專(zhuān)利名稱(chēng)：人對(duì)氧磷酶3基因表達(dá)載體的構(gòu)建及其應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于生物技術(shù)制藥技術(shù)領(lǐng)域。二. 背景技術(shù)對(duì)氧磷酶3 (PON3)是對(duì)氧磷酶基因家族發(fā)現(xiàn)最晚，研究最少的成員。人 PON3基因cDNA全長(zhǎng)1075 bp,其中編碼區(qū)長(zhǎng)1065 bp，編碼354個(gè)氨基酸。基 因表達(dá)產(chǎn)物PON3是分子量約40kDa的糖蛋白，是一種鈣離子依賴(lài)性酯酶，具 有芳香酯酶活性、內(nèi)酯酶活性及抗氧化功能[Lu H Q, W a/.及'oc/iew Wwm^o, 2005， 70: 019-1025]。人PON3主要由肝細(xì)胞合成分泌入血，在血清中98%與HDL結(jié)合， 但血清中PON3的含量?jī)H為PON1的1/50。實(shí)驗(yàn)證明，PON3不僅有抑制HDL 和LDL氧化修飾的作用，而且有更強(qiáng)的抗氧化能力，純化的兔血清PON3在體 外保護(hù)LDL抗銅離子誘導(dǎo)的氧化修飾的能力比PONl強(qiáng)100倍[DraganovDI, 5WCA訓(xùn)，2000, 275: 33435-33442],因此目前大部分的研究集中在PON3降低體內(nèi) 的氧化壓力，防治動(dòng)脈粥樣硬化方面。已有的研究表明，氧化壓力和脂質(zhì)超氧化物的升高是多種肝臟疾病的共同病 理機(jī)制，氧化壓力升高導(dǎo)致活性自由基增加是肝損傷的重要致病因素，因此抗氧 化治療可應(yīng)用于肝損傷防治。我們?cè)l(fā)現(xiàn)肌肉電轉(zhuǎn)移介導(dǎo)外源hPONlQ基因 的表達(dá)與分泌，有效降低了肝臟的氧化壓力，對(duì)四氯化碳誘導(dǎo)的小鼠急性肝損傷 有很好的保護(hù)作用[秦浚川等，專(zhuān)利申請(qǐng)?zhí)?00610097968.6]。由于PON3表現(xiàn)出比 PON1更強(qiáng)的抗氧化作用，且文獻(xiàn)未見(jiàn)PON3應(yīng)用于肝臟疾病預(yù)防的相關(guān)報(bào)道， 我們研究了用轉(zhuǎn)基因表達(dá)來(lái)提高血清PON3的活性以降低氧化壓力，保護(hù)肝臟， 這可能是一種新的防治肝損傷的途徑。四氯化碳單次注射誘導(dǎo)小鼠急性肝損傷是一種廣泛使用的篩選和評(píng)價(jià)保肝 護(hù)肝藥物的模型，本發(fā)明同時(shí)建立了多次隔日注射四氯化碳誘導(dǎo)亞急性肝損傷模型用于評(píng)估電轉(zhuǎn)移hPON3抗肝損傷的效果，此模型與急性肝損傷模型相比更接 近于臨床肝臟疾病的發(fā)生過(guò)程，因此更具有實(shí)際意義。我國(guó)是肝臟疾病高發(fā)國(guó)家，病毒性肝炎、酒精及藥物中毒性肝病等引起的肝 損傷以及隨之而來(lái)的慢性肝纖維化、肝功能衰竭等，己成為最常見(jiàn)疾病之一。傳 統(tǒng)的保肝藥物包括抗氧化劑、內(nèi)源性保護(hù)因子、抗膽汁淤積藥物和部分植物藥等。 但是它們大多具有作用時(shí)間短、起效較慢、需長(zhǎng)期多次用藥等缺點(diǎn)，利用基因治 療的方法導(dǎo)入護(hù)肝基因藥物并使之長(zhǎng)期高效表達(dá)以預(yù)防和治療肝臟疾病己成為 一種有良好應(yīng)用前景的策略。作為基因轉(zhuǎn)移的方法之一，電刺激可介導(dǎo)裸露質(zhì)粒DNA在多種細(xì)胞和組織 中的高效表達(dá)。與病毒載體相比，此技術(shù)具有生物安全性好、實(shí)驗(yàn)步驟簡(jiǎn)單、節(jié) 約成本等諸多優(yōu)點(diǎn)。