本發(fā)明涉及一種靈芝的栽培方法，特別是一種多糖含量高靈芝段木栽培方法。
背景技術：
靈芝為多孔菌科真菌赤芝或紫芝的干燥子實體。靈芝是一種珍貴的藥用真菌，屬于擔子菌綱多孔菌科靈芝屬，在我國有兩千多年的藥用史。靈芝首載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，歷代醫(yī)家都認為靈芝能治療多種疾病，是滋補強壯扶正固本的珍貴藥物。靈芝多糖是靈芝中最有效的成分之一，存在于靈芝的子實體、孢子粉和菌絲體中，具有抑制腫瘤、增強機體對自由基清除的能力，故能減少自由基對機體的損傷、有延緩衰老之功效，還可以提高免疫力、抗炎癥、降血脂、降血糖等作用。
隨著靈芝的保健功效被人們廣泛的認識和接受，野生靈芝已遠遠不能滿足人們的需求。但是現(xiàn)有技術栽培靈芝時，不利于產(chǎn)出靈芝的品質(zhì)保證。特別是不能保證靈芝中多糖的含量，使得最終得到的靈芝中多糖含量低。
技術實現(xiàn)要素：
本發(fā)明的目的，是提供一種靈芝段木栽培方法。所述方法栽培后得到的靈芝的品質(zhì)好，靈芝中的有效成分多糖含量高。
本發(fā)明是這樣實現(xiàn)的。
一種靈芝段木栽培方法，包括菌材處理、接種、培育菌絲、入畦、出芝管理和采收。
前述的靈芝段木栽培方法，具體包括以下步驟：
(1)菌材處理：選擇柞樹、楓樹、椴樹、榆樹、千金榆或胡桃楸，截成段，每段長12-17cm，將截成段的段木于90-100℃的蒸汽下滅菌12-14h后，裝入聚乙烯袋中，每袋裝1段，用繩系緊；
(2)接種：無菌狀態(tài)下，將栽培種按每平方米750毫升菌種量接入段木中，接種時間為3月份；
(3)培育菌絲：接好種的段木菌袋要放在溫度為25-30℃，濕度為55-65％條件下培養(yǎng)18-22天后，對聚乙烯袋刺孔，繼續(xù)培養(yǎng)48-52天，即得菌絲；
(4)入畦：去掉聚乙烯袋，取出培育有菌絲的段木，置于畦中，畦深10-12cm，寬1.2-1.5m，長1.5-2.0m，段木之間間隔10-12cm，空隙填滿潮濕的細土，然后再覆1-2厘米厚的沙子；
(5)出芝管理：采用干濕管理法，即三天濕，即空氣濕度95％以上，一天偏干，以土壤表面泥土稍發(fā)白為準，每隔10-20天按每畝100-200kg肥料進行施肥；
(6)采收：下地30-40天后即可采收。
前述的靈芝段木栽培方法，所述步驟(5)中，所述肥料按重量份計算，主要由尿素25-35份、氯化銨5-15份、硫酸銨5-15份、磷酸鉀1-10份、鉬酸銨2-4份、干雞糞10-20份、干牛糞10-20份、玉米稈10-20份、稻殼5-10份、豆餅10-20份和中藥渣10-20份制備而成。
前述的靈芝段木栽培方法，所述肥料按重量份計算，主要由尿素28-32份、氯化銨8-12份、硫酸銨8-12份、磷酸鉀4-7份、鉬酸銨2-4份、干雞糞13-17份、干牛糞13-17份、玉米稈13-17份、稻殼6-8份、豆餅13-17份和中藥渣13-17份制備而成。
前述的靈芝段木栽培方法，所述肥料按重量份計算，主要由尿素30份、氯化銨10份、硫酸銨10份、磷酸鉀6份、鉬酸銨3份、干雞糞15份、干牛糞15份、玉米稈15份、稻殼7份、豆餅15份和中藥渣15份制備而成。
前述的靈芝段木栽培方法，所述肥料這樣制備：取尿素、氯化銨、硫酸銨、磷酸鉀、鉬酸銨、干雞糞、干牛糞、玉米稈、稻殼、豆餅和中藥渣粉碎成細顆粒后，混勻，造粒，干燥，即得。
