本發(fā)明屬于海水貝類引種和雜交品種培育
技術(shù)領(lǐng)域：
，具體涉及一種蝦夷扇貝與風(fēng)向標扇貝雜交品種的培育方法。
背景技術(shù)：
：水產(chǎn)養(yǎng)殖是我國重要的產(chǎn)業(yè)之一，我國海水養(yǎng)殖產(chǎn)量居世界首位。目前，貝類養(yǎng)殖產(chǎn)量約占到我國海水養(yǎng)殖總產(chǎn)量的72％，在諸多養(yǎng)殖種類中，以扇貝為代表的貝類養(yǎng)殖引領(lǐng)了我國海水養(yǎng)殖的第三次浪潮，推動了水產(chǎn)業(yè)快速發(fā)展。但是，近年來我國多個養(yǎng)殖扇貝物種在不同海域出現(xiàn)異常死亡的現(xiàn)象，給養(yǎng)殖者帶來巨大經(jīng)濟損失的同時，也制約了我國扇貝養(yǎng)殖業(yè)的健康發(fā)展。相關(guān)研究表明，養(yǎng)殖扇貝的育種群體小，近交機會高，甚至自繁自育等因素是導(dǎo)致扇貝種質(zhì)衰退的重要原因。扇貝水產(chǎn)養(yǎng)殖產(chǎn)業(yè)需要發(fā)達的種業(yè)來提供持續(xù)的發(fā)展動力。培育生長快、產(chǎn)量高的優(yōu)良品種一直是貝類育種的中心目標，也是產(chǎn)業(yè)發(fā)展的迫切需求。雜交育種是通過雜交將兩個或多個優(yōu)良性狀集中在一起，再經(jīng)過選擇和培育，雜交子代獲得雜種優(yōu)勢的方法，是培育優(yōu)良扇貝品種的重要手段，也是解決養(yǎng)殖扇貝高死亡率產(chǎn)業(yè)問題和改良扇貝種質(zhì)資源的重要方法。蝦夷扇貝(patinopectenyessoensis)隸屬于軟體動物，是一種大型冷水性貝類，原產(chǎn)于日本北海道、本州北部、俄羅斯千島群島的南部水域及朝鮮附近。自1982年引進中國以來，蝦夷扇貝已在山東、遼寧等北方沿海進行大規(guī)模的人工養(yǎng)殖。因其個體較大、營養(yǎng)豐富、市場價值較高，蝦夷扇貝已成為我國北方最重要的海水經(jīng)濟養(yǎng)殖貝類之一。風(fēng)向標扇貝(patinotectencaurinus)分布于加拿大的紐芬蘭沿海到美國的北卡羅來納州的大陸架海底，該扇貝物種體型較大，營養(yǎng)價值與經(jīng)濟價值較高，已成為國際上久負盛名的高檔扇貝品種。蝦夷扇貝和風(fēng)向標扇貝有相似的生活習(xí)性(冷水性貝，緯度分布較為一致)和生物學(xué)特性(同屬不同種)，為兩者之間的雜交提供了生物學(xué)基礎(chǔ)和理論依據(jù)。技術(shù)實現(xiàn)要素：本發(fā)明的目的是提供一種蝦夷扇貝與風(fēng)向標扇貝雜交品種的培育方法，即一種使用雌性蝦夷扇貝♀與雄性風(fēng)向標扇貝♂進行雜交，培育出雜交子代的方法，制備的雜交扇貝具有受精率、孵化率、變態(tài)率、保苗率高，生長速度快的優(yōu)良性狀。本發(fā)明提供一種蝦夷扇貝與風(fēng)向標扇貝雜交品種的培育方法，即使用雌性蝦夷扇貝與雄性風(fēng)向標扇貝進行雜交來培育雜交子代；本發(fā)明所提供的培育方法，包括如下的步驟1)親貝促熟在自然海水溫度為1～2℃時，取鮮活并且性腺發(fā)育良好的雌性蝦夷扇貝和雄性風(fēng)向標扇貝分別放于不同的親貝促熟池培養(yǎng)，在約20天內(nèi)將溫度逐漸升到8～9℃；培養(yǎng)到性腺指數(shù)大約在18％以上。