專利名稱：：一種靈芝孢子粉納米硒復合物及其制備方法
技術領域：
：本發明涉及一種保健品及其加工方法，確切地說是一種具有醫療保健功能的靈芝孢子粉納米硒復合物及其制備方法。二
背景技術：
：靈芝是祖國中醫藥寶庫中珍貴的藥用植物，古代稱之為"仙草"。孢子粉是在靈芝發育后期，從靈芝菌褶中彈射出來的極微小卵形生殖細胞，它凝聚了靈芝的精華，含有更豐富的多糖肽、腺嘌呤核苷、蛋白質、氨基酸、脂肪酸、維生素、酶、三萜類、有機鍺、微量元素等特殊成份，且更適合人體腸胃直接吸收。孢子粉對人完全沒有毒性，是一種安全可靠的醫療保健品。有關研究結果表明，孢子粉可以迅速提高人體免疫能力、降低血壓、降低血糖、降低膽固醇、改善微循環、避免心腦血管病、寧心安神、促進睡眠、健脾開胃、鎮咳平喘、養顏美容、延年益壽、消除疲勞以及扶正固本的功效。特別是孢子粉中的三萜類、核苷類化合物可以破壞惡性腫瘤細胞特有的端粒酶，抑制其無限增殖及變異細胞生長，切斷腫瘤細胞的DNA鏈，使其失去生長能力，直至凋亡。孢子粉還具有抗放射功能，能減輕或消除放化療引起的白細胞減少，阻止癌細胞轉移，消除癌癥特有的劇痛、提高治療的耐受性，增進食欲、使腫瘤縮小，預防癌癥術后復發。硒是人體必需的微量元素，補硒可有效預防和治療多種疾病。硒具有抗氧化、抗衰老、抗輻射、抗有害重金屬、保護肝臟、免疫調節等方面的作用，對治療肝炎、關節炎、白內障、心血管疾病有顯著作用。硒是人體內抗氧化系統中最重要的酶一谷胱甘肽過氧化物酶的活性中心，其清除自由基效能是維生素E的500倍。特別是硒可以顯著預防基因突變，保護修復細胞，降低肺癌、腸癌、胃癌、血癌等癌癥的發病率，對腫瘤病人的放化療也有明顯的輔助治療作用。因此，硒是人體重要的抗癌因子，被確定為"營養性防癌劑"，有"抗癌之王"之稱。另外，硒對治療愛滋病、預防克山病也有很好的作用。與無機化合態硒和有機硒相比，納米硒具有高安全性及高生物活性的特點。例如在急性毒性(LD50)方面，納米硒為113mg/kg，而無機化合態硒僅為15mg/kg，有機硒為35mg/kg;在生物效應方面，納米硒清除羥自由基的效率為無機化合態硒的5倍，為有機硒的2.5倍。另外，納米硒在低劑量下就可以顯示出抑制腫瘤和免疫調節保健作用。三
發明內容本發明旨在提供一種用于保健、食品、醫藥等領域的靈芝孢子粉納米硒復合物，所要解決的問題是使靈芝孢子粉與納米硒有效復合的制備方法。本發明的思路是將靈芝孢子粉和納米硒的防癌抗癌、預防和治療心腦血管疾病、提高人體免疫能力等作用結合在一起，通過功能協同作用，增強二者的生物學效應。一般情況下，天然靈芝孢子粉中也含有微量硒元素，但由于含量很少，不能發揮其功效。本發明采用一定的方法將具有高效低毒特征的納米硒與靈芝孢子粉復合，所得復合物可以充分發揮納米硒與靈芝孢子粉的生物學功效。所述的靈芝孢子粉是破壁靈芝孢子粉。納米硒是單質態。本發明所稱的靈芝孢子粉納米硒復合物是由破壁靈芝孢子粉與二氧化硒水溶液在還原劑抗壞血酸和添加劑生物膠或者生物寡糖作用下通過混合、反應、干燥后得到的靈芝孢子粉納米硒復合物，復合物中破壁靈芝孢子粉含量0.80.95g/g，納米硒含量10100iig/g。