡單、使用方便等優點，非常適用于馬屬動物非手術法胚胎移植的規?；a，有利于胚胎移植技術的推廣應用。
[0015]
【具體實施方式】
[0016]下面結合實施例對本發明做進一步描述。
[0017]實施例1` 一種馬屬動物胚胎分割操作液，包括5000ml乳酸鈉混合液作為主液，每1000ml乳酸鈉混合液含有50萬單位青霉素、50萬單位鏈霉素和體積百分比為10%的犢牛血清。
[0018]稱取乳酸鈉27g、氯化鈉16g、氯化鉀23g、氯化鈣5.5g和氯化鎂1.6g，加入5000ml蒸餾水混合，置于37°C的恒溫箱中6小時后，備用；稱取黃芪多糖0.4g放入無菌燒杯中，向無菌燒杯中加入到備用的混合液中，攪拌使黃芪多糖充分溶解，得到乳酸鈉混合液；胚胎分割操作前，按照組分含量，向乳酸鈉混合液中加入青霉素、鏈霉素以及犢牛血清，即可得到胚胎分割操作液。
[0019]使用本實施例胚胎分割操作液對非手術法牛胚胎胚胎分割操作。
[0020]實施例2
一種馬屬動物胚胎分割操作液，包括5000ml乳酸鈉混合液作為主液，每1000ml乳酸鈉林格注射液含有100萬單位青霉素、120萬單位鏈霉素和體積百分比為3%的滅活馬血清。
[0021]稱取乳酸鈉10.5g、氯化鈉6g、氯化鉀13.5g和氯化鈣9g，加入5000ml蒸餾水混合，置于37°C的恒溫箱中3小時后，備用；稱取黃芪多糖1.4g放入無菌燒杯中，向無菌燒杯中加入到備用的混合液中，攪拌使黃芪多糖充分溶解，得到乳酸鈉混合液；胚胎分割操作前，按照組分含量，向乳酸鈉混合液中加入青霉素、鏈霉素以及滅活馬血清，即可得到胚胎分割操作液。
[0022]本實施例胚胎分割操作液應用于非手術法馬胚胎的胚胎分割。
[0023]實施例3
一種馬屬動物胚胎分割操作液，包括4000ml乳酸鈉混合液作為主液，其中每1000ml乳酸鈉混合液中含有80萬單位青霉素、80萬單位鏈霉素和體積百分比為5%的滅活馬血清；其中，乳酸鈉混合液中各組分的含量為:每1000ml乳酸鈉混合液中含有乳酸鈉26g、氯化鈉
10.8g、氯化鉀21g和氯化鈣16.8g。
[0024]稱取乳酸鈉26g、氯化鈉10.8g、氯化鉀21g和氯化鈣16.8g，加入4000ml蒸餾水混合，置于37°C的恒溫箱中I小時后，得到乳酸鈉混合液以待備用；胚胎分割操作前，按照組分含量，向乳酸鈉混合液中加入青霉素、鏈霉素以及滅活馬血清，即可得到胚胎分割操作液。
[0025]本實施例胚胎分割操作液應用于非手術法馬胚胎的胚胎分割操作。
[0026]實施例4
一種馬屬動物胚胎分割操作液，包括5000ml乳酸鈉混合液作為主液，其中每1000ml乳酸鈉混合液中含有60萬單位青霉素、90萬單位鏈霉素和體積百分比為8%的滅活馬血清；其中，乳酸鈉混合液中各組分的含量為:每1000ml乳酸鈉混合液中含有乳酸鈉25.0g、氯化鈉20.0g、氯化鉀25g、氯化鈣7.5g、氯化鎂2.25g和黃芪多糖0.25g。
[0027]稱取乳酸鈉25.0g、氯化鈉20.0g、氯化鉀25g、氯化鈣7.5g和氯化鎂2.25g，加入5000ml蒸餾水混合，置于37°C的恒溫箱中I小時后，備用；稱取黃芪多糖0.25g放入無菌燒杯中，向無菌燒杯中加入到備用的混合液中，攪拌使黃芪多糖充分溶解，得到乳酸鈉混合液；胚胎分割前，按照組分含量，向乳酸鈉混合液中加入青霉素、鏈霉素以及滅活馬血清，即可得到胚胎分割操作液。
[0028]本實施例胚胎分割操作液應用于非手術法馬胚胎的胚胎分割操作。
[0029]實施例5
一種馬屬動物胚胎分割操作液，包括4000ml乳酸鈉混合液作為主液，其中每1000ml乳酸鈉混合液中含有150萬單位青霉素、60萬單位鏈霉素和體積百分比為0.35%的牛血清白蛋白；其中，乳酸鈉混合液中各組分的含量為:每1000ml乳酸鈉混合液中含有乳酸鈉16.8g、氯化鈉8.0g、氯化鉀Hg、氯化鈣2.8g和氯化鎂1.08g。
[0030]稱取乳酸鈉16.8g、氯化鈉8.0g、氯化鉀Hg、氯化鈣2.8g和氯化鎂1.08g,加入4000ml蒸餾水混合，置于37°C的恒溫箱中I小時后，得到乳酸鈉混合液，以待備用；胚胎分割操作前，按照組分含量，向乳酸鈉混合液中加入青霉素、鏈霉素以及牛血清白蛋白，即可得到胚胎分割操作液。