前述的靈芝段木栽培方法，所述中藥渣按重量份計算，主要由枇杷葉10-20份、百部1-10份、桔梗5-15份、苦參1-10份和黃芪1-10份制成。
前述的靈芝段木栽培方法，所述中藥渣按重量份計算，主要由枇杷葉13-17份、百部3-7份、桔梗8-12份、苦參3-7份和黃芪3-7份制成。
前述的靈芝段木栽培方法，所述中藥渣按重量份計算，主要由枇杷葉15份、百部5份、桔梗10份、苦參5份和黃芪5份制成。
前述的靈芝段木栽培方法，所述中藥渣這樣制備：枇杷葉、百部、桔梗、苦參和黃芪加3-5倍量沸水，煎煮40-50min后，過濾，取濾渣，干燥，粉碎成細顆粒，即得。
前述的靈芝段木栽培方法，所述中藥渣這樣制備：枇杷葉、百部、桔梗、苦參和黃芪加4倍量沸水，煎煮45min后，過濾，取濾渣，干燥，粉碎成細顆粒，即得。
申請人靈芝栽培方法進行了大量的研究，部分實驗如下：
實驗例多糖含量測定
1測定項目：
1.1靈芝1：按實施例1進行栽培，采收得到靈芝1。
1.2靈芝2：栽培方法同實施例1，但所施的肥料種不含中藥渣。
2方法
2.1苯酚溶液的配制
精確稱量分析純苯酚晶體5g于250ml，加入蒸餾水60ml，放入50℃水浴中使其溶解，再于100ml容量瓶中定容，即得5％苯酚溶液。苯酚可以被空氣氧化，所以苯酚溶液現(xiàn)配現(xiàn)用。
2.2樣品多糖提取方法
2.2.1靈芝1樣品溶液：取5g赤靈芝1樣品，粉碎過80目篩。取所得靈芝粉末0.5g于500ml燒杯中，加入15ml95％乙醇，于60℃恒溫水浴槽中加熱30分鐘，過濾。重復以上操作兩次，以除去單糖、雙糖以及低聚糖等干擾性成分。經(jīng)過濾后的樣品于100℃沸水中提取一段時間，過濾后取濾液加蒸餾水定容至500ml。
2.2.1靈芝2樣品溶液：取5g赤靈芝2樣品，粉碎過80目篩。取所得靈芝粉末0.5g于500ml燒杯中，加入15ml95％乙醇，于60℃恒溫水浴槽中加熱30分鐘，過濾。重復以上操作兩次，以除去單糖、雙糖以及低聚糖等干擾性成分。經(jīng)過濾后的樣品于100℃沸水中提取一段時間，過濾后取濾液加蒸餾水定容至500ml。
2.3分光光度法測定多糖含量
2.3.1標準曲線的繪制。精確稱量充分干燥過的分析純葡萄糖50mg，加水定容至500ml容量瓶中，得到0.1mg/ml葡萄糖標準溶液。取50ml洗凈的容量瓶6只。分別用移液管準確加入葡萄糖標準溶液5ml、10ml、15ml、20ml、25ml、30ml，加入蒸餾水定容，即得到濃度分別為0.01mg/ml、0.02mg/ml、0.03mg/ml、0.04mg/ml、0.05mg/ml、0.06mg/ml的葡萄糖標準溶液。測定時取1ml各濃度葡萄糖標準溶液加入到20ml具塞比色管中，迅速入5％苯酚溶液以及98％濃硫酸適量，搖勻后放置于室溫下顯色20min。另取lml蒸餾水，同上加入苯酚溶液和濃硫酸，做空白參比溶液。在指定波長處測定吸光度值，繪制標準曲線，計算標準曲線方程和相關系數(shù)r。
2.3.2靈芝1多糖含量測定：取lml靈芝1樣品多糖提取液加入到20ml具塞比色管中，采用與標準液顯色相同方法依次加入苯酚溶液和濃硫酸，于特定波長處測定吸光度，將吸光度帶入標準曲線方程，計算得出樣品液濃度c。按下式計算出所取多糖含量，多糖含量(％)＝cv/m，c為樣品液濃度，v為樣品液體積，m為取樣的質(zhì)量。
