本發(fā)明涉及一種蕙蘭種質(zhì)資源離體保存及保存后恢復(fù)生長(zhǎng)的方法。屬于植物組織培養(yǎng)技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
蕙蘭（cymbidiumfaberirolfe）是蘭科蘭屬的地生草本，假鱗莖不明顯，葉5-8枚，帶形，直立性強(qiáng)，基部常對(duì)折而呈v形，葉脈透亮，邊緣常有粗鋸齒。蕙蘭在蕙蘭品種中是十分出名，原產(chǎn)于中國，是我國的珍稀物種，也是國家二級(jí)保護(hù)野野生物種，是我國栽培最久也是最為普及的蕙蘭之一。蕙蕙蘭色通常為黃綠色，略帶深紫紅色的斑點(diǎn)和脈紋，它的花香氣濃郁，一莖多花、一般為6—15朵。其繁殖方法一般為分株繁殖，3～4年才能進(jìn)行一次，繁殖速度較慢。蕙蘭種子非常細(xì)小、呈粉狀，沒有胚乳，只有一個(gè)簡(jiǎn)單的胚，外面包著疏松、透明、不易透水的種皮，胚內(nèi)含有很少的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，絕大部分為脂類物質(zhì)，自然條件下蕙蘭種子很難萌發(fā)。因此，傳統(tǒng)的種子保存技術(shù)不適用蕙蘭種質(zhì)資源保存。
蕙蘭多數(shù)栽培品種均是由野生種馴化或自然變異篩選而來。從資源上來說，由于對(duì)野生國蘭資源的大量采挖，天然資源已遭到了大量破壞，可采集的野生資源越來越少，再加上自身繁殖速度極其緩慢，我國野生蕙蘭資源日趨緊缺，有些珍稀品種已瀕臨滅絕，因此，建立科學(xué)、有效、實(shí)用的蕙蘭種質(zhì)資源保存技術(shù)迫在敏捷。通過有計(jì)劃的培育、繁殖、發(fā)展、保存瀕危的特有種類，才能避免該物種滅絕。
組織培養(yǎng)作為植物種質(zhì)資源離體保存技術(shù)已被廣泛使用，在種質(zhì)資源交換過程中，利用試管苗進(jìn)行交換不僅運(yùn)輸成本低，還可避免在交換過程中病蟲害的傳播，也可以解決大田保存占地面積大、費(fèi)用高等問題。頻繁的離體繼代培養(yǎng)保存技術(shù)，在每一次繼代培養(yǎng)過程中都有可能造成交叉污染，多次的繼代培養(yǎng)還會(huì)引發(fā)遺傳變異，同時(shí)，隨著繼代培養(yǎng)數(shù)量的增加要耗費(fèi)大量的人力物力。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
本發(fā)明的目的是為克服上述現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種蕙蘭種質(zhì)資源離體保存方法。
本發(fā)明還提供了所述離體保存方法保存后恢復(fù)生長(zhǎng)的方法。
為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用下述技術(shù)方案：
一種蕙蘭種質(zhì)資源離體保存方法，從蕙蘭新生長(zhǎng)的假鱗莖上剝?nèi)∏o尖，將其置于vw培養(yǎng)基輔以0.5～1mg/l6-芐基腺嘌呤的原球莖誘導(dǎo)培養(yǎng)基表面培養(yǎng)成原球莖，將原球莖進(jìn)行反復(fù)切割和繼代培養(yǎng)，所采用的繼代培養(yǎng)基為vw培養(yǎng)基輔以0.2～0.4mg/l6-芐基腺嘌呤，從而繁殖出所需數(shù)量的原球莖，然后采用vw培養(yǎng)基輔以2.5mg/l多效唑（pp333）的離體保存培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)，待原球莖進(jìn)入發(fā)育生長(zhǎng)階段后，在0～5℃條件下暗培養(yǎng)。
