本發明屬于中藥材種植技術領域，尤其涉及一種白及種苗的繁殖方法。

背景技術：

白及[bletillastriata(thunb.exa.murray)rchb.f.]為蘭科白及屬多年生草本植物，植株高18-60cm；假鱗莖扁球形，上面具荸薺似的環帶，富粘性；莖粗壯，勁直；葉4-6枚，狹長圓形或披針形，長8-29cm，寬1.5-4cm，先端漸尖，基部收狹成鞘并抱莖；花序具3-10朵花，常不分枝或極罕分枝；花序軸或多或少呈“之”字狀曲折；花苞片長圓狀披針形，長2-2.5cm，開花時常凋落；花大，紫紅色或粉紅色；萼片和花瓣近等長，狹長圓形，長25-30mm，寬6-8mm，先端急尖；花瓣較萼片稍寬；唇瓣較萼片和花瓣稍短，倒卵狀橢圓形，長23-28mm，白色帶紫紅色，具紫色脈；唇盤上面具5條縱褶片，從基部伸至中裂片近頂部，僅在中裂片上面為波狀；蕊柱長18—20mm，柱狀，具狹翅，稍弓曲；花期4-5月。

白及常野生于丘陵、低山溪邊以及陰蔽草叢或者林下濕地，分布于我國秦嶺以南省區以及日本等地；以塊莖入藥，具有補肺止血、消腫生肌等功效，同時也廣泛應用于醫藥、美容、涂料和印染等行業；近年來，由于需求量大，人工野生白及受到嚴重的私挖濫采，資源量急劇減少，已經列入世界瀕危植物保護物種，且已被《中國植物紅皮書—稀有瀕危植物》第1冊收錄，同時也被寫入了《瀕危野生動植物國際貿易公約》（cites）保護種類。

實際生產中，人工白及栽培長期處于“就地采收—就地留種—就地再栽培”的原始循環狀態，白及品質逐年退化。近年來，由于白及產業發展需求，白及種苗組培技術開始興起并逐步成為白及種苗供應的重要來源，但是白及組培苗死亡率較高、無效苗現象存在、以及生產周期較長等對利用組培苗緩解白及大規模產業化種植產生了一定制約，優化白及組培技術，促進優質種苗供應，將對白及產業健康發展的十分重要。

cn201410666249.6公開了“一種白芨的規模化高產栽培方法”，主要包括種苗的繁殖、煉苗、大田移栽、生長期管理、次年生長期的管理及采收。同時，將微生物技術與生態種植技術相結合，使用em原露能分泌與合成大量的有機酸、氨基酸、酶、活性激素、抗氧化酵素扥，快速的促進植物的生長、分解了藥物的殘留，加快植物的光合作用和新陳代謝，縮短了種植的周期和提高了白芨的產量。

cn20151067431.7公開了“一種無公害白芨的高產栽培方法”，主要利用蘭科根瘤菌或者蘭科菌根菌經過人工培養后的有益共生菌營養液與腐殖土進行繁殖發酵后制得營養土，營養土與種植溝內的土壤混合后，進行組培苗的田地移栽，進而有效的促進了白芨新根的產生和塊莖的肥大，同時使用em防蟲液完全避免了病蟲害的發生。

cn201410364717.4公開了一種“白芨組培育苗方法”，主要由環境消毒、外植體準備、培養基準備、播種、培養室培養、大棚煉苗、林下煉苗、移植大田和收獲九個步驟組成。其主要特征為培養土分為底層培養土和上層培養土，底層植料的制取：挖取松樹林里的腐殖土，添加農家肥及磷酸家和磷肥，使得農家肥及磷酸鉀和磷肥混合漚制一個月形成發酵肥即為底層培養土，培養盤裝好3公分底層培養土后將椰殼粉鋪在底層培養土上面厚3公分即為培養土。

cn201510733897.3公開了“一種白芨組培育苗的方法”，主要包括外植體的準備、外植體放入培養基中的培養和移栽三個步驟，其培養基中瓊脂5g/l、白糖205g/l、6-芐氨基嘌呤為1.5mg/l，萘乙酸為0.1mg/l；培養條件為光照強度1600-2000lux，光照時間為15h/d，培養溫度為24-28℃。

cn201610436028.9公開了“一種白芨組培快繁方法及運用”，主要由外植體的滅菌方法、白及種子無菌萌發、種胚形態及種胚突破種皮過程觀察、白芨的組培快繁和用ttc法測定種子活力。在以ms為基本培養基中添加活性炭0.2g/l，瓊脂7.0g/l，ph5.8，碳源添加量為（30g/l、60g/l），運用此方法出芽快、增殖率高，同時提高了移栽成活率。

cn201611244428.6公開了“一種白芨組培苗移栽馴化技術”，主要是通過將沙土用大鍋炒熱至80℃以上來殺死寄生蟲卵，并將冷卻后的沙土撒入成長至5cm左右高的白芨組培苗瓶中，然后再組培室培養15-30d即完成馴化，這種方式可以不用清洗組培苗，保護了幼苗根部，也節省了人工。

