專利名稱：一種食用菌液體菌種靜息化保存方法
技術領域：
本發明屬于食用菌液體菌種應用技術領域，具體涉及一種食用菌 液體菌種靜息化保存方法。
背景技術：
食用菌液體菌種是應用發酵設備采用液體培養基發酵生產出的 液體種子，應用液體菌種作為栽培種進行接菌生產可以提高食用菌的 產量和質量，且易于實現食用菌的工業化和標準化生產。但食用菌液 體菌種生產出來后難以保存，生產出的液體菌種必須馬上應用，如果 久放菌絲球繼續生長和分裂，培養基中營養元素被逐漸消耗，液體菌 種的質量逐漸下降，將不能繼續應用于食用菌生產。

發明內容
本發明的目的是提供一種適用性好，工藝簡單，易于掌握的食用 菌液體菌種靜息化保存方法。
為實現上述目的，本發明釆用的技術方案為
保存的方法首先將制備好的食用菌液體菌種離心或過濾收集菌 絲球，然后將菌絲球用清洗緩沖液沖洗l一4次，沖洗后再經離心或 過濾收集菌絲球，把菌絲球懸浮于靜息培養基中培養6-24小時，而 后將其冷藏保存;其中，所述靜息培養基的成分為葡萄糖0.5%-1%，氯 化鈉0. 2%-0. 5%，硝酸銨0.05-1%,氯化鉀0.05-0.15%，硫酸鎂 0. 01%-0. 5%,硫酸亞鐵0. 005°/。-0. 0ly。，余量為水，調整PH值至6. 5-7. 7; 所述清洗緩沖液為滅菌磷酸鹽緩沖液、滅菌硼酸鹽緩沖液或滅菌生理 鹽水。
離心收集菌絲球時離心機轉速為3000r/min—8000r/min,離 心時間為5-30 min。所述清洗菌絲球時的清洗緩沖液為菌液體積的 2-6倍；靜息培養基為菌體體積的1-3倍。所述靜息培養后的菌液冷 藏溫度為l-l(TC，時間為1-6個月。過濾收集菌絲球釆用滅菌紗布或 滅菌尼龍網或滅菌濾紙直接過濾或抽濾。所述滅菌磷酸鹽緩沖液PH 為6. 5-8. 5,滅菌硼酸鹽緩沖液PH為6. 5-8.5。
本發明的優點在于
1. 本發明將食用菌液體菌種經菌絲球收集、沖洗、重懸浮等步驟 處理后冷藏保存，使菌絲球保持靜息化狀態，既保持了液體菌種持久 的活力，也延長了保存時間。
2. 本發明對于常用的食用菌菌種所制作的液體菌種均有效，可利 用面廣，而且適用性好，工藝簡單，易于掌握。3. 本發明所保存的食用菌液體菌種在接種應用時可直接使用接 種槍和自動接種機進行接種，簡便快捷。
4. 釆用本發明的保存方法，菌絲球中的菌種細胞保持靜息化狀
態，只進行微弱的內源代謝，菌種細胞也不分裂，菌種可保持持久的 活力，這樣就使一次發酵制備的食用菌液體菌種能夠長時間保存，改 善了食用菌液體菌種的儲藏條件，提髙了食用菌液體菌種的利用水平。
具體實施例方式
實施例l白色金針菇液體菌種靜息化保存
白色金針菇液體菌種菌絲球的收集白色金針菇液體菌種培養基 組成為玉米粉2%，麩皮2%， KH2PO40. 1%， MgS04 0. 05 %, 10ugVB1 / 100ml以及50ugVB2 / 100ml。發酵條件為搖瓶裝液量70ml / 250ml ， 接種量10%,培^基起始pH為6.5,搖瓶轉速200r/min，培養溫 度28'C,培養時間7d。
將制備好的白色金針菇液體菌種通過離心機離心收集菌絲球， 離心機轉速為3500r/min離心時間為20min;然后用菌絲球清洗緩 沖液沖洗收集的菌絲球2次；將沖洗好的白色金針菇液體菌種菌絲球 通過離心機離心重新收集，離心機轉速為3500r/min離心時間為20 min;將重新收集的已沖洗好的白色金針菇液體菌種菌絲球懸浮于靜 息培養基中培養12小時；而后將懸浮好的液體菌種菌絲球靜息化體 系放于4'C冰箱或冷柜中冷藏保存2-3個月。
所述清洗緩沖液制備相當于白色金針菇液體菌種4倍體積的磷 酸鹽緩沖液，將其在1. 05Kg/cm2壓力下12rC滅菌20min;磷酸鹽緩 沖液、磷酸鹽緩沖液配比(質量百分數)為Na2HP04 0. 2 ， KH2P04 0. 69%, PH7. 5。
