本發明涉及植物組織培養，具體涉及一種寬葉山蒿的組織培養方法。

背景技術：

1、寬葉山蒿(artemisia?stolonifera)別名九牛草，為菊科(compositae)蒿屬(artemisia)多年生草本植物，同屬植物艾(artemisia?argyi?lévl.et?van.)近源種，其干燥葉在一些地區被當做艾葉使用。秋季開花，生于枝梢，夏秋季采全草，春初夏采幼苗，篩絨或曬干用。苦、溫，有小毒，具有溫經止血、散寒止痛的功效，主要用于吐血、衄血、崩漏、經寒不調、宮冷不孕等。寬葉山蒿作為優質灸材資源，具有較高的經濟價值和研究前景，因其種子萌發困難，目前野生種質資源全國分布稀少。因此有必要對其資源進行保護。近年來，寬葉山蒿資源開發有一定規模。在我國江西省建立了一定規模的寬葉山蒿gap種植基地，對寬葉山蒿野生資源保護起到了一定的促進作用。目前寬葉山蒿主要通過根狀莖進行擴繁，由于根狀莖擴繁后代發生性狀分離，不利于優質種質資源保護，因此建立了寬葉山蒿組織快繁體系，為種質資源保護及良種繁育提供保障和技術支撐。

2、目前由于寬葉山蒿母本資源稀少，種子萌發困難，根狀莖繁殖耗時長后代性狀分離嚴重，繁殖數量有限，遠遠滿足不了市場推廣需求，急需組培快繁技術進行種苗擴增。經文獻檢索發現目前尚未有關于寬葉山蒿組培快繁技術的相關報道。試驗表明，現發表的關于蒿屬植物組織快繁方法并不適用寬葉山蒿，易出現外植體污染率高、外植體褐化、培養基發黃、芽生長緩慢、生根時間長、成苗質量差的缺點。

3、為了克服寬葉山蒿組培快繁技術匱乏、解決種子萌發困難的問題。本研究目的在于構建一種高效的寬葉山蒿離體快繁技術體系，有效縮短繁育周期，降低生產種植成本，為寬葉山蒿的引種馴化、種苗繁育、種質資源保護及產業化發展提供了技術保障。

技術實現思路

1、本發明的目的在于至少解決現有技術中存在的技術問題之一，提供一種寬葉山蒿的組織培養方法。

2、本發明的技術解決方案如下：

3、一種寬葉山蒿的組織培養方法，包括以下步驟：

4、s1：選取寬葉山蒿幼嫩莖段作為外植體，并對外植體進行消毒處理；

5、s2：將經s1處理后的幼嫩莖段接種到誘導增殖培養基進行增殖培養，培養至側芽并生長到5-6cm；

6、s3：將s2中生長出的側芽切下，接種至生根培養基中進行生根培養；

7、所述生根培養基中含有活性炭；

8、s4：經s3生根培養后，置于自然光照下煉苗，洗凈根部培養基，移栽至基質中存活。

9、作為本發明的優選方案，步驟s1中，所述消毒處理具體為：

10、將外植體用洗潔精水溶液浸泡，清水反復沖洗后擦干水分，然后在超凈臺內做消毒處理：先乙醇消毒，無菌水沖洗；然后使用hgcl2消毒，無菌水沖洗；繼續naclo消毒，無菌水沖洗；最后植菌清消毒，無菌水反復沖洗。

11、作為本發明的優選方案，步驟s2中，增殖培養具體為：

12、先在25-28℃條件下全暗培養3天，然后置于光照強度為1900-2300lx，培養溫度為25-27℃條件下培養，每天光照8-12小時，培養2周可誘導形成側芽，在該培養基繼續增殖培養，培養至側芽增長至5-6cm。

13、作為本發明的優選方案，步驟s2中，誘導增殖培養基為：ms、0.05-0.2mg/l?6-ba、0.05-0.1mg/l?kt、30g/l蔗糖、4g/l瓊脂，ph值為5.7-5.9。

14、作為本發明的優選方案，步驟s3中，所述生根培養具體為：先在25℃條件下全暗培養2天，然后置于光照強度為2500-3000lx、培養溫度為25℃的條件下培養至生根，每天光照12小時。

15、作為本發明的優選方案，步驟s3中，所述生根培養基為：1/2ms、0.1mg/l?naa、3g/l活性炭、4g/l瓊脂，ph值為5.7-5.9。

16、作為本發明的優選方案，步驟s4中，所述基質包括質量比9:1的營養土、珍珠巖。

17、本發明的有益效果是：本發明具有誘導速度快，耗時短，誘導率高，叢芽生長健壯，生根率高，根系發達，移栽成活率高，生產成本低的優點。此外，適當寬葉山蒿生根培養過程中激素水平并添加少量活性炭，能顯著提高寬葉山蒿移栽煉苗成活率，保持幼苗生長健壯，品質統一。本發明從外植體誘導增殖到移栽煉苗成活僅需60天左右，解決了種子萌發困難，有效縮短了繁育周期，降低了生產種植成本，為寬葉山蒿的引種馴化、種苗繁育、種質資源保護及產業化發展提供了技術保障。

技術特征：

1.一種寬葉山蒿的組織培養方法，其特征在于，包括以下步驟：

2.根據權利要求1所述的一種寬葉山蒿的組織培養方法，其特征在于，步驟s1中，所述消毒處理具體為：

3.根據權利要求1所述的一種寬葉山蒿的組織培養方法，其特征在于步驟s2中，增殖培養具體為：

4.根據權利要求1所述的一種寬葉山蒿的組織培養方法，其特征在于，步驟s2中，誘導增殖培養基為：ms、0.05-0.2mg/l?6-ba、0.05-0.1mg/l?kt、30g/l蔗糖、4g/l瓊脂，ph值為5.7-5.9。

5.根據權利要求1所述的一種寬葉山蒿的組織培養方法，其特征在于，步驟s3中，所述生根培養具體為：先在25℃條件下全暗培養2天，然后置于光照強度為2500-3000lx、培養溫度為25℃的條件下培養至生根，每天光照10-12h。

6.根據權利要求1所述的一種寬葉山蒿的組織培養方法，其特征在于，步驟s3中，所述生根培養基為：1/2ms、0.1-1.0mg/l?naa、3g/l活性炭、4g/l瓊脂，ph值為5.9。

7.根據權利要求1所述的一種寬葉山蒿的組織培養方法，其特征在于，步驟s4中，所述基質包括質量比1-9:1-3的營養土、珍珠巖。

技術總結
本發明公開了一種寬葉山蒿的組織培養方法，涉及植物組織培養技術領域，包括以下步驟：S1：選取寬葉山蒿幼嫩莖段作為外植體，并對外植體進行消毒處理；S2：將經S1處理后的幼嫩莖段接種到誘導增殖培養基進行增殖培養，培養至側芽并生長到5?6cm；S3：將S2中生長出的側芽切下，接種至生根培養基中進行生根培養；所述生根培養基中含有活性炭；S4：經S3生根培養后，置于自然光照下煉苗，洗凈根部培養基，移栽至基質中存活；本發明為實現寬葉山蒿資源的高效利用，大面積擴繁、規模化種植、種苗品質均一提供技術參考；實現了在短時間內獲得大批量品質均一的優質種苗，為寬葉山蒿種質資源保護提供了技術保障。

技術研發人員：李慧,王楚,徐雅,徐揚,王業,黃璐琦
受保護的技術使用者：中國中醫科學院中醫藥健康產業研究所
技術研發日：
技術公布日：2025/4/24