技術實現要素：

本發明的目的就在于提供一種白及優質種苗的繁殖方法，有效提高白及種苗存活率；本方法具有簡單實用、成本低和管理方便的優點，適用于大規模推廣，是一種生產周期短、繁殖率高和成活率高的白及種苗繁殖方法。

為了實現上述目的，本發明采用如下技術方案，具體包括以下步驟。

白及種苗的繁殖方法采用組培繁殖的培育方式；

①種子的采集

a、種源地選擇，b、果莢的選擇，c、采摘，d、保存；

②培養基選定

a、種子萌發誘導培養基，b、白及分化培養基與原球莖誘導培養基，c、生根壯苗培養基；

③育苗

采用種子萌發誘導→誘導芽分化→誘導生根→大棚煉苗的組織培養程序；

a、種子萌發誘導，b、分化增殖培養，c、生根壯苗培養，d、大棚煉苗；

④瓶苗出苗

⑤瓶苗脫瓶及處理

a、煉苗，b、取苗，c、洗苗與分苗，d、消毒，e、晾苗；

⑥馴化苗栽培措施

a、馴化溫棚建設，b、苗床整理，c、土壤配置，d、蓋遮蔭網，e、栽苗,f、水分控制，g、蟲害防治，h、除草；

⑦馴化苗出苗

馴化苗的出苗標準。

與現有技術相比，本發明具有以下優點和積極效果：

①提供了一套白及種苗繁殖方法（組培育苗），避免了塊莖繁殖耗種量大的缺點，同時將白及種子萌發誘導、分化增殖以及生根壯苗的培養條件進行了分別完善，提高了白及組培苗的成活率；

②提供了一套白及馴化苗栽培措施，并提出了馴化苗的馴化棚建設、土壤配置、栽苗處理、水分控制及病蟲害處理等一整套完善的種植方法，提高了馴化苗的成活率；

③規范了白及培養基配方比、瓶苗以及馴化苗出苗標準，有效解決了規?；a中技術及標準缺乏的問題。

附圖說明

圖1.1是瓶苗出苗（瓶內），

圖1.2是瓶苗出苗（瓶外）；

圖2.1是馴化溫棚建設圖片之一，

圖2.2是馴化溫棚建設圖片之二，

圖2.3是馴化溫棚建設圖片之三；

圖3是馴化溫棚苗床整理；

圖4.1是馴化溫棚土壤配置（袋內），

圖4.2是馴化溫棚土壤配置（袋外）；

圖5.1：馴化苗出苗（盆內），

圖5.2：馴化苗出苗（盆外）。

具體實施方式

下面結合附圖和實施例詳細說明：

種苗的繁殖采用組培繁殖的培育方式；

①種子的采集

a、種源地選擇：選擇三年或三年以上種植期的地塊，開花期選擇生長鍵壯、塊莖生長較快的植株，剔除病弱和開雜色花的植株花朵，保留采種植株花朵；

b、果莢的選擇：選擇果實飽滿、成熟度高的果莢，成熟度以表面顏色微黃褐色為宜，淺綠色則成熟度不夠，深褐色則過成熟，裂開的果莢不能使用；

c、采摘：用剪刀輕輕剪下果莢，用水洗凈，自然涼干；

d、保存：將涼干后的果莢用玻璃瓶或塑料瓶包裝，避免擠壓破裂，-20℃低溫保存；

②培養基選定

a、種子萌發誘導培養基

單位：mg/l；

大量元素：nh4no3(1650)，kno3(1900)，cacl2?2h2o(440），mgso4?7h2o(370)，kh2po4(170)；

微量元素：ki(0.83)，h3bo3(6.2)，mnso4?4h2o(22.3)，znso4?7h2o(8.6)，na2moo4?2h2o(0.25)，cuso4?5h2o(0.025)，cocl2?6h2o(0.025)；