骨骼肌組織細(xì)胞數(shù)量龐大，易于進(jìn)行各種操作，組成細(xì)胞多 為成熟的多核肌細(xì)胞且更新非常緩慢，供血豐富，蛋白合成能力強(qiáng)，細(xì)胞表達(dá)的 蛋白質(zhì)能正常分泌進(jìn)入血液循環(huán)，這些特征決定了其可作為理想的基因轉(zhuǎn)移的靶 組織[McMahon JM, et al. Biodrugs, 2004， 18: 155-165]。有報(bào)道證明，電刺激介導(dǎo)下外源 基因在骨骼肌組織中的表達(dá)水平比傳統(tǒng)非病毒載體轉(zhuǎn)移方法提高2-4個(gè)數(shù)量級(jí)， 基因最長(zhǎng)可持續(xù)表達(dá)9個(gè)月以上。我們應(yīng)用成都儀器廠生產(chǎn)的YC-2型程控刺激 器，接上不銹鋼針狀電極，摸索了適當(dāng)?shù)碾姶碳?shù)，達(dá)到了較好的電轉(zhuǎn)移效果。 三.發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明需要解決的問(wèn)題是構(gòu)建重組人對(duì)氧磷酶3基因的哺乳動(dòng)物細(xì)胞表達(dá) 載體，利用電刺激介導(dǎo)的方法將其轉(zhuǎn)入小鼠骨骼肌組織高效表達(dá)并通過(guò)自身N 端信號(hào)肽持續(xù)分泌以提高血清PON3的活性，從而作為新型基因藥物對(duì)抗由四氯 化碳誘導(dǎo)的肝細(xì)胞損傷以有效地保護(hù)肝臟。本發(fā)明的技術(shù)方案包括1.重組人對(duì)氧磷酶基因3哺乳動(dòng)物細(xì)胞表達(dá)載體 pCI-hPON3的設(shè)計(jì)與構(gòu)建。2.電刺激介導(dǎo)pCI-hPON3在小鼠骨骼肌中的高效表 達(dá)與分泌。3.重組人PON3作為基因藥物可提高血清hPON3水平，應(yīng)用于防治 肝損傷。1. pCI-hPON3的設(shè)計(jì)與構(gòu)建pCI-hPON3質(zhì)粒的構(gòu)建流程如附圖1所示。以pMD18T-hPON3為模板，用 引物l， 2經(jīng)PCR法擴(kuò)增1065bp的全長(zhǎng)hPON3基因序列，并將其克隆到pCI載體(購(gòu)自Promega公司)的五coR I和Sa/I位點(diǎn)之間，使hPON3基因處于CMV啟動(dòng)子的控制之下，得到重組質(zhì)粒pCI-hPON3。經(jīng)測(cè)序證明，得到的基因序列與設(shè)計(jì)一致。pCI-hP0N3質(zhì)粒用CaCl2法轉(zhuǎn)入大腸桿菌中并進(jìn)行擴(kuò)增，質(zhì)粒大量提取的產(chǎn)率為3.15pg/ml大腸桿菌，OD260/280=1.82。弓I物1: 5 ， AAGAATTCATGGGGAAGCTCGTGGCG 3'引物2: 5'CCGTCGACCTAGAGCTCACAGTACAG3，2.電刺激介導(dǎo)的P0N3骨骼肌表達(dá)將25pl 2pg/W的pCI-hPON3質(zhì)粒注射入10只預(yù)先麻醉的雄性ICR小鼠左 側(cè)脛骨頭肌中。30秒后，將兩根接入電刺激器的針狀電極沿肌纖維方向插入注 射部位兩側(cè)進(jìn)行基因電轉(zhuǎn)移操作，電場(chǎng)參數(shù)見(jiàn)權(quán)利要求2。空載質(zhì)粒對(duì)照組小鼠 肌肉注射相同質(zhì)量的pCI質(zhì)粒并給予相同條件的電刺激，PBS對(duì)照組小鼠僅注射 25pl PBS。各組小鼠注射后每?jī)商熳员{靜脈取血并離心分離5pl血清測(cè)定hPON3 水解二氫香豆素的活性。電轉(zhuǎn)24小時(shí)后，空載質(zhì)粒對(duì)照組和轉(zhuǎn)基因組小鼠分別 取肝臟和電轉(zhuǎn)移部位的肌肉組織10mg提取總RNA，用引物3,4做RT-PCR，以 確定電轉(zhuǎn)的pCI-PON3在肌肉中的表達(dá)。