本靈芝孢子粉納米硒復合物的制備方法，以破壁靈芝孢子粉和二氧化硒(Se02)為原料，包括混合、反應和干燥，其特征是二氧化硒水溶液與過量的還原劑抗壞血酸以及添加劑生物膠或者生物寡糖混合、研磨反應至混合物呈紅色(納米硒呈紅色)時加入破壁靈芝孢子粉，混合均勻后真空干燥得到靈芝孢子粉納米硒復合物。在混合添加劑時，可以一次性加在含Se02的混合物中，也可以先部分加在含Se02的混合物中，余量隨破壁靈芝孢子粉一道加入含納米硒的混合物中。混合破壁靈芝孢子粉亦然，即也可以先部分加在含Se02的混合物中，余量再加入含納米硒的混合物中。所述的添加劑選自生物膠或者生物寡糖，生物膠包括瓜爾豆膠、黃原膠或羧甲基纖維素鈉等，生物寡糖包括殼聚糖、殼寡糖或環糊精等。本發明所用還原劑為抗壞血酸，制備時抗壞血酸大大過量。剩余的抗壞血酸自身是一種人體必需維生素，具有抗氧化等營養保健功能。此外，抗壞血酸在產品中具有穩定作用，可以預防靈芝孢子粉有效成分及納米硒被空氣氧化變質。本發明所用的添加劑為生物膠(瓜爾豆膠或黃原膠或羧甲基纖維素鈉)或生物寡糖(殼聚糖或殼寡糖或環糊精)。此類添加劑為天然產物或由天然產物衍生而成，不僅自身具有多種營養保健功能和高的安全性，而且在產品中還具有如下作用(l)吸附和包裹作用可以減少靈芝孢子粉中有效成分孢子油三萜類化合物的揮發，防止納米硒顆粒團聚，使靈芝孢子粉與納米硒均勻、穩定、緊密地結合在一起；(2)懸浮和潤滑作用，可以使產品形成性質穩定、分散均勻的水溶液，有利于人體吸收，且能改善產品口感。本發明的技術方案是通過常溫常壓下的固液反應使靈芝孢子粉與納米硒復合，經過適當處理最終得到組成結構均勻穩定、性能優良的復合物。各步反應均不涉及產物分離過程，只需將水溶劑除去，適合工業化生產。制備復合物時，所用靈芝孢子粉為破壁靈芝孢子粉，所用硒原料為Se(^，通過與還原劑抗壞血酸作用生成單質硒，在添加劑作用下形成分散均勻的納米硒并與靈芝孢子粉復合。制備時，改變原料配比可以調節產品中靈芝孢子粉和納米硒的含量(靈芝孢子粉含量0.800.95g/g;納米硒的含量10100iig/g)。用紅外光譜儀(IR)、紫外光譜儀(UV)測定產物的光譜吸收特征，用掃描電子顯微鏡(SEM)、透射電子顯微鏡(TEM)測定產物的形貌、粒徑大小及分散性，用X射線衍射儀(XRD)測定納米硒的晶型結構。測試結果表明靈芝孢子粉的粒徑在微米量級；納米硒的粒徑為20-50nm，為無定形結構；產物中的靈芝孢子粉的組成和結構沒有發生明顯變化，其粉粒表面吸附有納米硒顆粒和添加劑等。圖1是紅外光譜吸收圖。圖中1為靈芝孢子粉吸收圖，2為本復合物吸收圖。比較1和2，兩者相似，說明本復合物中靈芝孢子粉的主要成分沒有變化。圖2是紫外光譜圖。圖中1為靈芝孢子粉譜圖，2為本復合物譜圖。比較1和2，兩者相似，說明本復合物中靈芝孢子粉的主要成分沒有變化。圖3是納米硒透射電鏡圖。納米硒粒徑2050nm。圖4是納米硒XRD衍射圖。說明納米硒是無定形結構。圖5是靈芝孢子粉掃描電鏡圖。微粒表面光滑。圖6是本復合物掃描電鏡圖。復合物表面粗糙，說明靈芝孢子粉表面復合有納米硒和添加劑。五具體實施例方式(—)復合物制備實施例1、準確稱量0.014gSe02，將其溶解在100ml水中，取2.Oml加入1.0g瓜爾豆膠或黃原膠或羧甲基纖維素鈉，混均后加入1.0g抗壞血酸研磨。