鐵鹽：feso4?7h2o(27.8)，na2-edta?2h2o(37.3)；

有機物：肌醇(100)，煙酸(0.5)，鹽酸吡哆醇(0.5)，鹽酸硫胺素(0.1)，甘氨酸(2.0)；

添加物：蔗糖(5%)，ph值(5.5-5.8)，瓊脂粉（0.4%），蛋白胨（0.1%peptone）；

b、分化培養基與原球莖誘導培養基

單位：mg/l；

大量元素：nh4no3(1650)，kno3(1900)，cacl2?2h2o(440），mgso4?7h2o(370)，kh2po4(170)；

微量元素：ki(0.83)，h3bo3(6.2)，mnso4?4h2o(22.3)，znso4?7h2o(8.6)，na2moo4?2h2o(0.25)，cuso4?5h2o(0.025)，cocl2?6h2o(0.025)；

鐵鹽：feso4?7h2o(27.8)，na2-edta?2h2o(37.3)；

有機物：肌醇(100)，煙酸(0.5)，鹽酸吡哆醇（維生素b6）(0.5)，鹽酸硫胺素（維生素b1）(0.1)，甘氨酸(2.0)；

激素：6-ba(0.5)，naa(0.5)；

添加物：蔗糖(5%)，ph值(5.5-5.8)，碳粉(0.05%)，瓊脂粉（0.6%）；

c：生根壯苗培養基

單位：mg/l；

大量元素：h4no3(1650)，kno3(1900)，cacl2?2h2o(440)，mgso4?7h2o(370)，kh2po4(170)；

微量元素：ki(0.83)，h3bo3(6.2)，mnso4?4h2o(22.3)，znso4?7h2o(8.6)，na2moo4?2h2o(0.25)，cuso4?5h2o(0.025)，cocl2?6h2o(0.025)；

鐵鹽：feso4?7h2o(27.8)，na2-edta?2h2o(37.3)；

有機物：肌醇(100)，煙酸(0.5)，鹽酸吡哆醇（維生素b6）(0.5)，鹽酸硫胺素(0.1)，甘氨酸(2.0)；

添加物：蔗糖(3%)，ph值(5.5-5.8)，碳粉(0.05%)，瓊脂粉（0.6%），（30-40g/l土豆汁）；

③育苗

采用種子萌發誘導→誘導芽分化→誘導生根→大棚煉苗的組織培養程序；

a、種子萌發誘導

將采集到的成熟白及蒴果在新潔爾滅溶液中刷洗去灰土，置超凈工作臺上用0.1%升汞消毒10min，再用無菌水沖洗3-5次，將其用滅菌的濾紙吸干水分后，用手術刀切去果實頂部，再從果實中部縱向剖開，將種子均勻撒播到配制好的培養基上，注意稀播，太密不利于后期培養；然后置于室溫28℃，光照強度1500-2000lux，每天光照時間12h的條件下進行培養；

b、分化增殖培養

將誘導培養40d的白及小苗及時轉移到分化壯苗培養基上，在室溫30℃，光照強度1500-2000lux，每天光照時間12h條件下，培養60d，作為生根培養的材料；

c、生根壯苗培養

將分化幼苗轉移到生根壯苗培養基上，在室溫30-35℃，光照強度1500-2000lux，每天光照時間15h條件下繼續培養，一個星期后，小苗迅速生長，假鱗莖也隨之增大，60d后假鱗莖成熟，苗高3-5cm，葉片3-4片；

d、大棚煉苗

將生根培養好的白及小苗帶瓶放置在大棚里，在室溫下適應15-20d，大棚覆蓋75%遮光率的遮蔭網，然后打開瓶蓋繼續煉苗3-5d；

④瓶苗出苗（見圖1.1-1.2）

瓶苗的出瓶標準：老葉與黃葉比率5%-20%，株高5-10cm，植株鮮重不低于0.2g，葉片數≥3，葉長2cm-5cm，葉寬0.5cm，假鱗莖直徑≥0.3cm；根數≥2。