[0031]本實施例胚胎分割操作液應用于非手術法牛胚胎的胚胎分割操作。
[0032]對比實驗:
選取9頭正常的供體母牛分成3組，在母牛發情后第七天，分別使用實施例1得到的胚胎分割操作液(實施例組I)、實施例5得到的胚胎分割操作液(實施例組5)和傳統胚胎分割操作液(對照組I)進行胚胎分割操作，并保存胚胎30min后進行檢卵和移植。I周后統計沖卵及移植數，并對受體進行觀察，直至生產。供體母牛沖卵及胚胎移植效果如表1所示。
[0033]選取80匹正常的供體母馬分成4組，在母馬發情后第七天，分別使用實施例2-4得到的胚胎分割操作液(實施例組2-4)和傳統胚胎分割操作液(對照組2)進行沖卵，并保存胚胎30min后進行檢卵和移植。I周后統計沖卵及移植數，并對受體進行觀察，直至生產。供體母馬沖卵及胚胎移植效果如表2所示。
[0034]表1供體母牛沖卵及胚胎移植效果對照表
【權利要求】
1.馬屬動物胚胎切割操作液，其特征在于，所述胚胎切割操作液包括乳酸鈉混合液、青霉素、鏈霉素，以及牛血清白蛋白、犢牛血清和滅活馬血清中的一種、兩種或三種。
2.根據權利要求1所述的馬屬動物胚胎切割操作液，其特征在于，所述乳酸鈉混合液包括乳酸鈉、氯化鈉、氯化鉀、氯化鈣、氯化鎂和黃芪多糖中的一種或多種。
3.根據權利要求1或2所述的馬屬動物胚胎切割操作液，其特征在于，所述胚胎切割操作液中各組分的含量為:每1000ml乳酸鈉混合液中含有青霉素30-180萬單位、鏈霉素20-200萬單位，以及牛血清白蛋白0.05%-1.5%、犢牛血清0.5%-15%和/或滅活馬血清0.5%-14%ο
4.根據權利要求1或2所述的馬屬動物胚胎切割操作液，其特征在于，所述胚胎切割操作液中各組分的含量為:每1000ml乳酸鈉混合液中含有青霉素50-150萬單位、鏈霉素50-150萬單位，以及牛血清白蛋白0.1%-0.9%、犢牛血清1%_10%和/或滅活馬血清1%_10%。
5.根據權利要求1-4任一項所述的馬屬動物胚胎切割操作液，其特征在于，所述乳酸鈉混合液中各組分的含量為:每1000ml混合液中含有乳酸鈉l_7g、氯化鈉l_5g、氯化鉀2_7g、氯化鈣0.5-2g、氯化鎂0.05-0.5g和黃芪多糖0.01-0.3g。
6.根據權利要求1-5任一項所述的馬屬動物胚胎切割操作液，其特征在于，所述乳酸鈉混合液中各組分的含量為:每1000ml混合液中含有乳酸鈉3-7g、氯化鈉2_5g、氯化鉀3_7g、氯化鈣0.5-1.5g、氯化鎂0.1-0.4g和黃芪多糖0.01-0.lg。
7.根據權利要求1-6任一項所述的馬屬動物胚胎切割操作液，其特征在于，所述乳酸鈉混合液中各組分的含量為:每1000ml混合液中含有乳酸鈉5.4g、氯化鈉3.2g、氯化鉀4.6g、氯化鈣1.lg、氯化鎂0.32g和黃`芪多糖0.08g。
8.—種如權利要求1-7任一項所述的馬屬動物胚胎切割操作液的配制方法，其特征在于，所述配制方法包括: (1)按照各組分的含量稱取乳酸鈉、氯化鈉、氯化鉀、氯化鈣和氯化鎂，并加入蒸餾水混合，置于37°C的恒溫箱中0.5-6小時后,備用； (2)稱取黃芪多糖放入無菌燒杯中，向無菌燒杯中加入步驟(1)中得到的混合液，攪拌使黃芪多糖充分溶解，得到乳酸鈉混合液； (3)胚胎切割操作前，按照組分含量向乳酸鈉混合液中加入青霉素、鏈霉素以及牛血清白蛋白、犢牛血清和滅活馬血清中的一種或兩種或三種，即可得到胚胎切割操作液。
9.一種如權利要求1-8任一項所述的馬屬動物胚胎切割操作液的應用，其特征在于，所述胚胎切割操作液適用于馬、牛、驢的非手術法胚胎移植技術。
【文檔編號】C12N5/073GK103756956SQ201310588186
【公開日】2014年4月30日 申請日期:2013年11月21日 優先權日:2013年11月21日
【發明者】張志鵬, 張肖軍, 馬玉萍 申請人:青島德瑞駿發生物科技有限公司, 伊犁德瑞駿發生物科技有限公司, 青島德瑞鰲藍馬術有限公司