待混合物變紅色(納米硒為紅色物質)后再研磨5分鐘。最后向混合物中加入18g靈芝孢子粉混合均勻，真空干燥，即得含硒為10i!g/g、含靈芝孢子粉為0.90g/g的產品。2、準確稱量0.018gSe(^，將其溶解在10ml水中，取1.Oml加入1.Og瓜爾豆膠或黃原膠或羧甲基纖維素鈉，混均后加入1.0g抗壞血酸研磨。待混合物變紅色(納米硒為紅色物質)后再研磨5分鐘。最后向混合物中加入24g靈芝孢子粉混合均勻，真空干燥，即得含硒為50iig/g、含靈芝孢子粉為0.92g/g的產品。3、準確稱量0.027gSe02，將其溶解在10ml水中，取2.Oml將10g靈芝孢子粉潤濕，混合均勻后，邊攪拌邊向該粉狀物噴灑5ml抗壞血酸(含抗壞血酸1.Og)水溶液。反應完全后加入1.Og黃原膠和26g靈芝孢子粉混合均勻，真空干燥，即得含硒為100iig/g、含靈芝孢子粉為0.95g/g的產品。4、準確稱量0.021gSe02，將其溶解在10ml水中，取1.0ml加入1.0g殼寡糖或殼聚糖，混均后加入2.Og抗壞血酸研磨，待混合物變紅色(納米硒為紅色物質)后再研磨5分鐘。最后向混合物中加入27g靈芝孢子粉混合均勻，真空干燥，即得含硒為50iig/g、含靈芝孢子粉為0.90g/g的產品。5、準確稱量0.021gSe(^，將其溶解在10ml水中，取2.0ml加入2.Og殼寡糖或殼聚糖，混均后加入2.Og抗壞血酸研磨，待混合物變紅色(納米硒為紅色物質)后再研磨5分鐘。最后向混合物中加入2.Og瓜爾豆膠或黃原膠或羧甲基纖維素鈉和24g靈芝孢子粉混合均勻，真空干燥，即得含硒為100iig/g、含靈芝孢子粉為0.80g/g的產品。(二)靈芝孢子粉納米硒復合物免疫調節作用動物試驗報告靈芝孢子粉納米硒復合物4g/kg和lg/kg灌胃給藥，能明顯提高小鼠遲發超敏反應強度，提高環磷酰胺所致免疫抑制小鼠胸腺和脾臟重量，提高血清溶血素和凝集素水平，增加環磷酰胺所致的小鼠腹腔巨噬細胞吞噬能力下降，使吞噬指數和吞噬百分率均明顯增加，在相同劑量條件下，作用強度比原樣品(靈芝孢子粉)好。結論上述試驗結果提示，靈芝孢子粉納米硒復合物4g/kg和lg/kg灌胃給藥，能明顯提高正常和環磷酰胺免疫抑制模5型小鼠細胞免疫、體液免疫和非特異性免疫功能，作用強度比非復合的原樣品好。1試驗材料樣一，原樣品(靈芝孢子粉)，棕褐色細粉，批號20090718，臨用前用0.5%羧甲基纖維素鈉(CMC)配制成所需濃度供實驗用。樣二，靈芝孢子粉納米硒復合物，黑褐色細粉(含硒50iig/g、含靈芝孢子粉0.90g/g)，批號20090711，臨用前用0.5%羧甲基纖維素鈉(CMC)配制成所需濃度供實驗用。注射用環磷酰胺(CTX)，規格0.2g/瓶，5瓶/盒，西林瓶包裝，批號20080218，江蘇恒瑞制藥有限公司生產。臨用前用0.9%氯化鈉注射液配制成所需濃度備用。0.9%氯化鈉注射液，浙江平湖莎普愛思制藥有限公司生產，批號050102-2。羧甲基纖維素鈉(CMC)，LR，中國醫藥(集團)上海化學試劑公司，批號F20020306。