專利名稱：一種新型的細菌限制型培養基的制作方法
技術領域：
本發明涉及一種新型的細菌限制型培養基，適合于培養大腸桿菌，志賀氏菌，耶爾森氏菌等多種兼性厭氧型革蘭氏陰性細菌。本培養基各種營養成分根據細菌生長所需的最低營養進行調配，既可以使細菌得到充足的營養物質，又可以通過缺失一個或多個成分而設立細菌生長的營養壓力條件，從而廣泛適用于實驗室中有關微生物營養需求、代謝、分類鑒定、生物量測定、菌中選育及遺傳分析等多種領域。
背景技術：
細菌的生長需要從外界獲取營養物質，這些營養物質主要以有機和無機化合物的形式為微生物所利用，也有小部分以分子態的氣體形式被利用。根據營養物質在機體中生理功能的不同，可以將他們分為碳源、氮源、無機鹽、生長因子和水五大類。培養基是人工配置，適合微生物生長繁殖或產生代謝產物的營養物質，已有細菌培養基的種類繁多，對細菌的生長繁殖作用不一常用的LB、麥芽汁培養基等天然培養基雖然營養成分豐富，但重復性差，不適合實驗室的定量分析；而常用的合成培養基又不能根據實際需要變換營養成分，或者變換成分后細菌就不在生長。因此，實驗人員希望能有一種重復性強、每種成分都可以根據需要進行調節、細菌生長速度不會受到很大影響的培養基能夠問世。本 發明的目的在于提供一種能克服已有產品不足的細菌限制型培養基，具有穩定性好、便于重復、細菌生長速度快、所有成分可依照需要調節等特點。發明內容本發明的要點在于選擇合適的組分進行合理混配，經pH調節、過濾除菌而成的一種新型的細菌限制型培養基。本發明所涉及的配方包含五大類基本營養要素碳源、氮源、無機鹽、生長因子和水。碳源是在微生物生長過程中為微生物提供碳素來源的物質，它們在細胞內經過一系列復雜的化學變化后成為微生物自身的細胞物質和代謝產物，并且通常碳源物質也是微生物的能源物質。細菌對碳源物質具有選擇性，糖類是一般微生物較容易利用的良好碳源和能源物質；此外，有機酸、醇、脂類、CO2及碳酸鹽等也可作為微生物利用的碳源物質。在本發明中，我們采取了微生物最易采用的葡萄糖酸鉀作為主要的碳源物質，并配以檸檬酸以保障培養基中碳源的充足。為微生物提供氮素來源的是氮源物質，這類物質主要用來合成細胞中的含氮物質，一般不能作為能源。能被微生物利用的氮源物質包括蛋白質及其不同程度的降解產物(胨、肽、氨基酸等)、銨鹽、硝酸鹽、嘌呤、嘧啶等。大分子的蛋白質通常要被進一步降解成小分子的肽和氨基酸后才能被微生物吸收利用，以此在本發明中，我們采用了 20種最易被細胞利用的左旋氨基酸直接作為氮源物質，并配以銨鹽以使細菌可以用最快的速度開始生長繁殖。無機鹽是為細菌的生命活動提供除碳、氮源之外的各種重要元素，是微生物生長必不可少的一類營養物質，它們在機體的生理功能主要是作為酶活性中心的組成部分、維持生物大分子和細胞結構的穩定性、調節并維持細胞的滲透壓平衡、控制細胞的氧化還原電位和作為某些微生物生長的能源物質等。微生物生長所需的無機鹽一般有磷酸鹽、硫酸鹽、氯化物以及含有鈉、鉀、鈣、鎂、鐵等金屬元素的化合物。根據細菌生長的基本所需，本發明中采用的無機鹽成分有K2HP04、MnCl2、Na2S203、葡萄糖酸鉀、CaCl2、FeSO4, MgCl2等，這些成分也可以根據人為需要進行調整，從而進行細菌的營養壓力實驗。生長因子通常指那些微生物生長所必須而且需要量很小，但微生物自身不能合成或合成量不足以滿足機體生長需要的有機化合物，最早發現的生長因子在化學本質上都是維生素。維生素在機體中所起的作用主要是作為酶的輔基或輔酶參與新陳代謝。本發明采用了硫胺素(VBl)、DL-泛酸鈣(VB5)、D-生物素(VH)這三種維生素作為培養基中的生長因子。
