本發(fā)明屬于甘草組織培養(yǎng)技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種含阿司匹林的甘草生根培養(yǎng)基篩選方法。
背景技術(shù)：
甘草，（學(xué)名：Glycyrrhiza uralensis Fisch）別名：國老、甜草、烏拉爾甘草、甜根子。豆科、甘草屬多年生草本，根與根狀莖粗壯，是一種補(bǔ)益中草藥。對(duì)人體很好的一種藥，藥用部位是根及根莖，藥材性狀根呈圓柱形，長25～100厘米，直徑0.6～3.5厘米。外皮松緊不一，表面紅棕色或灰棕色。根莖呈圓柱形，表面有芽痕，斷面中部有髓。氣微，味甜而特殊。功能主治清熱解毒、祛痰止咳、脘腹等。喜陰暗潮濕，日照長氣溫低的干燥氣候。甘草多生長在干旱、半干旱的荒漠草原、沙漠邊緣和黃土丘陵地帶。根和根狀莖供藥用。傳統(tǒng)的甘草獲取方法是采挖葉生植物資源，造成水土流失和嚴(yán)重土壤沙漠化。另外，甘草種子主要來自野生甘草，其品種混雜，種子稀缺，發(fā)芽率極低，野生資源不適應(yīng)規(guī)模化和標(biāo)準(zhǔn)化生產(chǎn)的需要。同時(shí)由于人們破壞性地對(duì)葉生甘草采挖，使野生植物幾乎滅絕，對(duì)甘草的保護(hù)性利用迫在眉睫，但由于甘草種植發(fā)芽率不高和人們對(duì)其此生代謝物的需求，從而使甘草的組織培養(yǎng)對(duì)研究和生產(chǎn)具有重要作用，然而目前的培養(yǎng)基篩選方法都是以科研為目的的篩選方法，不能商業(yè)工廠化生產(chǎn)的需求。
稀土元素是17種特殊的元素的統(tǒng)稱，它的得名是因?yàn)槿鸬淇茖W(xué)家在提取稀土元素時(shí)應(yīng)用了稀土化合物，所以得名稀土元素。然而稀土是歷史遺留下來的名稱，稀土是從18世紀(jì)末開始陸續(xù)發(fā)現(xiàn)，當(dāng)時(shí)人們常把不溶于水的固體氧化物稱為土，例如，將氧化鋁稱為“陶土”，氧化鈣稱為”堿土“等。稀土一般是以氧化物狀態(tài)分離出來的，當(dāng)時(shí)比較稀少，因而得名為稀土（Rare Earth，簡稱RE或R），然而經(jīng)過大量的科學(xué)研究，在組織培養(yǎng)當(dāng)中添加了稀土元素會(huì)大大地提高組織培養(yǎng)的質(zhì)量。
鑭是一種金屬元素，原子序數(shù)57，原子量138.9055，元素名來源于希臘文，原意是“隱蔽”。銀灰色光澤，質(zhì)地較軟，密度6.174g/cm3，熔點(diǎn)921℃，沸點(diǎn)3457℃；化學(xué)性質(zhì)活潑，暴露于空氣中很快失去金屬光澤生成一層藍(lán)色的氧化膜，但是它并不能保護(hù)金屬，繼而進(jìn)一步氧化生成白色的氧化物粉末。能和冷水緩慢作用，易溶于酸，可以多種非金屬反應(yīng)。金屬鑭一般保存于礦物油或稀有氣體中。鑭在地殼中的含量為0.00183%，在稀土元素中含量僅次于鈰。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
基于現(xiàn)有技術(shù)中甘草的組培生根培養(yǎng)基的篩選方法中偏向于科研，不適合商業(yè)工廠化生產(chǎn)的問題，本發(fā)明提供一種含阿司匹林的甘草生根培養(yǎng)基篩選方法，其通過單一變量法對(duì)甘草叢生芽進(jìn)行生根培養(yǎng)，分析統(tǒng)計(jì)出根率、出根數(shù)、根重量和整棵植株的重量，在評(píng)價(jià)當(dāng)中結(jié)合出根率、根質(zhì)量和整棵植株的重量，更加符合商業(yè)工廠化的生產(chǎn)的標(biāo)準(zhǔn)。