⑤瓶苗脫瓶及處理

a、煉苗：瓶苗到達栽培基地后先放入大棚，連瓶直接放在土表，大棚覆蓋一層75%的遮陰網，移栽前先打開瓶蓋煉苗3d，有助于瓶苗適應外界環境；

b、取苗：從瓶中取苗時要仔細，可用鑷子或鐵絲制的小鉤輕輕取出，不要傷到根莖苗（注：若破瓶取苗，苗上易貼細碎的玻璃渣不易洗凈，栽苗時易劃傷手）；苗取出后用清水洗凈根部殘留的培養基，注意苗在清水中不得超過20min，洗苗時以涮為主，盡量避免傷著小苗；

c、洗苗與分苗：一邊洗苗一邊分苗，分苗時要注意：由于組培瓶內高水分的培養環境和有限的生長空間導致組培苗根脆嫩易斷且纏繞在一起，為避免傷及幼苗，分苗時較難分開的不應強行分開，幾株同栽即可，馴化2—3個月后，苗會自然分開，起苗后，馴化苗根部松軟，極易分開；

d、消毒：洗好的苗馬上浸入800倍的百菌清或多菌靈藥液中消毒，注意只需根部浸入消毒液中，且浸在消毒液中的時間不得超過15秒鐘。

e、晾苗：消毒后的苗擺在硬紙板或報紙上放在陰涼處擺放，擺放30min左右水分略干即可移栽；

⑥馴化苗栽培措施

a、馴化溫棚建設：馴化溫棚選用gp-c825型裝配式鍍鋅鋼管大棚，大棚寬為8m，長度40m，可根據具體地形適當調整；大棚采用“一縱四卡”結構搭建，即一根縱向拉桿加四根卡槽；大棚的整體布局首先考慮南北走向，再考慮沿等高線布局；具體見圖2.1-圖2.3；

b、苗床整理：馴化溫棚內整理5個寬度為1.2m，厚10cm的畦，6個深度為20cm，寬度為30cm的地溝；具體見圖3；

c、土壤配置：土質為沙壤土，將土地深耕幾次，打碎地中的大顆粒，大塊直徑不超過3cm；將50%的細土、40%的鋸末、10%的刨花均勻混合，最終形成厚10cm左右的苗床；具體見圖4.1-圖4.2；

d、蓋遮蔭網：白及瓶苗或馴化苗剛移栽到大田后的3-5個月內不能強光照射，因此瓶苗移栽前要準備好遮陰網；移栽前3個月內一定要遮蓋一層75%的遮陰網，3個月后可視情況去掉遮陰網；

e、栽苗：栽苗前在墑面上按每畝7袋、每袋500克顆粒劑的量撒辛硫磷，瓶苗密植馴化，株行距均為8-10cm，一畝地約栽16-18萬株；瓶苗定植時宜淺不宜深，將根埋沒，假鱗莖深入土中約0.5-1cm，輕輕用土圍上即可，不宜指壓；可在苗床上掏-5cm深的溝，將苗排放入溝內，再一次性蓋土，既提高栽種效率，也不易傷到根；

f、水分控制：移栽后不超過1h即澆定植水，定植水不要一次澆透，可分2-3次澆透；然后用一層75%的遮陰網即時遮蓋，以免太陽強光傷苗，隔2d左右視情況再澆水；接下來注意觀察表土保持濕潤即可，此時種苗周圍土壤環境要以濕潤為主；移栽后20d左右再澆水一次，這時成活下來的苗就基本穩定，20d后要適當控水，以促進生新根，發新芽，且適當干旱有利于新根深入土層吸取營養；30d后不用澆水，保持土壤表層濕潤即可；如雨季來臨，要注意觀察葉片及根部的病害情況，如發現異常應及時處理；

g、蟲害防治：瓶苗移栽后，由于環境濕潤，蝸牛、蛞蝓易發生，要提前撒“蝸凈”或“螺螄?！保ㄓ行С煞轂樗木垡胰┑臍⑾x劑即可）；蟲害較難防治的是地老虎和螻蛄，每畝用90%的晶體敵百蟲200g拌炒香的米糠或麥麩10kg，撒在田間誘殺；

h、除草：白及瓶苗馴化期間一定要注意草害，因白及植株還小，壓不住雜草，故雨季來臨要注意拔草，避免草荒；

苗移栽后3-5個月即馴化成功，即可移栽定植；

注意：瓶苗移栽后一個月內不能施肥，因為苗還弱，容易產生鹽析現象（俗稱燒苗），兩個月后可以適當噴施葉面肥，或者水溶肥，最好是含微量元素的水溶肥；施肥時先試驗再大面積施，以免燒苗。

⑦馴化苗出苗（具體見圖5.1-5.2）

馴化苗出瓶標準：株高≥18cm，植株鮮重不低于2.0g，葉片數≥3，葉長≥14cm，葉寬≥1.5cm，假鱗莖直徑≥0.5cm；根數≥7。