優(yōu)選的，所述莖尖的剝?nèi)》椒ㄈ缦拢哼x擇長(zhǎng)度為5～7cm的假鱗莖，用自來水清洗表面塵土，剝?nèi)プ钔鈱拥?～2個(gè)葉片，用體積濃度75%的酒精擦洗3～4秒，放入質(zhì)量濃度0.1%的升汞溶液中滅菌20分鐘，無菌水沖洗3～4次，晾干或用濾紙吸干表面水分，在顯微鏡下剝?nèi)〈笮〖s為0.5mm的莖尖。
優(yōu)選的，將莖尖置于試管或培養(yǎng)瓶中原球莖誘導(dǎo)培養(yǎng)基的表面，輕壓莖尖以接觸到原球莖誘導(dǎo)培養(yǎng)基的表面為宜，避免埋入，進(jìn)而引起窒息死亡，及時(shí)密封并做好標(biāo)記。
優(yōu)選的，原球莖的培養(yǎng)方法是：將莖尖在25℃，光照2000lux，每天光照10小時(shí)的條件下培養(yǎng)15天后，出現(xiàn)明顯膨大，30天后出現(xiàn)若干個(gè)白色突起，45天后，所述突起體積增大形成原球莖。
優(yōu)選的，反復(fù)切割和繼代培養(yǎng)的具體方法是：將生長(zhǎng)為4～6mg的原球莖切割成4塊，然后置于繼代培養(yǎng)基中繼續(xù)擴(kuò)增培養(yǎng)，建立無性繁殖系，反復(fù)切割和繼代培養(yǎng)，從而短時(shí)間繁殖出所需數(shù)量的原球莖。
優(yōu)選的，所述發(fā)育生長(zhǎng)階段是選擇發(fā)育健壯、大小均勻的原球莖，置于離體保存培養(yǎng)基中，在25℃，光照2000lux，每天光照10小時(shí)的條件下培養(yǎng)7天。
優(yōu)選的，暗培養(yǎng)階段應(yīng)當(dāng)定期觀察生長(zhǎng)情況，隨時(shí)剔除有污染的培養(yǎng)瓶。
優(yōu)選的，暗培養(yǎng)階段所使用的離體保存培養(yǎng)基，厚度約為4cm，并且，用于放置離體保存培養(yǎng)基的試管或培養(yǎng)瓶應(yīng)當(dāng)密閉良好，以減少離體保存培養(yǎng)基中水分的揮發(fā)。
進(jìn)一步優(yōu)選的，試管或培養(yǎng)瓶以封口膜密封，并且，在封口膜的外層纏繞3層塑料保鮮薄膜。
上述離體保存方法保存后恢復(fù)生長(zhǎng)的方法，將暗培養(yǎng)中的原球莖轉(zhuǎn)移至分化培養(yǎng)基上，由原球莖分化產(chǎn)生幼苗；所述分化培養(yǎng)基為kc培養(yǎng)基輔以質(zhì)量濃度10%的香蕉汁，培養(yǎng)溫度25℃，光照強(qiáng)度2000lux，每天光照時(shí)間為10小時(shí)。
優(yōu)選的，原球莖在分化培養(yǎng)基上接種30天后，在原球莖頂端部分出現(xiàn)由葉原基發(fā)育成的幼葉，隨后幼葉迅速生長(zhǎng)，待出現(xiàn)第2～3片葉時(shí)，原球莖向下伸長(zhǎng)，并且有第1條根生出；50天后，等到幼苗有2～3條根，5～6片葉，生長(zhǎng)到10cm左右，發(fā)育成完整的植株，將試管苗移栽在育苗基質(zhì)中，在自然條件下生長(zhǎng)成正常植株。
本發(fā)明的有益效果：
本發(fā)明是利用蕙蘭莖尖培養(yǎng)技術(shù)，誘導(dǎo)出原球莖，然后通過原球莖分化獲得蕙蘭幼苗。作為繼代培養(yǎng)過程中的原球莖，是分化幼苗的中間體，通過低溫保存原球莖，在離體保存培養(yǎng)基中添加適量多效唑，可以大大延長(zhǎng)保存時(shí)間，減少繼代培養(yǎng)次數(shù)，有效保持了種質(zhì)資源的遺傳特性。保存一定時(shí)間后，將培養(yǎng)物置于正常溫度和光照條件下培養(yǎng)，能迅速恢復(fù)生長(zhǎng)，分化出幼苗。
現(xiàn)有技術(shù)中通常采用的種子萌發(fā)及快速繁殖技術(shù)，雖然能獲得大量植株，但繁殖后代變異系數(shù)較大，遺傳穩(wěn)定性和品種一致性存在問題，不符合種質(zhì)資源的保存條件。本發(fā)明采用莖尖培養(yǎng)作為外植體，莖尖是植物中生長(zhǎng)最快的分生組織，遺傳基因穩(wěn)定，再生能力強(qiáng)，基本不含病毒和其他病源組織（如細(xì)菌、真菌等），經(jīng)過組織培養(yǎng)后可以得到遺傳穩(wěn)定、品種一致以及健壯的無病毒、無病菌植株，達(dá)到了去病菌和快速繁殖的目的，具備了種質(zhì)資源離體保存的必要條件。