2.3.3靈芝2多糖含量測定：取lml靈芝2樣品多糖提取液加入到20ml具塞比色管中，采用與標準液顯色相同方法依次加入苯酚溶液和濃硫酸，于特定波長處測定吸光度，將吸光度帶入標準曲線方程，計算得出樣品液濃度c。按下式計算出所取多糖含量，多糖含量(％)＝cv/m，c為樣品液濃度，v為樣品液體積，m為取樣的質(zhì)量。
3結(jié)果
3.1最大吸收波長的確定
取lml0.05mg/ml葡萄糖標準溶液，加入苯酚溶液和濃硫酸后反應一段時間后。在450-520nm波長區(qū)間進行光譜掃描，確定其最大吸收波長，發(fā)現(xiàn)在488nm波長處，所得吸光度值最大，無其他雜峰，則最佳測定波長選用488nm。
3.2苯酚溶液用量的確定
取相同濃度的葡萄糖標準液1ml于6支20ml具塞比色管中，分別加入0.4ml、0.6ml、0.8ml、1.0ml、1.2ml、1.4ml的5％苯酚溶液，再依次加入5ml98％濃硫酸，混合搖勻。放置于20℃溫度下顯色30分鐘，在488nm波長處測定吸光度值。當加入苯酚溶液1.0ml時，吸光度值最大，加入苯酚溶液過多反而會引起吸光度降低，所以實驗中5％苯酚溶液的最佳加入量應當為1ml。
3.3濃硫酸用量的確定
取相同濃度的葡萄糖標準溶液lml加入到五支編號的具塞比色管中，各加入5％苯酚溶液lml，依次滴加濃硫酸4.0ml、4.5ml、5.0ml、5.5m、6.0ml。于488nm波長處測定其吸光度，發(fā)現(xiàn)硫酸加入量為5ml時所測得的吸光度值達到最大，加入硫酸過少則反應不夠完全。加入硫酸過多可能導致其他副反應，導致測定結(jié)果降低，所以最佳硫酸加入量為5ml。
3.4顯色溫度的確定
分別取一定濃度葡萄糖標準液lml加入到五支編號的具塞比色管中，各向其中加入5％苯酚溶液lml，迅速滴加98％濃硫酸5ml，分別放于20℃、30℃、40℃、50℃、60℃溫度下顯色30min，在489nm波長處測定其吸光度。在各溫度下，測得的吸光度基本不變，所以溫度對反應吸光度基本無影響，在室溫下就能夠完全反應。
3.5顯色時間的確定
分別取一定濃度葡萄糖標準液lml加入到五支編號的具塞比色管中，各向其中加入5％苯酚溶液lml，迅速滴加98％濃硫酸5ml，分別于室溫下顯色10min、20min、30min、40min、50min，在488nm波長處測定其吸光度。發(fā)現(xiàn)，反應10分鐘吸光度值較小，顯色時間從20到50分鐘，樣品溶液的吸光度基本不變，所以反應時間控制在20分鐘以上就基本能夠反應完全。所以反應時間控制在20分鐘以上就能達到最佳效果。
綜合以上測定結(jié)果，得出苯酚硫酸法最佳測定條件參數(shù)：1m樣品液，5％苯酚溶液加入量為1ml，98％濃硫,酸加入量為5ml，顯色溫度室溫即可，顯色時間為20分鐘以上，最大吸收波長為488nm。
3.6標準曲線的繪制