2，4-二硝基氯苯用丙酮配成1%溶液。綿羊紅細胞脫纖維綿羊血，用生理鹽水洗3次，去處上層白細胞和血小板，制成壓積紅細胞。補體即豚鼠血清，5只豚鼠血清混合物。ICR小鼠，清潔級，雌雄各半，浙江省實驗動物中心提供，動物合格證SCXK(浙)2008-0033。1靈芝孢子粉納米硒復合物對小鼠遲發性超敏反應的影響ICR小鼠50只，雄性，體重24-27g，按體重搭配分成5組，每組10只，按表1所示劑量灌胃給藥，對照組喂0.5%羧甲基纖維素鈉(CMC)，灌胃體積均為0.2ml/10g體重，每天1次，連續14天，第15天小鼠腹部剃毛約3cm*3cm，將1%的2，4-二硝基氯苯丙酮溶液50y1均勻涂抹在脫毛部位皮膚致敏，并繼續給藥，在致敏后第5天將1%的2，4-二硝基氯苯丙酮溶液10iU均勻涂抹于小鼠右耳廓兩面進行攻擊。攻擊后24h，頸椎脫臼處死小鼠，用直徑8mm打孔器在兩耳同樣部位取耳片，稱重，以左右耳重量之差為腫脹度。并解剖取小鼠胸腺及脾臟稱重，分別以每10g小鼠的脾重(mg)和胸腺重(mg)作為脾指數和胸腺指數。表1靈芝孢子粉納米硒復合物對小鼠遲發超敏反應的影響(^士SD，n=10)<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>和對照組比較，*p<0.05，**p<0.01遲發超敏反應主要由T細胞介導，其強度主要反映機體的細胞免疫水平。本實驗結果顯示原樣品大劑量能明顯提高小鼠遲發超敏反應強度，小劑量組的遲發超敏強度也略有增高，但無統計意義，有一定劑量關系。納米硒靈芝孢子粉大、小劑量均能明顯提高小鼠遲發超敏反應強度，且作用強度高于原樣品。但原樣品和納米樣品對正常小鼠免疫器官脾臟和胸腺的重量均無明顯影響。2靈芝孢子粉納米硒復合物對體液免疫功能的影響ICR小鼠60只，雄性，體重20-23g，按體重搭配分成6組，每組10只，按表-2所示劑量灌胃給藥，每天1次，第8天除正常對照組外，其余各組在給藥后約2小時腹腔注射環磷酰胺(20mg/kg)，第9天所有各組給藥后約2小時腹腔注射20%羊紅細胞0.2ml/只免疫動物。免疫后第5天，股動脈放血處死小鼠，分離血清，文獻方法測定血清溶血素和血清凝集素水平。并解剖取脾臟和胸腺稱重，計算脾指數和胸腺指數。表-2靈芝孢子粉納米硒復合物對小鼠免疫臟器、溶血素及凝集素水平的影響(;土SD，n=10)<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>和模型組比較，*p<0.05，**p<0.01表-2結果顯示，原樣品大劑量組能明顯提高環磷酰胺所致免疫抑制小鼠胸腺和脾臟重量，提高血清溶血素和凝集素水平，小劑量組明顯提高凝集素水平趨勢，對胸腺和脾臟重量及血清溶血素水平也有促進提高的趨勢，劑量關系明確。納米硒樣品大、小劑量均能顯著提高小鼠胸腺和脾臟重量，提高血清溶血素和凝集素水平，作用強度高于原樣品.3靈芝孢子粉納米硒復合物對正常小鼠腹腔巨噬細胞吞噬能力的影響ICR小鼠60只，雄性，體重22-24g，按體重搭配分成6組，每組10只，按表3所示劑量灌胃給藥，每天1次，連續IO天，最后一次給藥后1小時，腹腔注射2.5%的雞紅細胞懸液1.0m1/鼠，輕揉腹部1分鐘，3小時后脫頸椎處死小鼠，吸取腹腔內液體0.5ml滴于玻片上，在37t:培養箱內孵育30分鐘使巨噬細胞貼壁，自來水沖去未貼壁細胞，涼干，丙酮_甲醇溶液(1:1)固定5分鐘，Giemsa-Wright混合染色，鏡下計數100個巨噬細胞，計算巨噬細胞吞噬指數和吞噬百分率。