一般種質(zhì)資源離體保存技術(shù)大都采用試管幼苗保存，但試管幼苗對(duì)溫度反應(yīng)比較敏感，保存溫度基本都在12℃以上，不利于較低溫度保存。除蕙蘭植物之外，其他植物誘導(dǎo)、分化試管苗的中間體大多為愈傷組織，將愈傷組織誘導(dǎo)成胚狀體或不定芽，最終分化生產(chǎn)出試管苗，而愈傷組織誘導(dǎo)率一般比較低，恢復(fù)培養(yǎng)后在繼續(xù)分化出試管苗的比例也較低，相對(duì)于蕙蘭原球莖90%以上的分化率，保存愈傷組織需要較高的成本。
本發(fā)明采用原球莖進(jìn)行離體培養(yǎng)保存，原球莖對(duì)溫度的敏感性大大降低，可以有效降低保存溫度，溫度越低，生長(zhǎng)速度就越緩慢，保存時(shí)間就越長(zhǎng)，原球莖在溫度0～5℃范圍內(nèi)可以緩慢生長(zhǎng)；保存設(shè)施也相對(duì)簡(jiǎn)單，在低溫冰柜中采用暗培養(yǎng)保存技術(shù)，去掉了光照設(shè)施，控溫也相對(duì)容易，減少了光能損耗，降低了電能消耗，有效的降低保存成本；在離體保存培養(yǎng)基中輔以多效唑，多效唑?yàn)橹参锷L(zhǎng)延緩劑，通過抑制赤霉素的合成，減少細(xì)胞的分裂和伸長(zhǎng)，降低生長(zhǎng)速度，減少了對(duì)培養(yǎng)成分的消耗，延長(zhǎng)離體培養(yǎng)物的保存時(shí)間，保存時(shí)間可達(dá)到40個(gè)月以上。
具體實(shí)施方式
下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明進(jìn)行進(jìn)一步的闡述，應(yīng)該說明的是，下述說明僅是為了解釋本發(fā)明，并不對(duì)其內(nèi)容進(jìn)行限定。
實(shí)施例1：
一種蕙蘭種質(zhì)資源離體保存及保存后恢復(fù)生長(zhǎng)的方法，具體步驟如下：
（1）從蕙蘭新生長(zhǎng)的假鱗莖上剝?nèi)∏o尖，將其置于vw培養(yǎng)基輔以0.5mg/l6-芐基腺嘌呤的原球莖誘導(dǎo)培養(yǎng)基表面培養(yǎng)成原球莖。
其中，莖尖的剝?nèi)》椒ㄈ缦拢哼x擇長(zhǎng)度為5cm的假鱗莖，用自來水清洗表面塵土，剝?nèi)プ钔鈱拥?個(gè)葉片，用體積濃度75%的酒精擦洗3秒，放入質(zhì)量濃度0.1%的升汞溶液中滅菌20分鐘，無菌水沖洗3次，晾干或用濾紙吸干表面水分，在顯微鏡下剝?nèi)〈笮〖s為0.5mm的莖尖。
將莖尖置于試管或培養(yǎng)瓶中原球莖誘導(dǎo)培養(yǎng)基的表面，輕壓莖尖以接觸到原球莖誘導(dǎo)培養(yǎng)基的表面為宜，避免埋入，進(jìn)而引起窒息死亡，及時(shí)密封并做好標(biāo)記。
原球莖的培養(yǎng)方法是：將莖尖在25℃，光照2000lux，每天光照10小時(shí)的條件下培養(yǎng)15天后，出現(xiàn)明顯膨大，30天后出現(xiàn)若干個(gè)白色突起，45天后，所述突起體積增大形成原球莖。表1示出了不同的6-芐基腺嘌呤濃度對(duì)原球莖形成的影響。
表1.6-芐基腺嘌呤含量對(duì)原球莖形成的影響
（2）將原球莖進(jìn)行反復(fù)切割和繼代培養(yǎng)，所采用的繼代培養(yǎng)基為vw培養(yǎng)基輔以0.2mg/l6-芐基腺嘌呤，從而繁殖出所需數(shù)量的原球莖。
