本發(fā)明屬于植物組織培養(yǎng)，具體涉及沙鞭草組織培養(yǎng)快繁方法。

背景技術(shù)：

1、沙鞭草是禾本科沙鞭屬多年生草本植物。沙鞭草營(yíng)養(yǎng)枝發(fā)達(dá)，營(yíng)養(yǎng)期長(zhǎng)，在營(yíng)養(yǎng)繁殖期內(nèi)，粗蛋白質(zhì)和無(wú)氮浸出物含量較高，粗纖維含量亦甚多，是荒漠地區(qū)沙地草場(chǎng)上質(zhì)量中等的多年生牧草，還是良好的固沙植物，在荒漠地區(qū)有較高利用價(jià)值。沙鞭草的傳統(tǒng)育種方法育種年限長(zhǎng)，繁殖慢、繁殖方法單一，因此，研發(fā)適宜沙鞭草快速大量繁殖的組培體系非常重要。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、為解決沙鞭草繁殖育種的問(wèn)題，本發(fā)明提供了一種沙鞭草組織培養(yǎng)快繁方法。本發(fā)明的沙鞭草組織培養(yǎng)快繁技術(shù)能夠突破傳統(tǒng)的育種手段，解決育種年限長(zhǎng)，育種方式單一，繁殖緩慢的問(wèn)題，通過(guò)組培的方法可實(shí)現(xiàn)一年多代的快速繁殖體系，從而解決育種短缺的難題。為此，本發(fā)明采用如下的技術(shù)方案：

2、本發(fā)明的一種沙鞭草組織培養(yǎng)快繁方法，包括下述步驟：

3、（1）沙鞭草種子無(wú)菌處理；

4、（2）發(fā)芽培養(yǎng)：放到接種的發(fā)芽培養(yǎng)基上；所述發(fā)芽培養(yǎng)基是在ms培養(yǎng)基中添加萘乙酸naa、赤霉酸ga3和活性炭ac；

5、（3）誘導(dǎo)培養(yǎng)：下胚軸切1-2厘米放到誘導(dǎo)培養(yǎng)基；所述誘導(dǎo)培養(yǎng)基是在ms培養(yǎng)基中添加生長(zhǎng)素2ad、6-芐基嘌呤6-ba?、萘乙酸naa?和活性炭ac；

6、（4）增殖分化培養(yǎng)：放到增殖分化培養(yǎng)基；所述增殖分化培養(yǎng)基是在改良ms培養(yǎng)基中添加6-芐基嘌呤6-ba、萘乙酸naa、玉米素zt和ac；

7、（5）生根培養(yǎng)：最后放到生根培養(yǎng)基，所述生根培養(yǎng)基是在1/2?ms培養(yǎng)基中添加吲哚丁酸iba和活性炭ac。采用吲哚丁酸可促使根部生長(zhǎng)形成根系。

8、對(duì)于上述所述的方法，其中優(yōu)選的是，所述步驟（1）種子無(wú)菌處理是將沙鞭草種子用75%（v/v）酒精和0.1wt%氯化汞先后浸泡處理。

9、對(duì)于上述所述的方法，其中優(yōu)選的是，所述步驟（2）所述發(fā)芽培養(yǎng)基組成為：ms培養(yǎng)基+naa（0.1-0.5mg/l）+ga3（0.08-0.2mg/l）+ac（0.5-1.5mg/l），更優(yōu)選的組成為：ms培養(yǎng)基+naa?0.3mg/l+ga3?0.1mg/l+ac?1mg/l。

10、對(duì)于上述所述的方法，其中優(yōu)選的是，所述步驟（3）誘導(dǎo)培養(yǎng)基組成為：ms培養(yǎng)基+2ad（0.5-1.2mg/l）+6-ba（0.1-0.5mg/l）+naa（0.1-0.5mg/l）+ac（0.5-1.5mg/l），更優(yōu)選的組成為：ms培養(yǎng)基+2ad?1mg/l+6-ba?0.2mg/l+naa?0.2mg/l+ac?1mg/l。