吞噬百分率=吞噬有雞紅細胞的巨噬細胞數/100個巨噬細胞*100%吞噬指數=被吞噬的雞紅細胞總數/100個巨噬細胞*100%表-3靈芝孢子粉納米硒復合物對小鼠腹腔巨噬細胞吞噬能力的影響(5±SD，n=10)劑量吞噬百分率吞噬指數組另ug/kg%%正常對照組058±1479±24環磷酰胺模型(20mg/kg)34±1042±17原樣品447±11*64±16*原樣品140±1356±18納米靈芝孢子粉451±15**69±20**納米靈芝孢子粉146±11*60±15*和模型組比較，*p<0.05，**p<0.01靈芝孢子粉納米硒復合物明顯增加環磷酰胺所致的小鼠腹腔巨噬細胞吞噬能力下降，使吞噬指數和吞噬百分率均明顯增加，作用強度比原樣品高。小結遲發超敏反應主要由T細胞介導，其強度主要反映機體的細胞免疫水平。血清溶血素和凝集素水平代表機體特異性體液免疫功能，而腹腔巨噬細胞吞噬能力、胸腺和脾臟等棉免疫器官重量則反應機體的非特異免疫功能。上述研究結果顯示，靈芝孢子粉納米硒復合物4g/kg和lg/kg灌胃給藥，能明顯提高正常和環磷酰胺免疫抑制模型小鼠細胞免疫、體液免疫和非特異性免疫功能，劑量關系明確。作用強度比非復合的原樣品好。8權利要求一種靈芝孢子粉納米硒復合物，其特許在于本復合物由破壁靈芝孢子粉與二氧化硒水溶液在抗壞血酸和生物膠或者生物寡糖作用下通過混合、反應、干燥而得到的靈芝孢子粉納米硒復合物，復合物中破壁靈芝孢子粉含量0.8～0.95g/g，納米硒10～100μg/g。2.如權利要求書1所述的靈芝孢子粉納米硒復合物的制備方法，以破壁靈芝孢子粉和二氧化硒為原料，包括混合、反應和干燥，其特征在于二氧化硒水溶液與過量的還原劑抗壞血酸以及添加劑生物膠或者生物寡糖混合、研磨反應至混合物呈紅色時加入破壁靈芝孢了粉，混合均勻后真空干燥得到靈芝孢子粉納米硒復合物。3.根據權利要求2所述的制備方法，其特征在于所述的生物膠選自瓜爾豆膠、黃原膠或羧甲基纖維素鈉。4.根據權利要求2所述的制備方法，其特征在于所述的生物寡糖選自殼聚糖、殼寡糖或環糊精。全文摘要一種靈芝孢子粉納米硒復合物是由破壁靈芝孢子粉與二氧化硒水溶液在還原劑抗壞血酸和添加劑生物膠或生物寡糖作用下通過混合、還原反應和真空干燥得到的靈芝孢子粉納米硒復合物。復合物中破壁靈芝孢子粉含量0.8～95g/g，納米硒10～100μg/g。本復合物將靈芝孢子粉和納米硒的防癌抗癌、預防和治療心腦血管疾病、提高人體免疫能力等作用結合在一起，通過功能協同作用，增強了二者的生物學效應，特別適用于保健、食品、醫藥等領域。文檔編號A23L1/29GK101721435SQ20091018588公開日2010年6月9日申請日期2009年12月10日優先權日2009年12月10日發明者余春富,吳杰穎,張勝義,田玉鵬,蔣幫銅,金葆康申請人:安徽大學