在親貝促熟培養(yǎng)期間，每4h投放一次硅藻至終密度為3～5萬/ml；每12h投放一次螺旋藻終密度為1g/m3、海洋紅酵母終密度為200萬/m3；雞蛋黃一天投放一次，其中螺旋藻和蛋黃分別通過300目篩絹搓碎；2)催產(chǎn)在進行消毒處理的孵化池中備好12～13℃的海水，將親本蝦夷扇貝和親本風(fēng)向標扇貝出水之后，洗刷去除其殼上的污泥及各種附著物，分別陰干，隨后將親本蝦夷扇貝置入孵化池中充氣刺激其產(chǎn)卵，然后將親本風(fēng)向標扇貝置入容器中排精；3)授精和孵化待孵化池中排卵完成后，取出親本蝦夷扇貝，將風(fēng)向標扇貝的精子潑入到孵化池中，使蝦夷扇貝的卵受精；受精卵的最高培育密度應(yīng)控制在100個/ml；孵化池內(nèi)水溫范圍13～14℃，受精卵自然孵化約65-70小時；4)選優(yōu)和幼蟲培育待受精卵發(fā)育到d形幼蟲時期，使用300目篩絹將上浮的d形幼蟲過濾出來，轉(zhuǎn)入到新的孵化池中培養(yǎng)；培養(yǎng)的幼蟲培育密度控制在8～10個/ml，培育溫度15℃，保持充氣狀態(tài)，1天換水兩次，一次換一半的水量，保證溫差控制在0.5℃以內(nèi)，在換水后每個孵化池中投edta(1.0g/m3)和海洋紅酵母(約100萬/m3)；此外3～4天導(dǎo)一次孵化池，導(dǎo)完孵化池后進行殺菌操作；待幼蟲口溝形成后便需要投喂餌料，其中開口餌料選用金藻，日投餌量為第一天3000個/毫升，第二天大約6000個/毫升，第三天10000個/毫升，最終穩(wěn)定在大約10000-50000個/毫升，投餌4次/天；在幼蟲長大些后，每次投喂餌料時需要逐漸增加投喂扁藻和硅藻，扁藻投喂量大約3000-8000個/毫升，硅藻投喂量大約10,000-20000個/毫升；當(dāng)幼蟲發(fā)育到眼點幼蟲時期，，投入消毒處理過的附著基(聚乙烯網(wǎng)片)，投放密度為20-25片附著基/m3；5)出庫待稚貝長出次生殼且殼長達到400～500微米時，出池進行中間培育；在出庫前三天,逐漸降低水溫和室溫,每次換水降低1℃，保證出庫時稚貝的水溫與海區(qū)或保苗池的自然水溫相同或接近；稚貝出庫時用50-60目網(wǎng)袋將聚乙烯附著基裝入，網(wǎng)袋的規(guī)格為寬30厘米，高40厘米,用聚乙烯繩將網(wǎng)袋系成串，便于懸掛海區(qū)或保苗池。本發(fā)明在研究了蝦夷扇貝和風(fēng)向標扇貝的生活習(xí)性，生物學(xué)特性的基礎(chǔ)上，以大約2℃為其生物學(xué)零度，在8～9℃的親貝促熟池中對親貝人工促熟，在12～13℃的海水中使其產(chǎn)卵或排精，在催產(chǎn)之前，確保性腺發(fā)育成熟來保證親本精卵的質(zhì)量，性腺指數(shù)大約在18％以上，排出卵后盡快授精，否則影響受精卵的質(zhì)量，受精卵產(chǎn)生后，孵化池的溫度要保持在13～14℃之間，利于受精卵的發(fā)育。此后幼蟲在15±0.5℃水溫中培育，大約28天左右幼蟲達到眼點幼蟲時期，大約48天左右幼蟲長到400～500微米。具體實施方案下面通過具體實施例詳細說明本發(fā)明的培育方法。實施例1：蝦夷扇貝♀與風(fēng)向標扇貝♂雜交品種的培育方法，具體步驟如下：1、親貝促熟水溫：在自然海水溫度為1～2℃時，取雌性蝦夷扇貝和雄性風(fēng)向標扇貝，采用積溫促熟的方法，在約20天內(nèi)由低溫逐漸上升至到8～9℃。申請人發(fā)現(xiàn)高于此溫度親貝極易導(dǎo)致流產(chǎn)，必須嚴格控溫，積溫時間越長促熟效果越好。若后期室溫較高，則通過換水(每天一次)以降低水溫，但溫差不宜過大。餌料：親本扇貝在池中穩(wěn)定培養(yǎng)30-40天，期間投喂硅藻、螺旋藻、蛋黃、酵母等營養(yǎng)餌料。具體如下：每4h一次間隔投放一次硅藻(3～5萬/ml)；每12h投放一次螺旋藻(1g/m3)和海洋紅酵母(約200萬/m3)；雞蛋黃一天投放一次(1個/24m3)，其中螺旋藻和蛋黃須分別通過300目篩絹搓碎，均勻混勻于10l水中，潑到池中。每種餌料具體投放量視養(yǎng)殖貝的數(shù)量而定，既要保證充足的營養(yǎng)，又要注意觀察排便情況，避免暴飲暴食和消化不良。