具體方法是：將生長(zhǎng)為4mg的原球莖切割成4塊，然后置于繼代培養(yǎng)基中繼續(xù)擴(kuò)增培養(yǎng)，建立無性繁殖系，反復(fù)切割和繼代培養(yǎng)，從而短時(shí)間繁殖出所需數(shù)量的原球莖。
（3）采用vw培養(yǎng)基輔以2.5mg/l多效唑的離體保存培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)，待原球莖進(jìn)入發(fā)育生長(zhǎng)階段后，在0℃條件下暗培養(yǎng)。
其中，發(fā)育生長(zhǎng)階段是選擇發(fā)育健壯、大小均勻的原球莖，置于離體保存培養(yǎng)基中，在25℃，光照2000lux，每天光照10小時(shí)的條件下培養(yǎng)7天。
暗培養(yǎng)階段應(yīng)當(dāng)定期觀察生長(zhǎng)情況，隨時(shí)剔除有污染的培養(yǎng)瓶。
暗培養(yǎng)階段所使用的離體保存培養(yǎng)基，厚度約為4cm，并且，用于放置離體保存培養(yǎng)基的試管或培養(yǎng)瓶應(yīng)當(dāng)密閉良好（試管或培養(yǎng)瓶以封口膜密封，并且，在封口膜的外層纏繞3層塑料保鮮薄膜），以減少離體保存培養(yǎng)基中水分的揮發(fā)。
（4）保存后恢復(fù)生長(zhǎng)：將暗培養(yǎng)中的原球莖轉(zhuǎn)移至分化培養(yǎng)基上，由原球莖分化產(chǎn)生幼苗；所述分化培養(yǎng)基為kc培養(yǎng)基輔以質(zhì)量濃度10%的香蕉汁，培養(yǎng)溫度25℃，光照強(qiáng)度2000lux，每天光照時(shí)間為10小時(shí)。
其中，原球莖在分化培養(yǎng)基上接種30天后，在原球莖頂端部分出現(xiàn)由葉原基發(fā)育成的幼葉，隨后幼葉迅速生長(zhǎng)，待出現(xiàn)第2片葉時(shí)，原球莖向下伸長(zhǎng)，并且有第1條根生出；50天后，等到幼苗有2條根，5片葉，生長(zhǎng)到10cm左右，發(fā)育成完整的植株，將試管苗移栽在育苗基質(zhì)中，在自然條件下生長(zhǎng)成正常植株。
實(shí)施例1涉及的各培養(yǎng)基如下：原球莖誘導(dǎo)培養(yǎng)基（vw培養(yǎng)基輔以0.5mg/l6-芐基腺嘌呤）、繼代培養(yǎng)基（vw培養(yǎng)基輔以0.2mg/l6-芐基腺嘌呤）、離體保存培養(yǎng)基（vw培養(yǎng)基輔以2.5mg/l多效唑）、分化培養(yǎng)基（kc培養(yǎng)基輔以質(zhì)量濃度10%的香蕉汁）。
實(shí)施例2：
一種蕙蘭種質(zhì)資源離體保存及保存后恢復(fù)生長(zhǎng)的方法，具體步驟如下：
（1）從蕙蘭新生長(zhǎng)的假鱗莖上剝?nèi)∏o尖，將其置于vw培養(yǎng)基輔以1mg/l6-芐基腺嘌呤的原球莖誘導(dǎo)培養(yǎng)基表面培養(yǎng)成原球莖。
其中，莖尖的剝?nèi)》椒ㄈ缦拢哼x擇長(zhǎng)度為7cm的假鱗莖，用自來水清洗表面塵土，剝?nèi)プ钔鈱拥?個(gè)葉片，用體積濃度75%的酒精擦洗4秒，放入質(zhì)量濃度0.1%的升汞溶液中滅菌20分鐘，無菌水沖洗4次，晾干或用濾紙吸干表面水分，在顯微鏡下剝?nèi)〈笮〖s為0.5mm的莖尖。
將莖尖置于試管或培養(yǎng)瓶中原球莖誘導(dǎo)培養(yǎng)基的表面，輕壓莖尖以接觸到原球莖誘導(dǎo)培養(yǎng)基的表面為宜，避免埋入，進(jìn)而引起窒息死亡，及時(shí)密封并做好標(biāo)記。
原球莖的培養(yǎng)方法是：將莖尖在25℃，光照2000lux，每天光照10小時(shí)的條件下培養(yǎng)15天后，出現(xiàn)明顯膨大，30天后出現(xiàn)若干個(gè)白色突起，45天后，所述突起體積增大形成原球莖。
（2）將原球莖進(jìn)行反復(fù)切割和繼代培養(yǎng)，所采用的繼代培養(yǎng)基為vw培養(yǎng)基輔以0.4mg/l6-芐基腺嘌呤，從而繁殖出所需數(shù)量的原球莖。
