專利名稱：小分子化合物tws119作為神經(jīng)干細(xì)胞分化誘導(dǎo)劑的新應(yīng)用的制作方法
小分子化合物TWS119作為神經(jīng)干細(xì)胞分化誘導(dǎo)劑的新應(yīng)用技術(shù)領(lǐng)域
本發(fā)明所涉及的是再生醫(yī)學(xué)和細(xì)胞生物學(xué)領(lǐng)域，具體涉及TWS119作為誘導(dǎo)哺乳動(dòng)物神經(jīng)干細(xì)胞向神經(jīng)元分化的誘導(dǎo)劑的新應(yīng)用。
背景技術(shù)：
神經(jīng)干細(xì)胞(neural stem cells, NSCs)存在于胚胎和成年哺乳動(dòng)物的中樞神經(jīng)系統(tǒng)，具有自我更新和多向分化潛能，能分化為各種神經(jīng)細(xì)胞，如神經(jīng)元、少突膠質(zhì)細(xì)胞以及星形膠質(zhì)細(xì)胞等，為中樞神經(jīng)系統(tǒng)損傷、神經(jīng)系統(tǒng)變性疾病或遺傳性代謝疾病、神經(jīng)退行性疾病等提供了新的治療策略。中樞神經(jīng)系統(tǒng)損傷后，大部分NSCs分化為膠質(zhì)細(xì)胞，在損傷部位形成膠質(zhì)瘢痕，阻礙了軸突生長(zhǎng)，使損傷不能修復(fù)。因此，提高NSCs向神經(jīng)元的分化比例成為神經(jīng)科學(xué)研究的熱點(diǎn)。
目前，國(guó)內(nèi)外通用的體外誘導(dǎo)NSCs增殖分化的方法是給予絲裂原，如堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子(basic fibroblast growth factor, bFGF)及表皮生長(zhǎng)因子(epidermal growth factor,EGF)等,干預(yù)維持培養(yǎng)的神經(jīng)干細(xì)胞,使其處于增殖狀態(tài),除去絲裂原并添加含胎牛血清的培養(yǎng)基后，誘導(dǎo)NSCs進(jìn)行分化，但這種方法所得到的分化細(xì)胞主要是膠質(zhì)細(xì)胞，神經(jīng)元比例較低。
TWSl 19 (3-[[6-(3-氨基苯基)-7H-吡咯并[2，3_D]嘧啶_4_基]氧基]苯酚)是一種小分子有機(jī)化合物，最早是美國(guó)Scripps Research Institute的Wu等在2002年合成的[Wu，X. et al J. Am. Chem. Soc. (2002) 124,14520-14521]。TffSl 19 的結(jié)·構(gòu)式如下
權(quán)利要求
1.TWS119(4，6-二取代吡咯[2，3-d]嘧啶)作為誘導(dǎo)哺乳動(dòng)物神經(jīng)干細(xì)胞向神經(jīng)元分化的誘導(dǎo)劑的新應(yīng)用。
2.誘導(dǎo)哺乳動(dòng)物神經(jīng)干細(xì)胞向神經(jīng)元分化的細(xì)胞培養(yǎng)基，其特征在于所述細(xì)胞培養(yǎng)基中含有誘導(dǎo)劑TWS119。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的誘導(dǎo)哺乳動(dòng)物神經(jīng)干細(xì)胞向神經(jīng)元分化的細(xì)胞培養(yǎng)基，其特征在于所述細(xì)胞培養(yǎng)基中含有濃度為200 500nM的誘導(dǎo)劑TWSl 19。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的誘導(dǎo)哺乳動(dòng)物神經(jīng)干細(xì)胞向神經(jīng)元分化的細(xì)胞培養(yǎng)基，其特征在于所述細(xì)胞培養(yǎng)基中含有濃度為350nM的誘導(dǎo)劑TWSl 19。