一種含阿司匹林的甘草生根培養(yǎng)基篩選方法，其包括以下步驟：
步驟S10確定初步篩選范圍，檢索查閱相關(guān)文獻(xiàn)資料，對(duì)比其他植物物種組培生根過程中添加稀土元素和生根劑的量并確定稀土元素和阿司匹林初步篩選范圍；
步驟S20選擇外植體，選擇健康、生長環(huán)境一致并且生長狀態(tài)相似的增殖叢生芽，將增殖叢生芽分開成單芽；
步驟S30對(duì)照培養(yǎng)，使用單一變量法配制不同濃度稀土元素和阿司匹林添加量的培養(yǎng)基，分別接種相同量的生根芽，并進(jìn)行常規(guī)出根組織培養(yǎng)；
步驟S40記錄檢測(cè)參數(shù)，培養(yǎng)20天后統(tǒng)計(jì)每個(gè)稀土元素和阿司匹林濃度梯度中出根的存活生根芽的數(shù)量，并計(jì)算有效出根率；
步驟S50生長量計(jì)算，分別將相同濃度梯度的每個(gè)平行實(shí)驗(yàn)組中的芽取出，用清水沖洗干凈，擦干表面水分后對(duì)整株植株進(jìn)行稱重，再將根部切出，并對(duì)根部進(jìn)行稱重，記錄重量；
步驟S60計(jì)算評(píng)估因數(shù)，將有效出根率乘以根重量的十分七和植株整體重量的十分之四的和，得出評(píng)估因數(shù)，對(duì)比不同濃度梯度的評(píng)估因數(shù)，挑選出數(shù)值最大的評(píng)估因數(shù)對(duì)應(yīng)的稀土元素和阿司匹林濃度梯度；
步驟S70縮小篩選范圍，使用步驟S60中挑選出的濃度梯度范圍重復(fù)進(jìn)行步驟S10-S60縮小篩選范圍或者確定最適濃度；
步驟S80反向篩選基礎(chǔ)培養(yǎng)基，使用步驟S70確定的最適濃度搭配不同基礎(chǔ)培養(yǎng)基，重復(fù)步驟S40和步驟S50，并使用步驟S60的計(jì)算方法計(jì)算評(píng)估因數(shù)，確定最適基礎(chǔ)培養(yǎng)基。
優(yōu)選地，所述的步驟S30中配制不同濃度是設(shè)置5-15個(gè)濃度梯度。
優(yōu)選地，所述的步驟S30中接種的培養(yǎng)基的數(shù)量為每個(gè)濃度梯度的培養(yǎng)基設(shè)置10-20組平行實(shí)驗(yàn)組。
優(yōu)選地，所述的稀土元素是鑭元素。
優(yōu)選地，所述的步驟S70中重復(fù)的次數(shù)是2-3次。
優(yōu)選地，所述的步驟S80中不同的基礎(chǔ)培養(yǎng)基包括1/2MS培養(yǎng)基、MS培養(yǎng)基、N6培養(yǎng)基、B5培養(yǎng)基、Nitsh培養(yǎng)基、White培養(yǎng)基和Miller培養(yǎng)基。
具體實(shí)施方式
下面結(jié)合具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步的描述。
一種含阿司匹林的甘草生根培養(yǎng)基篩選方法，其包括以下步驟：
步驟S10確定初步篩選范圍，檢索查閱相關(guān)文獻(xiàn)資料，對(duì)比其他植物物種組培生根過程中添加稀土元素和生根劑的量并確定稀土元素和阿司匹林初步篩選范圍；
步驟S20選擇外植體，選擇健康、生長環(huán)境一致并且生長狀態(tài)相似的增殖叢生芽，將增殖叢生芽分開成單芽；