精確稱量充分干燥過的分析純葡萄糖50mg，加水定容至500ml容量瓶中，得到0.1mg/ml葡萄糖標準溶液。取50ml洗凈的容量瓶6只，分別用移液管準確加入葡萄糖標準溶液5ml、10ml、15ml、20ml、25ml、30ml。加入蒸餾水定容，即得到濃度分別為0.01mg/ml、0.02mg/ml、0.03mg/ml、00.04mg/ml、0.05mg/ml、0.06mg/ml的葡萄糖標準溶液。測定時取1ml各濃度葡萄糖標準溶液加入到20ml具塞比色管中，迅速加入5％苯酚溶液以及98％濃硫酸適量，搖勻后放置于室溫下顯色20min。另取lml蒸餾水，同上加入苯酚溶液和濃硫酸，做空白參比溶液。在指定波長處測定吸光度值，繪制標準曲線，計算標準曲線方程和相關系數(shù)r。準確稱量葡萄糖0.0520g。標準曲線方程為y＝9.0803x-0.0385，相關系數(shù)r值為0.9984，線性較好，線性范圍10.5-63.0ug/ml。
3.7重復性試驗
采用苯酚硫酸法平行取樣品溶液測定5次，得到rsd＝1.18％，說明精密度較高，能滿足定量分析的要求。
3.8加標回收率
分別準確移取靈芝1樣品溶液和靈芝2樣品溶液0.5ml于20ml具塞比色管中，分別準確移取0.005mg/ml、0.010mg/ml、0.015mg/ml的標準溶液，0.5ml加入樣液中，測定多糖含量計算平均回收率。平均回收率為97.64％，rsd為1.2％。回收率高，說明此法結(jié)果準確率高。
4含量測定結(jié)果
分別取靈芝1和靈芝2，平行分成6份，制成靈芝1樣品溶液和靈芝2樣品溶液，按上述方法進行測定，記錄數(shù)據(jù)，結(jié)果取平均值。得到結(jié)果見表1。
表1靈芝多糖含量測定結(jié)果
由表可知，本發(fā)明方法經(jīng)栽培等工藝得的靈芝中多糖的含量較高。靈芝品質(zhì)好。
與現(xiàn)有技術相比，本發(fā)明方法栽培后得到的靈芝的品質(zhì)好，靈芝中的有效成分多糖含量高。
具體實施方式
實施例1。
中藥渣原料：枇杷葉150kg、百部50kg、桔梗100kg、苦參50kg和黃芪50kg。
中藥渣的制備：枇杷葉、百部、桔梗、苦參和黃芪加4倍量沸水，煎煮45min后，過濾，取濾渣，干燥，粉碎成細顆粒，即得。
肥料原料：尿素300kg、氯化銨100kg、硫酸銨100kg、磷酸鉀60kg、鉬酸銨30kg、干雞糞150kg、干牛糞150kg、玉米稈150kg、稻殼70kg、豆餅150kg和中藥渣150kg。
肥料的制備：取尿素、氯化銨、硫酸銨、磷酸鉀、鉬酸銨、干雞糞、干牛糞、玉米稈、稻殼、豆餅和中藥渣粉碎成細顆粒后，混勻，造粒，干燥，即得。
靈芝段木栽培方法：包括以下步驟：
(1)菌材處理：選擇柞樹、楓樹、椴樹、榆樹、千金榆或胡桃楸，截成段，每段長12-17cm，將截成段的段木于90-100℃的蒸汽下滅菌12-14h后，裝入聚乙烯袋中，每袋裝1段，用繩系緊；
(2)接種：無菌狀態(tài)下，將栽培種按每平方米750毫升菌種量接入段木中，接種時間為3月份；
(3)培育菌絲：接好種的段木菌袋要放在溫度為25-30℃，濕度為55-65％條件下培養(yǎng)20天后，對聚乙烯袋刺孔，繼續(xù)培養(yǎng)50天，即得菌絲；
(4)入畦：去掉聚乙烯袋，取出培育有菌絲的段木，置于畦中，畦深10-12cm，寬1.2-1.5m，長1.5-2.0m，段木之間間隔10-12cm，空隙填滿潮濕的細土，然后再覆1-2厘米厚的沙子；
(5)出芝管理：采用干濕管理法，即三天濕，即空氣濕度95％以上，一天偏干，以土壤表面泥土稍發(fā)白為準，每隔15天按每畝150kg肥料進行施肥；
(6)采收：下地35天后即可采收。
實施例2.