防止早產(chǎn)/流產(chǎn)：促熟后期親貝性腺飽滿，極易早產(chǎn)/流產(chǎn)，預(yù)防原則是減少各種刺激：1、將親貝分至培育池兩側(cè)，減少投喂餌料時水流的物理刺激；2、換水原則：嚴格控制水溫9℃以下；換水時溫差不能過大(≤1℃)；3、按時頻繁觀察、測量水溫；進行觀察、換水操作時動作一定要輕柔；4、若有少量個體早產(chǎn)，應(yīng)急措施：關(guān)閉供氧，停止投餌，減少移動，靜置使配子沉底。2、催產(chǎn)當(dāng)親本扇貝的性腺指數(shù)達到18％以上，即可準備進行親本扇貝的促熟生產(chǎn)。親貝選擇：挑選性腺發(fā)育成熟、飽滿的親貝。操作過程中要注意仔細分辨雌雄，避免混入異性個體或雌雄同體個體而導(dǎo)致意外受精。催產(chǎn)：洗刷去除殼上的污泥及各種附著物，分開雌雄后分別放置。采用陰干升溫刺激催產(chǎn)的方法-關(guān)掉燈光，親貝陰干45-60分鐘。打開燈，準備適溫(水溫12～13℃，高于親貝促熟水溫3～4℃即可)、過濾海水刺激其產(chǎn)卵和產(chǎn)精。其中，親本蝦夷置入孵化池中使其排卵，在30min后將親本風(fēng)向標扇貝置入大桶中刺激其排精，一般說來充氣可加快產(chǎn)卵和排精速度，但要格外謹慎，應(yīng)將雌雄分開放置且保持2米以上的距離，避免氣泡破碎引起精子飛濺而導(dǎo)致意外受精。待孵化池中排卵量達到一定密度(不超過100個/ml)，應(yīng)迅速將親本蝦夷扇貝轉(zhuǎn)入另一個孵化池中繼續(xù)產(chǎn)卵(防止親本濾食卵子)。3、授精和孵化授精：待卵的濃度達到一定量時將雌貝取出，邊不斷攪拌邊加精液以保證精液在水體中分散均勻。精子過量容易導(dǎo)致水質(zhì)腐敗和胚胎畸形，一般顯微鏡視野中一個卵周圍有3-5個精子便可。雄貝所產(chǎn)的精液濃度往往很高，過濃時會呈現(xiàn)乳白色，可稀釋后再取適量進行授精。受精卵的培育密度應(yīng)控制在100個/ml，極限也不應(yīng)超過200個/ml。另外需要注意：如果精子量太少需要補加。精子量過大則需要用500目篩絹洗卵2-3次以除去過量精子。受精能力隨產(chǎn)出的時間延長而降低，且水溫越高，精卵的生命力越短，一般來說在產(chǎn)卵后的2小時內(nèi)受精率都很高。孵化：扇貝的卵為沉性卵，授精后應(yīng)進行充氣，并經(jīng)常攪拌水體以防卵子沉到池底互相擠壓影響受精卵的發(fā)育。一般1h攪拌一次。(這是孵化過程中最為關(guān)鍵的一步，它直接決定了孵化率的高低。)孵化密度一般控制在50-60粒/ml，不超過100粒/ml。一般說來孵化期間不需要換水，但要注意觀察水色。溫度過高會導(dǎo)致未受精卵過快腐敗，水體會變白，且有泡沫產(chǎn)生，遇到這種情況應(yīng)立即用500目篩絹將胚胎濾出轉(zhuǎn)移至適溫新水培育。培育期間盡量保證水溫恒定。注：蝦夷扇貝34h左右發(fā)育到擔(dān)輪幼蟲，胚胎可以自行游動，降低攪拌頻率；63-70h進入d形幼蟲期開始嚴禁攪拌。4、選優(yōu)和幼蟲培育選優(yōu)：蝦夷扇貝受精后63-70h胚胎發(fā)育至d形幼蟲后，需要選優(yōu)一次，棄去未孵化成功的受精卵或發(fā)育過小的胚胎(一般在受精后同時間第三天)。方法如下：停止充氣1小時，用260目或300目篩絹將上浮的d形幼蟲轉(zhuǎn)入到適溫過濾海水中。(溫差不要超過0.5℃)幼蟲培育：幼蟲培育十分重要，幼蟲個體小，適應(yīng)環(huán)境能力比較差，對水質(zhì)要求高，必須認真管理。每天都要觀察室溫、水溫、水色的變化，以及幼蟲的攝食、生長狀況，充氣是否正常等。幼蟲培育密度：蝦夷扇貝一般控制在8-10個/ml，高者10-12個/ml。整個過程必須保持充氣狀態(tài)。