11、對(duì)于上述所述的方法，其中優(yōu)選的是，所述步驟（4）增殖分化培養(yǎng)基組成為：改良ms培養(yǎng)基（銨氮各減1/10，微鉬減1/10，鈣減1/5）+6-ba（0.2-0.8mg/l）+naa（0.02-0.08mg/l）+zt?0.01mg/l?+ac（0.5-1.5mg/l）。更優(yōu)選的組成為：改良ms培養(yǎng)基（銨氮各減1/10，微鉬減1/10，鈣減1/5）+6-ba?0.5mg/l+naa?0.05mg/l+zt?0.01mg/l?+ac?1mg/l。玉米素占整個(gè)培養(yǎng)基成分的1/5。采用改良ms培養(yǎng)基為基礎(chǔ)，更適合沙鞭草的生長(zhǎng)。另外玉米素zt則更能促進(jìn)沙鞭草細(xì)胞分裂分化。

12、對(duì)于上述所述的方法，其中優(yōu)選的是，所述步驟（5）生根培養(yǎng)基組成為：1/2?ms+iba（0.2-0.8mg/l）+ac（0.1-0.5mg/l），更優(yōu)選的組成為：1/2?ms+iba?0.5mg/+ac?0.2mg/l。

13、優(yōu)選的，對(duì)于上述所述的方法，其中步驟（2）發(fā)芽培養(yǎng)、步驟（3）誘導(dǎo)培養(yǎng)、步驟（4）增殖分化培養(yǎng)、步驟（5）生根培養(yǎng)的培養(yǎng)條件均可以為：23-26℃光照6-8小時(shí)/天，光照強(qiáng)度1000-4000lux。一般的，對(duì)于常見(jiàn)植物光照時(shí)間在12h以上為佳，而發(fā)明人研究發(fā)現(xiàn)，本發(fā)明的光照時(shí)間過(guò)長(zhǎng)并不利于沙鞭草的組培成長(zhǎng)，光照強(qiáng)度則可以3000lux為佳。

14、優(yōu)選的，對(duì)于上述所述的方法，其中步驟（2）發(fā)芽培養(yǎng)、步驟（3）誘導(dǎo)培養(yǎng)的時(shí)間以12-20天為佳15-16天最佳，而步驟（4）增殖分化培養(yǎng)時(shí)間以50-80天為佳60-65天最佳，步驟（5）生根培養(yǎng)時(shí)間以25-40天為佳30-35天最佳。

15、作為一種較為優(yōu)選的技術(shù)方案，本發(fā)明所述的沙鞭草組織培養(yǎng)快繁方法，包括下述步驟：

16、（1）種子無(wú)菌處理：取沙鞭草種子用75%（體積）酒精浸泡10-30s，再用無(wú)菌水沖洗，然后用0.1wt%氯化汞浸泡0.5-2min，再以無(wú)菌水沖洗；

17、（2）發(fā)芽培養(yǎng)：放到接種的發(fā)芽培養(yǎng)基上，于23-26℃光照6-8小時(shí),光照強(qiáng)度1000-4000lux；發(fā)芽培養(yǎng)基組成為：ms培養(yǎng)基+naa?0.3mg/l+ga3?0.1mg/l+ac?1mg/l；

18、（3）誘導(dǎo)培養(yǎng)：下胚軸切1-2厘米放到誘導(dǎo)培養(yǎng)基，于23-26℃光照6-8小時(shí),光照強(qiáng)度1000-4000lux；誘導(dǎo)培養(yǎng)基組成為：ms培養(yǎng)基+2ad?1mg/l+6ba?0.2mg/l+naa?0.2mg/l+ac1mg/l；

19、（4）增殖分化培養(yǎng)：放到增殖分化培養(yǎng)基，于23-26℃光照6-8小時(shí),光照強(qiáng)度1000-4000lux；增殖分化培養(yǎng)基組成為：改良ms培養(yǎng)基+6-ba?0.5mg/l+naa?0.05mg/l+zt0.01mg/l+ac?1mg/l；

20、（5）生根培養(yǎng)：最后放到生根培養(yǎng)基，于23-26℃光照6-8小時(shí),光照強(qiáng)度1000-4000lux；生根培養(yǎng)基組成為：1/2?ms培養(yǎng)基+iba?0.5mg/+ac?0.2mg/l。