所述靜息培養基制備相當于白色金針菇液體菌種1. 5倍體積的 靜息培養基，將其在1. 05Kg/cm2壓力下12rC滅菌20min。靜息培養 基成分配比為葡萄糖0. 5%-1%,氯化鈉0.3%,硝酸銨0.6%,氯化 鉀0. 15%,硫酸鎂0. 05°/。，硫酸亞鐵0. 01%，余量為水，調整PH值至 6. 8-7. 4。
實施例2白靈菇液體菌種靜息化保存
白靈菇液體菌種菌絲球的收集白靈菇液體菌種培養基組成為 蔗糖2. 0%，玉米粉3. 0%，蛋白胨O. 3%,麩皮4. 0%,磷酸二氫鉀 0.3%,硫酸鎂O. 1%，硫酸鈣O. 1%。發酵條件為搖瓶裝液量60ml / 250ml,接種量8%,培養基起始pH為6. 5，搖瓶轉速220r /min, 培養溫度25t:,培養時間7d。
將制備好的白靈菇液體菌種通過離心機離心收集菌絲球，離心 機轉速為4000r/min離心時間為10 min;然后用菌絲球清洗緩沖液菌種菌絲球通過離心 機離心重新收集，離心機轉速為4000r/min離心時間為10 min;將 重新收集的已沖洗好的白靈菇液體菌種菌絲球懸浮于靜息培養基中 培養6小時；而后將懸浮好的液體菌種菌絲球靜息化體系放于l(TC 冰箱或冷柜中冷藏保存1-4個月。
所述清洗緩沖液制備相當于白靈菇液體菌種3倍體積的硼酸鹽 緩沖液，將其在1. 05Kg/cn 壓力下121'C滅菌20min;硼酸鹽緩沖液 配比(質量百分數)為Na2BA .10H20 0. 45%、 H2BO 11. 89%、NaCl 2. 79%， PH7. 0-7. 5。
所述靜息培養基制備相當于白靈菇液體菌種1.2倍體積的靜息 培養基，將其在1. 05Kg/cm2壓力下U5。C滅菌20min;靜息培養基成 分配比為葡萄糖0. 5%-1%,氯化鈉0. 5%，硝酸銨0. 1%,氯化鉀0. 1%， 硫酸鎂O. 05%,硫酸亞鐵O. 01%,余量為水，調整PH值至7. 0-7. 2。
實施例3平菇液體菌種靜息化保存
平菇液體菌種菌絲球的收集平菇液體菌種培養基組成為蔗糖 2%,玉米粉4%,麥麩3%，酵母粉O. 3%， KH2PO40. 25%， MgSO40. 1%。發 酵條件為搖瓶裝液量8Gml/50Gml，接種量10%，培養基起始pH 為6. 4，搖瓶轉速150r/min,培養溫度28'C,培養時間7d。
將制備好的平菇液體菌種通過離心機離心收集菌絲球，離心機 轉速為3000r/min離心時間為30 min;然后用生理鹽水沖洗收集的 菌絲球2次；將沖洗好的平菇液體菌種菌絲球通過離心機離心重新收 集，離心機轉速為3000r/min,離心時間為30 min;將重新收集的 已沖洗好的平菇液體菌種菌絲球懸浮于靜息培養基中培養18小時；
而后將懸浮好的液體菌種菌絲球靜息化體系放于rc冰箱或冷柜中冷
藏保存5-6個月。
所述清洗緩沖液制備相當于平菇液體菌種2倍體積的生理鹽 水，將其在1. 05Kg/cn 壓力下121'C滅菌20min;生理鹽水配比(質 量百分數)為NaCl G. 9%, PH7. 0-7. 2。
所述靜息培養基制備相當于平菇液體菌種2倍體積的靜息培養 基，將其在l. 05Kg/cm2壓力下115X:滅菌20min;靜息培養基成分配 比為葡萄糖O. 5%-1%，氯化鈉O. 4%，硝酸銨O. 05%,氯化鉀0. 12%， 硫酸鎂O. 03%,硫酸亞鐵O. 01%,余量為水，調整PH值至6. 6-7. 0。
實施例4
與實施例l不同之處在于