具體方法是：將生長(zhǎng)為6mg的原球莖切割成4塊，然后置于繼代培養(yǎng)基中繼續(xù)擴(kuò)增培養(yǎng)，建立無性繁殖系，反復(fù)切割和繼代培養(yǎng)，從而短時(shí)間繁殖出所需數(shù)量的原球莖。
（3）采用vw培養(yǎng)基輔以2.5mg/l多效唑的離體保存培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)，待原球莖進(jìn)入發(fā)育生長(zhǎng)階段后，在5℃條件下暗培養(yǎng)。
其中，發(fā)育生長(zhǎng)階段是選擇發(fā)育健壯、大小均勻的原球莖，置于離體保存培養(yǎng)基中，在25℃，光照2000lux，每天光照10小時(shí)的條件下培養(yǎng)7天。
暗培養(yǎng)階段應(yīng)當(dāng)定期觀察生長(zhǎng)情況，隨時(shí)剔除有污染的培養(yǎng)瓶。
暗培養(yǎng)階段所使用的離體保存培養(yǎng)基，厚度約為4cm，并且，用于放置離體保存培養(yǎng)基的試管或培養(yǎng)瓶應(yīng)當(dāng)密閉良好（試管或培養(yǎng)瓶以封口膜密封，并且，在封口膜的外層纏繞3層塑料保鮮薄膜），以減少離體保存培養(yǎng)基中水分的揮發(fā)。
（4）保存后恢復(fù)生長(zhǎng)：將暗培養(yǎng)中的原球莖轉(zhuǎn)移至分化培養(yǎng)基上，由原球莖分化產(chǎn)生幼苗；所述分化培養(yǎng)基為kc培養(yǎng)基輔以質(zhì)量濃度10%的香蕉汁，培養(yǎng)溫度25℃，光照強(qiáng)度2000lux，每天光照時(shí)間為10小時(shí)。
其中，原球莖在分化培養(yǎng)基上接種30天后，在原球莖頂端部分出現(xiàn)由葉原基發(fā)育成的幼葉，隨后幼葉迅速生長(zhǎng)，待出現(xiàn)第3片葉時(shí)，原球莖向下伸長(zhǎng)，并且有第1條根生出；50天后，等到幼苗有3條根，6片葉，生長(zhǎng)到10cm左右，發(fā)育成完整的植株，將試管苗移栽在育苗基質(zhì)中，在自然條件下生長(zhǎng)成正常植株。
實(shí)施例2涉及的各培養(yǎng)基如下：原球莖誘導(dǎo)培養(yǎng)基（vw培養(yǎng)基輔以1mg/l6-芐基腺嘌呤）、繼代培養(yǎng)基（vw培養(yǎng)基輔以0.4mg/l6-芐基腺嘌呤）、離體保存培養(yǎng)基（vw培養(yǎng)基輔以2.5mg/l多效唑）、分化培養(yǎng)基（kc培養(yǎng)基輔以質(zhì)量濃度10%的香蕉汁）的具體配方見表2。
實(shí)施例3：
一種蕙蘭種質(zhì)資源離體保存及保存后恢復(fù)生長(zhǎng)的方法，具體步驟如下：
（1）從蕙蘭新生長(zhǎng)的假鱗莖上剝?nèi)∏o尖，將其置于vw培養(yǎng)基輔以0.8mg/l6-芐基腺嘌呤的原球莖誘導(dǎo)培養(yǎng)基表面培養(yǎng)成原球莖。
其中，莖尖的剝?nèi)》椒ㄈ缦拢哼x擇長(zhǎng)度為6cm的假鱗莖，用自來水清洗表面塵土，剝?nèi)プ钔鈱拥?個(gè)葉片，用體積濃度75%的酒精擦洗4秒，放入質(zhì)量濃度0.1%的升汞溶液中滅菌20分鐘，無菌水沖洗3次，晾干或用濾紙吸干表面水分，在顯微鏡下剝?nèi)〈笮〖s為0.5mm的莖尖。
將莖尖置于試管或培養(yǎng)瓶中原球莖誘導(dǎo)培養(yǎng)基的表面，輕壓莖尖以接觸到原球莖誘導(dǎo)培養(yǎng)基的表面為宜，避免埋入，進(jìn)而引起窒息死亡，及時(shí)密封并做好標(biāo)記。
原球莖的培養(yǎng)方法是：將莖尖在25℃，光照2000lux，每天光照10小時(shí)的條件下培養(yǎng)15天后，出現(xiàn)明顯膨大，30天后出現(xiàn)若干個(gè)白色突起，45天后，所述突起體積增大形成原球莖。