步驟S30對(duì)照培養(yǎng)，使用單一變量法配制不同濃度稀土元素和阿司匹林添加量的培養(yǎng)基，分別接種相同量的生根芽，并進(jìn)行常規(guī)出根組織培養(yǎng)；
步驟S40記錄檢測(cè)參數(shù)，培養(yǎng)20天后統(tǒng)計(jì)每個(gè)稀土元素和阿司匹林濃度梯度中出根的存活生根芽的數(shù)量，并計(jì)算有效出根率；
步驟S50生長量計(jì)算，分別將相同濃度梯度的每個(gè)平行實(shí)驗(yàn)組中的芽取出，用清水沖洗干凈，擦干表面水分后對(duì)整株植株進(jìn)行稱重，再將根部切出，并對(duì)根部進(jìn)行稱重，記錄重量；
步驟S60計(jì)算評(píng)估因數(shù)，將有效出根率乘以根重量的十分七和植株整體重量的十分之四的和，得出評(píng)估因數(shù)，對(duì)比不同濃度梯度的評(píng)估因數(shù)，挑選出數(shù)值最大的評(píng)估因數(shù)對(duì)應(yīng)的稀土元素和阿司匹林濃度梯度；
步驟S70縮小篩選范圍，使用步驟S60中挑選出的濃度梯度范圍重復(fù)進(jìn)行步驟S10-S60縮小篩選范圍或者確定最適濃度；
步驟S80反向篩選基礎(chǔ)培養(yǎng)基，使用步驟S70確定的最適濃度搭配不同基礎(chǔ)培養(yǎng)基，重復(fù)步驟S40和步驟S50，并使用步驟S60的計(jì)算方法計(jì)算評(píng)估因數(shù)，確定最適基礎(chǔ)培養(yǎng)基。
作為優(yōu)選實(shí)施例，所述的步驟S30中配制不同濃度是設(shè)置10個(gè)濃度梯度。
作為優(yōu)選實(shí)施例，所述的步驟S30中接種的培養(yǎng)基的數(shù)量為每個(gè)濃度梯度的培養(yǎng)基設(shè)置10組平行實(shí)驗(yàn)組。
作為優(yōu)選實(shí)施例，所述的稀土元素是鑭元素。
作為優(yōu)選實(shí)施例，所述的步驟S70中重復(fù)的次數(shù)是3次。
作為優(yōu)選實(shí)施例，所述的步驟S80中不同的基礎(chǔ)培養(yǎng)基包括1/2MS培養(yǎng)基、MS培養(yǎng)基、N6培養(yǎng)基、B5培養(yǎng)基、Nitsh培養(yǎng)基、White培養(yǎng)基和Miller培養(yǎng)基。
經(jīng)過篩選出以1/2MS培養(yǎng)基為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，添加阿司匹林溶液的體積分?jǐn)?shù)是為0.03%、NAA（萘乙酸）的濃度為0.05mg/L、ZT(玉米素)的濃度為2.0 mg/L、硝酸鑭的濃度為3g/L，維生素B12的濃度為0.3mg/L，瓊脂粉的濃度為10g/L、白砂糖的濃度為7g/L，最適合甘草叢生芽工廠化出根培養(yǎng)生產(chǎn)。
以上所述實(shí)施例僅表達(dá)了本發(fā)明的一種實(shí)施方式，其描述較為具體和詳細(xì)，但并不能因此而理解為對(duì)本發(fā)明專利范圍的限制。應(yīng)當(dāng)指出的是，對(duì)于本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員來說，在不脫離本發(fā)明構(gòu)思的前提下，還可以做出若干變形和改進(jìn)，這些都屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。因此，本發(fā)明專利的保護(hù)范圍應(yīng)以所附權(quán)利要求為準(zhǔn)。