保存的方法首先將制備好的食用菌液體菌種以8000r/min， 離心時間為5min收集菌絲球，然后將菌絲球用清洗緩沖液沖洗1次， 沖洗后再經8000r/min，離心時間為5 min收集菌絲球，把菌絲球 懸浮于靜息培養基中培養24小時，而后將靜息培養后的菌液冷藏溫度為8'C,時間為1-3個月。其冷藏保存；其中，所述靜息培養基的成 分為葡萄糖0. 8%,氯化鈉0. 2%,硝酸銨1%,氯化鉀0. 05%,硫酸鎂 0. 5%,硫酸亞鐵0. 005%，余量為水，調整PH值至7. 0-7. 7;所述清洗 緩沖液為滅菌生理鹽水。所述清洗菌絲球時的清洗緩沖液為菌液體積 的6倍；靜息培養基為菌體體積的3倍。 實施例5
與實施例1不同之處在于
保存的方法首先將制備好的食用菌液體菌種以過濾收集菌絲 球，然后將菌絲球用清洗緩沖液沖洗l次，沖洗后再經過濾收集菌絲 球，把菌絲球懸浮于靜息培養基中培養IO小時，而后將靜息培養后 的菌液冷藏溫度為2t;,時間為3-5個月。其冷藏保存；其中，所述靜 息培養基的成分為葡萄糖0. 7%，氯化鈉O. 3%，硝酸銨0.55%，氯化 鉀O. 12%，硫酸鎂O. 25%，硫酸亞鐵0.008%,余量為水，調整PH值至 7.0-7.7;所述清洗緩沖液為滅菌生理鹽水。所述清洗菌絲球時的清 洗緩沖液為菌液體積的5倍；靜息培養基為菌體體積的1倍。過濾釆 用滅菌紗布或滅菌尼龍網或滅菌濾紙直接過濾或抽濾。
權利要求
1.一種食用菌液體菌種靜息化保存方法，其特征在于首先將制備好的食用菌液體菌種離心或過濾收集菌絲球，然后將菌絲球用清洗緩沖液沖洗1-4次，沖洗后再經離心或過濾收集菌絲球，把菌絲球懸浮于靜息培養基中培養6-24小時，而后將其冷藏保存；其中，所述靜息培養基的成分為葡萄糖0.5％-1％，氯化鈉0.2％-0.5％，硝酸銨0.05-1％，氯化鉀0.05-0.15％，硫酸鎂0.01％-0.5％，硫酸亞鐵0.005％-0.01％，余量為水，調整PH值至6.5-7.7；所述清洗緩沖液為滅菌磷酸鹽緩沖液、滅菌硼酸鹽緩沖液或滅菌生理鹽水。
2. 按照權利要求1所述的食用菌液體菌種靜息化保存方法，其特 征在于離心收集菌絲球時離心機轉速為3000r/min—8000r/min, 離心時間為5-30 min。
3. 按照權利要求1所述的食用菌液體菌種靜息化保存方法，其特 征在于所述清洗菌絲球時的清洗緩沖液為菌液體積的2-6倍；靜息 培養基為菌體體積的1-3倍。
4. 按照權利要求1所述的食用菌液體菌種靜息化保存方法，其特 征在于:所述靜息培養后的菌液冷藏溫度為1-l(TC,時間為1-6個月。
5. 按照權利要求1所述的食用菌液體菌種靜息化保存方法，其特 征在于過濾收集菌絲球釆用滅菌紗布或滅菌尼龍網或滅菌濾紙直接 過濾或抽濾。
6. 按照權利要求1所述的食用菌液體菌種靜息化保存方法，其特 征在于所述滅菌磷酸鹽緩沖液PH為6.5-8. 5,滅菌硼酸鹽緩沖液 PH為6. 5-8. 5。
全文摘要
本發明屬于食用菌液體菌種應用技術領域，具體涉及一種食用菌液體菌種靜息化保存方法。具體為首先將制備好的食用菌液體菌種離心或過濾收集菌絲球，然后將菌絲球用清洗緩沖液沖洗1-4次，沖洗后再經離心或過濾收集菌絲球，把菌絲球懸浮于靜息培養基中培養6-24小時，而后將其冷藏保存。采用本發明的保存方法，菌絲球中的菌種細胞保持靜息化狀態，只進行微弱的內源代謝，菌種細胞也不分裂，菌種可保持持久的活力，這樣就使一次發酵制備的食用菌液體菌種能夠長時間保存，改善了食用菌液體菌種的儲藏條件，提高了食用菌液體菌種的利用水平。
文檔編號C12N1/14GK101550399SQ20081001088
公開日2009年10月7日 申請日期2008年4月2日 優先權日2008年4月2日
發明者張惠文, 張曉黎, 蘇振成, 蔡穎慧, 阮曉東 申請人:中國科學院沈陽應用生態研究所