除了選擇適宜的營養物質，培養基的配置還需要考慮到pH條件的控制和營養物質濃度及合適的配比。每種微生物對最適pH的要求不同，以鼠疫耶爾森氏菌為例，最適pH為7. 2，為了控制培養基的pH值，我們在配比各成分后用NaOH或者HCl進行條件，然后加入pH緩沖液HEPES，以保證在細菌培養的過程中產酸產氣不會過多的影響培養基的pH值。本發明產品的制備方法是(I)按配比將所述組分10X鹽溶液、2X穩定氨基酸溶液、IOX維生素溶液、100XHEPESU00X葡萄糖酸鉀、100 X L-色氨酸、50 X L-天冬酰胺、50 X L-谷氨酰胺、100 X CaCl2溶液及IOOXFeSO4溶液混合，并攪拌均勻；(2)用NaOH或者鹽酸調節溶液pH至7. 2 ;(3)加入Na2S2O3,補充去離子水至最終體積IOOml ；(4)無菌濾器過濾除菌，4°C儲存。本發明同已有的細菌培養基相比具有如下優點(I)根據細菌生長所需的基本營養物質進行調配，可以使細菌得到充足的營養物質從而快速生長；(2)重復性強，可進行各種元素的準確定量；(3)每種成分都可以根據需要進行調節，可以通過缺失一個或多個成分，方便快捷地設立細菌生長的營養壓力條件；(4)廣泛適用于實驗室中有關微生物營養需求、代謝、分類鑒定、生物量測定、菌中選育及遺傳分析等多種領域；(5)穩定性好，儲存液可以保存半年以上；(6)對人體無毒、無刺激，無腐蝕性、無不良氣味。
具體實施方式
下面結合實施例對本發明作進一步的詳細說明按照下表所列數據及其所屬步驟進行配置I.鹽溶液(10 X 儲存液)IOOml
成份(分子量)IOx儲存液濃度終濃度配置IOOOml
_mmol/L (用量g)_(mmol/L)_所需質量_
K2HPO43.H2O (228.22) 25 (0.57055)2.50.57055檸檬酸Η2θ(210.14) 100 (2.1014) 10.0 2.1014NH4C1 (53.49) 100 (0.5349) 10.0 0.5349MnCk.4 H2O (197.92)_0.1 (0.00198)_OOl_0.00198_2. IOX 維生素儲存液(IOOml)
權利要求
1.本發明涉及一種新型的細菌限制性培養基，其特征在于具有如下的配方10X鹽溶液、2X穩定氨基酸溶液、IOX維生素溶液、100XHEPESU00X葡萄糖酸鉀、100XL-色氨酸、50 X L-天冬酰胺、50 X L-谷氨酰胺、100 X CaCl2溶液及100 XFeS04溶液以一定比例進行混合。
2.—種權利要求I所述細菌限制性培養基的制備方法，其特征在于具有如下步驟 (1)按配比將所述組分10X鹽溶液、2X穩定氨基酸溶液、IOX維生素溶液、100XHEPESU00X葡萄糖酸鉀、100 X L-色氨酸、50 X L-天冬酰胺、50 X L-谷氨酰胺、100XCaC12溶液及100XFeS04溶液混合，并攪拌均勻； (2)用NaOH或者鹽酸調節溶液pH至7.2 ; (3)加入Na2S203，補充去離子水至最終體積IOOml； (4)無菌濾器過濾除菌，4°C儲存。
全文摘要
本發明涉及一種新型的細菌限制型培養基。此培養基適合于培養大腸桿菌，志賀氏菌，耶爾森氏菌等多種兼性厭氧型革蘭氏陰性細菌。本培養基各種營養成分根據細菌生長所需的最低營養進行調配，既可以使細菌得到充足的營養物質，又可以通過缺失一個或多個成分而設立細菌生長的營養壓力條件；相比傳統的天然培養基，本培養基具有重復性強，對細菌生長所需的所有微量元素都能嚴格控制等優點，可以應用于實驗室中有關微生物營養需求、代謝、分類鑒定、生物量測定、菌中選育及遺傳分析等多種領域。
文檔編號C12R1/19GK102952763SQ20111025192
公開日2013年3月6日 申請日期2011年8月30日 優先權日2011年8月30日
發明者張洪濤, 曲奕 申請人:張洪濤, 曲奕