換水：換水頻率一般為2次/天，每次換水1/2，保證每天一個量的換水量。吸底：選優(yōu)以后的幼蟲完全可以自己浮起，若仍有沉底的幼蟲，則屬于活力不佳或已經(jīng)死亡，此時嚴禁攪拌，應(yīng)當(dāng)使用吸底器將沉底的幼蟲吸出，每天不少于兩次。投餌：待幼蟲口溝形成后便需要投喂餌料。一般在選幼結(jié)束后當(dāng)天晚投放少量。投餌應(yīng)本著少量多次的原則。開口餌料一般選用金藻，日投餌量為第一天大約3000個/ml，第二天大約6000個/ml，第三天大約10000個/ml，最終穩(wěn)定在大約10000-50000個/ml，投餌4次/天。投餌量應(yīng)根據(jù)幼蟲密度、生長和攝食情況及時調(diào)整。幼蟲長大些后應(yīng)逐漸增投小硅藻和扁藻：扁藻大約3000-8000個/ml，小硅藻大約10000-20000個/ml。扁藻如果投喂過剩，則會聚集在桶的向光面形成綠色的一層。殺菌除害：一般3～4天導(dǎo)一次孵化池，導(dǎo)完孵化池后還需投青霉素/土霉素(4.0g/m3)殺菌，具體殺菌時間、殺菌劑及用量根據(jù)不同廠區(qū)不同。期間觀察是否有大規(guī)模死亡(沉底現(xiàn)象)，一般在殼頂中期死亡率最高，一旦發(fā)現(xiàn)此種情況要及時將未沉底幼蟲移至新水體培育，過1-2h沉底幼蟲如有上浮也可移出繼續(xù)培育，仍然沉底的則需丟棄。另外，在附著變態(tài)期間也容易出現(xiàn)大規(guī)模死亡，此時因已投附著基不便導(dǎo)孵化池，則需要及時換水和投喂有助于消化的藥物。投附著基：當(dāng)幼體即將結(jié)束浮游生活變態(tài)附著時，在其口溝后方、平衡器下方生出一個黑點稱眼點，初生眼點小而不規(guī)則，第二、三天變成圓形且比較明顯。當(dāng)具有眼點比例的幼蟲達到30％以上時，要投入消毒磨砂處理的附著基(聚乙烯網(wǎng)片3000扣/片)，投放密度約為20-25片附著基/m3。在附著期，為了減少苗附著在池壁，可以適當(dāng)加大通氣量。升溫培育：幼蟲培育期間為加快生長速度，水體溫度應(yīng)逐漸提升不超過16℃，但溫度越高水質(zhì)越容易腐敗，且每次溫度提升也應(yīng)控制在0.5℃以內(nèi)。5、出庫由于附著密度大,池內(nèi)培育時間不易太長,否則會抑制稚貝生長,甚至大量脫落。當(dāng)稚貝長到400-500μm時即可出池進行中間培育。出庫前三天，逐漸降低水溫和室溫,每次換水降低0.5℃即可，保證出池的稚貝與海區(qū)或保苗池的自然水溫相同或接近,以提高保苗率。隨后2016年3月和4月分別在煙臺海益苗業(yè)有限公司和獐子島原良種育苗車間選取相同雜交方法下，不同批次雜交子代，重復(fù)上述試驗，統(tǒng)計雜交子代和蝦夷扇貝繁殖群體的受精率、孵化率、變態(tài)率和40天稚貝殼高(表1)。表1：雜交子代受精率、孵化率、變態(tài)率和40天稚貝殼高統(tǒng)計表受精率(％)孵化率(％)變態(tài)率(％)40天稚貝殼高(μm)雜交子代99.72±2.8593.85±3.0951.64±3.32523.62±19.27蝦夷扇貝93.23±3.2184.64±3.3630.27±4.42478.42±21.76以上結(jié)果顯示，使用本發(fā)明方法培育蝦夷扇貝與風(fēng)向標扇貝雜交品種，雜交子代受精率、孵化率和變態(tài)率顯著優(yōu)于蝦夷扇貝，40天稚貝殼高顯著高于同期蝦夷扇貝。本技術(shù)方明實現(xiàn)了風(fēng)向標扇貝引種后與蝦夷扇貝的雜交，對于解決目前蝦夷扇貝種質(zhì)退化、良種選育和品種改良的問題具有重要意義，為扇貝的高質(zhì)苗種培育提供技術(shù)支撐，有利于推動我國海水貝類的健康、可持續(xù)發(fā)展。當(dāng)前第1頁12