中藥渣原料：枇杷葉200kg、百部100kg、桔梗150kg、苦參100kg和黃芪100kg。
中藥渣的制備：枇杷葉、百部、桔梗、苦參和黃芪加5倍量沸水，煎煮50min后，過濾，取濾渣，干燥，粉碎成細顆粒，即得。
肥料原料：尿素350kg、氯化銨150kg、硫酸銨150kg、磷酸鉀100kg、鉬酸銨40kg、干雞糞200kg、干牛糞200kg、玉米稈200kg、稻殼100kg、豆餅200kg和中藥渣200kg。
肥料的制備：取尿素、氯化銨、硫酸銨、磷酸鉀、鉬酸銨、干雞糞、干牛糞、玉米稈、稻殼、豆餅和中藥渣粉碎成細顆粒后，混勻，造粒，干燥，即得。
靈芝段木栽培方法：包括以下步驟：
(1)菌材處理：選擇柞樹、楓樹、椴樹、榆樹、千金榆或胡桃楸，截成段，每段長12-17cm，將截成段的段木于90-100℃的蒸汽下滅菌12-14h后，裝入聚乙烯袋中，每袋裝1段，用繩系緊；
(2)接種：無菌狀態(tài)下，將栽培種按每平方米750毫升菌種量接入段木中，接種時間為3月份；
(3)培育菌絲：接好種的段木菌袋要放在溫度為25-30℃，濕度為55-65％條件下培養(yǎng)22天后，對聚乙烯袋刺孔，繼續(xù)培養(yǎng)52天，即得菌絲；
(4)入畦：去掉聚乙烯袋，取出培育有菌絲的段木，置于畦中，畦深10-12cm，寬1.2-1.5m，長1.5-2.0m，段木之間間隔10-12cm，空隙填滿潮濕的細土，然后再覆1-2厘米厚的沙子；
(5)出芝管理：采用干濕管理法，即三天濕，即空氣濕度95％以上，一天偏干，以土壤表面泥土稍發(fā)白為準，每隔20天按每畝100-200kg肥料進行施肥；
(6)采收：下地40天后即可采收。
實施例3.
中藥渣原料：枇杷葉100kg、百部10kg、桔梗50kg、苦參10kg和黃芪10kg。
中藥渣的制備：枇杷葉、百部、桔梗、苦參和黃芪加3倍量沸水，煎煮40min后，過濾，取濾渣，干燥，粉碎成細顆粒，即得。
肥料原料：尿素250kg、氯化銨50kg、硫酸銨50kg、磷酸鉀10kg、鉬酸銨20kg、干雞糞100kg、干牛糞100kg、玉米稈100kg、稻殼50kg、豆餅100kg和中藥渣100kg。
肥料的制備：取尿素、氯化銨、硫酸銨、磷酸鉀、鉬酸銨、干雞糞、干牛糞、玉米稈、稻殼、豆餅和中藥渣粉碎成細顆粒后，混勻，造粒，干燥，即得。
靈芝段木栽培方法：包括以下步驟：
(1)菌材處理：選擇柞樹、楓樹、椴樹、榆樹、千金榆或胡桃楸，截成段，每段長12-17cm，將截成段的段木于90-100℃的蒸汽下滅菌12h后，裝入聚乙烯袋中，每袋裝1段，用繩系緊；
(2)接種：無菌狀態(tài)下，將栽培種按每平方米750毫升菌種量接入段木中，接種時間為3月份；
(3)培育菌絲：接好種的段木菌袋要放在溫度為25-30℃，濕度為55-65％條件下培養(yǎng)18天后，對聚乙烯袋刺孔，繼續(xù)培養(yǎng)48天，即得菌絲；
(4)入畦：去掉聚乙烯袋，取出培育有菌絲的段木，置于畦中，畦深10-12cm，寬1.2-1.5m，長1.5-2.0m，段木之間間隔10-12cm，空隙填滿潮濕的細土，然后再覆1-2厘米厚的沙子；
(5)出芝管理：采用干濕管理法，即三天濕，即空氣濕度95％以上，一天偏干，以土壤表面泥土稍發(fā)白為準，每隔10天按每畝100-200kg肥料進行施肥；
(6)采收：下地30天后即可采收。