21、本發(fā)明的有益效果在于：

22、1.?本發(fā)明的組培快繁技術(shù)不受時(shí)間和空間限制：從一粒種子到發(fā)芽再誘導(dǎo)愈傷，通過(guò)愈傷不斷分化，即可生根，從而可以在較短時(shí)間內(nèi)（約3-4個(gè)月）獲得大量沙鞭草植株，一年可完成多代繁殖，從而滿(mǎn)足育種需求。

23、2.技術(shù)前景：大規(guī)模生產(chǎn)牧草原材料。

24、3.保護(hù)野生資源：通過(guò)組培快繁技術(shù)，可以減少對(duì)野生沙鞭草資源的依賴(lài)，有助于野生植物資源的保護(hù)。

25、4.綜合來(lái)看，沙鞭草組培快繁技術(shù)在促進(jìn)牧草產(chǎn)業(yè)的可持續(xù)發(fā)展、保護(hù)植物資源和推動(dòng)科研方面具有廣泛的應(yīng)用前景。

技術(shù)特征：

1.一種沙鞭草組織培養(yǎng)快繁方法，其特征在于?，包括下述步驟：

2.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述步驟（1）種子無(wú)菌處理是將沙鞭草種子先后用75%酒精和0.1%氯化汞浸泡處理。

3.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，步驟（2）所述發(fā)芽培養(yǎng)基組成為：ms培養(yǎng)基+naa?0.3mg/l+ga3?0.1mg/l+ac?1mg/l。

4.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，步驟（3）所述誘導(dǎo)培養(yǎng)基組成為：ms培養(yǎng)基+2ad?1mg/l+6-ba?0.2mg/l+naa?0.2mg/l+ac?1mg/l。

5.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，步驟（4）所述增殖分化培養(yǎng)基組成為：改良ms培養(yǎng)基+6-ba?0.5mg/l+naa?0.05mg/l+zt?0.01mg/l+ac?1mg/l。

6.如權(quán)利要求5所述的方法，其特征在于，步驟（5）所述生根培養(yǎng)基組成為：1/2?ms培養(yǎng)基+iba?0.5mg/+ac?0.2mg/l。

7.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述步驟（2）、步驟（3）、步驟（4）、步驟（5）的培養(yǎng)條件均為：23-26℃光照6-8小時(shí)/天，光照強(qiáng)度為1000-4000lux。

8.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述步驟（2）、步驟（3）培養(yǎng)時(shí)間為12-20天。

9.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述步驟（4）培養(yǎng)時(shí)間為50-80天。

10.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述步驟（5）培養(yǎng)時(shí)間為25-40天。

技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明公開(kāi)了一種沙鞭草組織培養(yǎng)快繁方法，包括下述步驟：（1）沙鞭草種子無(wú)菌處理；（2）發(fā)芽：放到接種的發(fā)芽培養(yǎng)基上；（3）誘導(dǎo)：下胚軸切1?2厘米放到誘導(dǎo)培養(yǎng)基；（4）增殖分化：放到增殖分化培養(yǎng)基；（5）生根：最后放到生根培養(yǎng)基。本發(fā)明的組培快繁技術(shù)可以在較短時(shí)間內(nèi)獲得大量沙鞭草植株個(gè)體，通過(guò)組培快繁技術(shù)，可以減少對(duì)野生沙鞭草資源的依賴(lài)，有助于野生植物資源的保護(hù)，從而滿(mǎn)足市場(chǎng)對(duì)中草藥原材料的需求，本發(fā)明具有大規(guī)模生產(chǎn)牧草原材料技術(shù)前景。同時(shí)，本發(fā)明沙鞭草組培快繁技術(shù)在促進(jìn)牧草產(chǎn)業(yè)的可持續(xù)發(fā)展、保護(hù)植物資源和推動(dòng)科研方面具有廣泛的應(yīng)用前景。

技術(shù)研發(fā)人員：劉亞玲,馬懷林,馬彩娥,王旗旗,李月宏,朱長(zhǎng)虹,陳睿玨,田廣,張逸敏,苑峰,趙冬蓮,劉俊,張紅紅
受保護(hù)的技術(shù)使用者：內(nèi)蒙古草業(yè)技術(shù)創(chuàng)新中心有限公司
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2025/4/24