RT-PCR結(jié)果見(jiàn)附圖2。小鼠p-actin的 表達(dá)作為內(nèi)參。引物3: 5 ， ATACTGTGTATCTTTATGTTGTG 3' 引物4: 5'TGAAGCACAGAGCCATTGTTG 3'重組質(zhì)粒pCI-hPON3在電刺激介導(dǎo)下轉(zhuǎn)移進(jìn)入小鼠骨骼肌組織中表達(dá) hPON3蛋白，具有生物活性的hPON3蛋白分泌至血液中。轉(zhuǎn)基因組小鼠血清 PON3活性自注射質(zhì)粒后24小時(shí)起與兩對(duì)照組相比開(kāi)始升高，第8天達(dá)到最高 值(2.40± 0.05U/ml)，接近PBS對(duì)照組血清PON3活性(1.69 ±0.11 U/ml)和pCI對(duì) 照組血清PON3活性(1.69士0.12U/ml)的1.4倍(P<0.05)，高水平的表達(dá)至少可 持續(xù)24天，兩對(duì)照組小鼠血清PON3活性在此期間無(wú)明顯變化，說(shuō)明電擊介導(dǎo) 下hPON3基因可在小鼠骨骼肌組織中持續(xù)表達(dá)并分泌進(jìn)入血液循環(huán)。RT-PCR 結(jié)果顯示，小鼠肝臟表達(dá)的PON3水平與對(duì)照組無(wú)顯著差異，轉(zhuǎn)基因小鼠的肌肉 組織中則有hPON3特異性表達(dá)，空載質(zhì)粒對(duì)照組小鼠肌肉無(wú)表達(dá)，結(jié)果進(jìn)一步 證實(shí)hPON3基因在電刺激介導(dǎo)下在小鼠骨骼肌組織得到了有效表達(dá)，并分泌進(jìn) 入血液循環(huán)，提高了小鼠血清的PON3活性。3. PON3重組質(zhì)粒應(yīng)用于防治肝損傷轉(zhuǎn)基因組小鼠注射重組質(zhì)粒并電刺激2天后，腹腔注射10% CCl4玉米油溶 液(lml/kg b.w.)，以建立小鼠急性肝損傷模型；另取10只同齡同來(lái)源雄性小鼠 每隔一天腹腔注射相同劑量CCU玉米油溶液30天共15次，以建立亞急性肝損 傷模型。同時(shí)急性和亞急性肝損傷組分別取IO只健康同齡同來(lái)源雄性小鼠注射 相同劑量相同次數(shù)四氯化碳作為陽(yáng)性對(duì)照，另10只小鼠注射相同次數(shù)lml /kg b.w.玉米油作為陰性對(duì)照。最后一次注射CC1424小時(shí)后，摘眼球取血并處死小 鼠，測(cè)定各組小鼠血清ALT、 AST水平，肝勻漿丙二醛(MDA)，還原型谷胱甘 肽(GSH)和總抗氧化活性(T-AOC)，并制作肝臟組織切片以觀察肝臟的損傷情況。 急性和亞急性肝損傷CCU對(duì)照組小鼠血清ALT、 AST與正常對(duì)照組相比顯 著升高(P<0.01)，其肝勻漿的MDA水平與正常對(duì)照組相比分別升高了 1.7倍 和2.3倍(P<0.05)，而GSH和T-AOC水平均有顯著降低(P<0.05)。 CCU對(duì) 照組小鼠肝臟組織切片與正常對(duì)照組相比，細(xì)胞壞死面積、空泡、脂滴及水腫等 病理學(xué)改變的比率均顯著增加，說(shuō)明小鼠肝臟的氧化水平升高，急性與亞急性肝 損傷模型分別建立成功。急性肝損傷組注射四氯化碳后，轉(zhuǎn)基因組小鼠與CCl4對(duì)照組相比血清ALT 降低30%， AST降低32。/q，差異顯著(P<0.05);其肝勻漿的MDA水平與CC14 對(duì)照組比降低了 53%,已恢復(fù)接近正常對(duì)照組水平(P〈0.05);而GSH和T-AOC 水平則表現(xiàn)出明顯升高，恢復(fù)至正常水平(P<0.05)。病理學(xué)分析顯示轉(zhuǎn)基因小 鼠肝臟壞死細(xì)胞面積與陽(yáng)性對(duì)照組相比有極顯著的降低，水腫、空泡和脂肪變性 的程度也明顯減輕。