（2）將原球莖進(jìn)行反復(fù)切割和繼代培養(yǎng)，所采用的繼代培養(yǎng)基為vw培養(yǎng)基輔以0.3mg/l6-芐基腺嘌呤，從而繁殖出所需數(shù)量的原球莖。
具體方法是：將生長(zhǎng)為5mg的原球莖切割成4塊，然后置于繼代培養(yǎng)基中繼續(xù)擴(kuò)增培養(yǎng)，建立無性繁殖系，反復(fù)切割和繼代培養(yǎng)，從而短時(shí)間繁殖出所需數(shù)量的原球莖。
（3）采用vw培養(yǎng)基輔以2.5mg/l多效唑的離體保存培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)，待原球莖進(jìn)入發(fā)育生長(zhǎng)階段后，在2℃條件下暗培養(yǎng)。
其中，發(fā)育生長(zhǎng)階段是選擇發(fā)育健壯、大小均勻的原球莖，置于離體保存培養(yǎng)基中，在25℃，光照2000lux，每天光照10小時(shí)的條件下培養(yǎng)7天。
暗培養(yǎng)階段應(yīng)當(dāng)定期觀察生長(zhǎng)情況，隨時(shí)剔除有污染的培養(yǎng)瓶。
暗培養(yǎng)階段所使用的離體保存培養(yǎng)基，厚度約為4cm，并且，用于放置離體保存培養(yǎng)基的試管或培養(yǎng)瓶應(yīng)當(dāng)密閉良好（試管或培養(yǎng)瓶以封口膜密封，并且，在封口膜的外層纏繞3層塑料保鮮薄膜），以減少離體保存培養(yǎng)基中水分的揮發(fā)。
（4）保存后恢復(fù)生長(zhǎng)：將暗培養(yǎng)中的原球莖轉(zhuǎn)移至分化培養(yǎng)基上，由原球莖分化產(chǎn)生幼苗；所述分化培養(yǎng)基為kc培養(yǎng)基輔以質(zhì)量濃度10%的香蕉汁，培養(yǎng)溫度25℃，光照強(qiáng)度2000lux，每天光照時(shí)間為10小時(shí)。
其中，原球莖在分化培養(yǎng)基上接種30天后，在原球莖頂端部分出現(xiàn)由葉原基發(fā)育成的幼葉，隨后幼葉迅速生長(zhǎng)，待出現(xiàn)第3片葉時(shí)，原球莖向下伸長(zhǎng)，并且有第1條根生出；50天后，等到幼苗有2條根，5片葉，生長(zhǎng)到10cm左右，發(fā)育成完整的植株，將試管苗移栽在育苗基質(zhì)中，在自然條件下生長(zhǎng)成正常植株。
實(shí)施例3涉及的各培養(yǎng)基如下：原球莖誘導(dǎo)培養(yǎng)基（vw培養(yǎng)基輔以0.8mg/l6-芐基腺嘌呤）、繼代培養(yǎng)基（vw培養(yǎng)基輔以0.3mg/l6-芐基腺嘌呤）、離體保存培養(yǎng)基（vw培養(yǎng)基輔以2.5mg/l多效唑）、分化培養(yǎng)基（kc培養(yǎng)基輔以質(zhì)量濃度10%的香蕉汁）。
實(shí)施例1～3涉及的原球莖誘導(dǎo)培養(yǎng)基（vw培養(yǎng)基輔以0.5～1mg/l6-芐基腺嘌呤）、繼代培養(yǎng)基（vw培養(yǎng)基輔以0.2～0.4mg/l6-芐基腺嘌呤）、離體保存培養(yǎng)基（vw培養(yǎng)基輔以2.5mg/l多效唑）、分化培養(yǎng)基（kc培養(yǎng)基輔以質(zhì)量濃度10%的香蕉汁）的具體配方見表2。
表2.各種培養(yǎng)基的具體配方
上述雖然對(duì)本發(fā)明的具體實(shí)施方式進(jìn)行了描述，但并非對(duì)本發(fā)明保護(hù)范圍的限制，在本發(fā)明的技術(shù)方案的基礎(chǔ)上，本領(lǐng)域技術(shù)人員不需要付出創(chuàng)造性勞動(dòng)即可做出的各種修改或變形仍在本發(fā)明的保護(hù)范圍以內(nèi)。