亞急性實(shí)驗(yàn)也表現(xiàn)出相同的趨勢(shì)轉(zhuǎn)基因組與CCU對(duì)照組 相比ALT降低了 80%， AST水平降低了 79%， MDA， GSH和T-AOC也均回復(fù) 到了正常對(duì)照組的水平。病理切片顯示，中央小靜脈周?chē)难仔约?xì)胞浸潤(rùn)和肝細(xì) 胞水腫程度明顯減輕，肝細(xì)胞壞死和肝細(xì)胞索結(jié)構(gòu)的紊亂現(xiàn)象已消失。急性肝損 傷組注射四氯化碳后各組小鼠血清ALT、 AST的變化見(jiàn)附圖3;亞急性肝損傷組 ALT、 AST變化見(jiàn)圖4;急性和亞急性小鼠肝臟典型病理切片照片分別見(jiàn)附圖5， 圖6。以上結(jié)果說(shuō)明轉(zhuǎn)基因后，高水平的血清PON3可有效降低肝臟氧化壓力， 對(duì)四氯化碳誘導(dǎo)的急性和亞急性肝細(xì)胞損傷均有較好的保護(hù)作用，因此hPON3 可應(yīng)用于制備預(yù)防和治療肝臟損傷藥物。本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比，其有益效果是本發(fā)明首次以防治肝損傷為目標(biāo)構(gòu)建 人對(duì)氧磷酶3基因的哺乳動(dòng)物細(xì)胞表達(dá)載體pCI-hP0N3，經(jīng)電刺激介導(dǎo)將其導(dǎo)入 小鼠骨骼肌組織中，并獲得分泌性表達(dá)人對(duì)氧磷酶3。腹腔注射四氯化碳建立小 鼠急性和亞急性肝損傷模型后，通過(guò)血清生化指標(biāo)測(cè)定和肝臟組織病理學(xué)分析及 體內(nèi)肝細(xì)胞抗氧化實(shí)驗(yàn)檢測(cè)，證實(shí)轉(zhuǎn)基因表達(dá)的人對(duì)氧磷酶3對(duì)肝細(xì)胞損傷有明 顯的保護(hù)作用。因此本發(fā)明對(duì)防治肝損傷起效較快， 一次給藥可維持藥效時(shí)間較 長(zhǎng)，毒副作用小，成本低廉。四.


圖1人對(duì)氧磷酶基因3哺乳動(dòng)物細(xì)胞表達(dá)載體的構(gòu)建流程2轉(zhuǎn)基因組和對(duì)照組小鼠PON3在肝臟和肌肉中表達(dá)的RT-PCR分析結(jié)果(1) 對(duì)照組小鼠肝臟(2) 轉(zhuǎn)基因組小鼠肝臟(3) 轉(zhuǎn)基因組小鼠肌肉(4) 對(duì)照組小鼠肌肉圖3急性肝損傷造模成功后各組小鼠血清ALT、 AST的變化 圖4亞急性肝損傷造模成功后各組小鼠血清ALT、 AST的變化 圖5急性肝損傷造模后各組小鼠典型肝臟病理學(xué)照片(A) 正常對(duì)照組小鼠(B) CCLj對(duì)照組小鼠(C) 轉(zhuǎn)基因組小鼠圖6亞急性肝損傷造模后各組小鼠典型肝臟病理學(xué)照片(A) 正常對(duì)照組小鼠(B) CCU對(duì)照組小鼠(C) 轉(zhuǎn)基因組小鼠五.具體實(shí)施方式
1.pMD18T-hPON3質(zhì)粒由本室構(gòu)建并保存。以pMD18T-hPON3為模板,.用引物 1 ， 2經(jīng)PCR法擴(kuò)增hPON3全長(zhǎng)基因共1065bp，經(jīng)￡coR I和Sa/I雙酶切后插入 pCI質(zhì)粒的相應(yīng)多克隆位點(diǎn)中。hPON3基因處于CMV啟動(dòng)子的控制之下。經(jīng)測(cè) 序證明，結(jié)果與設(shè)計(jì)序列完全一致(流程見(jiàn)附圖1)。將pCI-hPON3轉(zhuǎn)化用CaCl2法制備的感受態(tài)TOP10大腸桿菌，并按照《分子克隆》第三版的操作流程擴(kuò)增 大腸桿菌，PEG法進(jìn)行質(zhì)粒的大量提取。用紫外分光光度法測(cè)定所提取質(zhì)粒的 純度和產(chǎn)率，并用PBS將質(zhì)粒濃度調(diào)整為2pg"l。所有生化試劑均購(gòu)自Sigma 公司，酶購(gòu)自Takara公司。2. 健康雄性ICR小鼠30只，SPF級(jí)，4-6周齡，體重18-22克，購(gòu)自南京醫(yī)科大 學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心。動(dòng)物隨機(jī)分為3組，分別為轉(zhuǎn)基因組，空質(zhì)粒對(duì)照組和PBS 對(duì)照組，每組10只。實(shí)驗(yàn)前1天按照下節(jié)所述方法測(cè)定各組小鼠血清P0N3水 解二氫香豆素活性的基礎(chǔ)值。實(shí)驗(yàn)前20分鐘各組小鼠腹腔注射巴比妥鈉 300mg/kg b.w.進(jìn)行麻醉。用漢密爾頓注射器將25^12嗎 1的pCI-hPON3質(zhì)粒肌 肉注射入轉(zhuǎn)基因組小鼠的左側(cè)脛骨頭肌中。30秒后，將接入電刺激器連接的兩 根不銹鋼針狀電極插入注射部位兩側(cè)，電極間距0.5cm。電刺激由成都儀器廠生 產(chǎn)的YC-2型程控刺激器發(fā)生，電場(chǎng)參數(shù)為方波，200V/cm,波寬20ms，頻率 為lHz，脈沖數(shù)8?？召|(zhì)粒對(duì)照組小鼠注射相同質(zhì)量的pCI質(zhì)粒并給予相同的電 場(chǎng)刺激。PBS對(duì)照組僅肌肉注射25plPBS。所有小鼠均飼養(yǎng)于SPF級(jí)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 房?jī)?nèi)，自由飲食，環(huán)境溫度22士2。C，濕度45-75%。血清PON3活性的測(cè)定實(shí)驗(yàn)前1天及實(shí)驗(yàn)后的每?jī)商?，用微量采血管自?鼠眥靜脈采血，2000 rpmx10分鐘以分離血清。取5^1血清加入lml反應(yīng)體系并 充分混勻。反應(yīng)體系包括50mMTris/HCl(pH8.0)、 1 mMCaCl2及1 mM 二氫香 豆素。反應(yīng)于37。C水浴中進(jìn)行IO分鐘，加入10(V10.1MEDTA終止。測(cè)定反 應(yīng)液于270nm處的光吸收并通過(guò)水解產(chǎn)物的摩爾消光系數(shù)計(jì)算血清中PON3的 酶活性。使用SPSS軟件的方差分析以及兩兩比較對(duì)各組小鼠血清PON3活性數(shù) 值進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。3. 轉(zhuǎn)基因組小鼠和空載質(zhì)粒對(duì)照組小鼠在電轉(zhuǎn)移實(shí)施24小時(shí)后，分別取肝臟組 織和電轉(zhuǎn)移肌肉部位10mg提取總RNA，并DNaseI消化避免DNA的污染。使 用M-MLV反轉(zhuǎn)錄后用上文提及的引物3,4做RT-PCR反應(yīng)，小鼠(3-actin的表達(dá) 水平為內(nèi)參。PCR反應(yīng)條件如下94°C初始變性5min, 30個(gè)循環(huán)，每個(gè)循環(huán) 94。C變性40s， 50。C退火45s， 72°C延伸lmin，循環(huán)結(jié)束后72°C延伸7min, 保存于-20。C。 1.20/。瓊脂糖凝膠分離鑒定PCR產(chǎn)物。4. 轉(zhuǎn)基因組小鼠注射重組質(zhì)粒并電刺激2天后腹腔注射給予10%四氯化碳玉米油溶液1 ml/kg b.w.誘導(dǎo)急性肝損傷，另取10只同齡同來(lái)源雄性小鼠每隔一天腹腔 注射相同劑量CCl4玉米油溶液30天，以建立亞急性肝損傷模型。同時(shí)急性和亞 急性肝損傷組分別取兩組各10只來(lái)源、性別、周齡相同的小鼠作為對(duì)照。其中 一組腹腔注射相同劑量相同次數(shù)四氯化碳作為陽(yáng)性對(duì)照，另 一組腹腔注射相同劑 量相同次數(shù)玉米油作為正常對(duì)照。最后一次注射CCU24小時(shí)后，將各組小鼠摘 眼球取血并離心分離血清，測(cè)定血清ALT、 AST水平，取肝臟制成勻漿測(cè)定MDA， GSH和T-AOC水平，另剪取肝臟主葉，置于中性福爾馬林溶液中浸泡固定24 小時(shí)，梯度濃度酒精溶液脫水及二甲苯清洗后，石蠟包埋組織塊，并用切片機(jī)切 成厚度為4pm的組織切片。切片用蘇木精和伊紅染色，于倒置顯微鏡下觀察、 拍照并進(jìn)行病理學(xué)分析。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)均采用方差分析以及兩兩比較進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分 析。所有動(dòng)物實(shí)驗(yàn)操作均遵守《江蘇省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物管理?xiàng)l例》。
權(quán)利要求
1.一種應(yīng)用人對(duì)氧磷酶3即hPON3構(gòu)建的在哺乳動(dòng)物細(xì)胞內(nèi)表達(dá)的重組質(zhì)粒，其特征是將PCR擴(kuò)增的hPON3基因克隆于pCI載體的EcoR I和SalI位點(diǎn)之間，使hPON3基因位于CMV啟動(dòng)子的控制之下。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所構(gòu)建的重組質(zhì)粒pCI-hPON3在電脈沖介導(dǎo)下在小鼠骨骼肌 組織中大量表達(dá)并有效分泌至血液的轉(zhuǎn)基因操作方法，其特征是..25^1 2pg/pl 的pCI-hPON3質(zhì)粒肌肉注射入小鼠脛骨頭肌后，將兩根接入電刺激器的不銹鋼 針狀電極插入注射部位兩側(cè)，電場(chǎng)參數(shù)為方波，200 V/cm，波寬20ms，脈沖 次數(shù)8，頻率為lHz。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述重組表達(dá)質(zhì)粒在制備預(yù)防和治療肝臟損傷藥物中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明屬于生物技術(shù)制藥技術(shù)領(lǐng)域。本發(fā)明應(yīng)用人對(duì)氧磷酶3基因(hPON3)構(gòu)建了哺乳動(dòng)物細(xì)胞中表達(dá)的重組質(zhì)粒pCI-hPON3，使用電轉(zhuǎn)移法在小鼠骨骼肌組織中使hPON3得到高效表達(dá)并分泌入血，提高了血清中PON3水平，使小鼠抗氧化壓力的能力加強(qiáng)，有效的防治肝臟損傷。hPON3轉(zhuǎn)基因表達(dá)小鼠血清水解二氫香豆素的活性升高約1.4倍，并可持續(xù)24天。轉(zhuǎn)基因組和正常小鼠分別腹腔注射四氯化碳建立小鼠急性和亞急性肝損傷模型后，轉(zhuǎn)基因組小鼠與CCl₄對(duì)照組相比血清ALT和AST水平顯著降低，肝臟勻漿的丙二醛(MDA)水平降低，還原型谷胱甘肽(GSH)和總抗氧化能力(T-AOC)升高，病理學(xué)切片結(jié)果顯示轉(zhuǎn)基因組小鼠肝細(xì)胞損傷程度明顯低于CCl₄對(duì)照組，表明重組人PON3質(zhì)粒轉(zhuǎn)基因表達(dá)可有效提高血清PON3活性，降低肝臟氧化壓力，可用于肝臟損傷的預(yù)防和治療。
文檔編號(hào)C12N15/87GK101240292SQ20081001969
公開(kāi)日2008年8月13日 申請(qǐng)日期2008年3月12日 優(yōu)先權(quán)日2008年3月12日
發(fā)明者呂海芹, 姜曉玲, 馳 張, 薇 彭, 潔 朱, 秦浚川, 臧宇輝 申請(qǐng)人:南京大學(xué)