5.根據(jù)權(quán)利要求2、3、4之任一權(quán)利要求所述的誘導(dǎo)哺乳動(dòng)物神經(jīng)干細(xì)胞向神經(jīng)元分化的細(xì)胞培養(yǎng)基，其特征在于所述細(xì)胞培養(yǎng)基中還含有胎牛血清。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的誘導(dǎo)哺乳動(dòng)物神經(jīng)干細(xì)胞向神經(jīng)元分化的細(xì)胞培養(yǎng)基，其特征在于所述細(xì)胞培養(yǎng)基中還含有體積百分濃度為5 20%的胎牛血清。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的誘導(dǎo)哺乳動(dòng)物神經(jīng)干細(xì)胞向神經(jīng)元分化的細(xì)胞培養(yǎng)基，其特征在于所述細(xì)胞培養(yǎng)基中還含有體積百分濃度為10%的胎牛血清。
8.權(quán)利要求2所述的誘導(dǎo)哺乳動(dòng)物神經(jīng)干細(xì)胞向神經(jīng)元分化的細(xì)胞培養(yǎng)基的制備方法，包括以下步驟a.DMEM/F12基礎(chǔ)培養(yǎng)液的制備取制備DMEM/F12基礎(chǔ)培養(yǎng)液IL用量的DMEM/ F12(l I)干粉I袋、谷氨酰胺2. 5g，用濃度為O. lmol/L、pH值為7. 35的磷酸鹽緩沖液即 PBS溶解并稀釋至1L，調(diào)節(jié)pH值為7. 5，用O. 2um微孔濾膜過(guò)濾除菌，即得；b.細(xì)胞培養(yǎng)基的制備按照制備IOOml細(xì)胞培養(yǎng)基計(jì)，將誘導(dǎo)劑TWSl19 (200 500nM) 加入步驟a制得的DMEM/F12基礎(chǔ)培養(yǎng)液70ml使溶解，用O. 2um微孔濾膜過(guò)濾除菌后，加入胎牛血清5 20ml、青霉素與鏈霉素的混合液(即由濃度為4萬(wàn)U/ml的青霉素溶液、濃度為4萬(wàn)U/ml的鏈霉素溶液按1:1混合而成)的溶液1ml，最后用DMEM/F12基礎(chǔ)培養(yǎng)液定容至100ml，即得。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的誘導(dǎo)哺乳動(dòng)物神經(jīng)干細(xì)胞向神經(jīng)元分化的細(xì)胞培養(yǎng)基的制備方法，其特征在于步驟b中誘導(dǎo)劑TWSl 19的終濃度為350nM。
10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的誘導(dǎo)哺乳動(dòng)物神經(jīng)干細(xì)胞向神經(jīng)元分化的細(xì)胞培養(yǎng)基的制備方法，其特征在于步驟b中誘導(dǎo)劑TWSl 19的終濃度為350nM，胎牛血清的加入量為10ml。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了TWS119(4，6-二取代吡咯[2，3-d]嘧啶)作為誘導(dǎo)哺乳動(dòng)物神經(jīng)干細(xì)胞向神經(jīng)元分化的誘導(dǎo)劑的新應(yīng)用，公開(kāi)了一種誘導(dǎo)哺乳動(dòng)物神經(jīng)干細(xì)胞向神經(jīng)元分化的細(xì)胞培養(yǎng)基，含有誘導(dǎo)劑TWS119，并且提供了此種細(xì)胞培養(yǎng)基的制備方法；實(shí)驗(yàn)證實(shí)在哺乳動(dòng)物神經(jīng)干細(xì)胞分化培養(yǎng)基中加入誘導(dǎo)劑TWS119后，神經(jīng)干細(xì)胞向神經(jīng)元分化的比例明顯提高，特別是當(dāng)TWS119濃度為350nM時(shí)效果最佳。含有TWS119的細(xì)胞培養(yǎng)基可誘導(dǎo)哺乳動(dòng)物神經(jīng)干細(xì)胞向神經(jīng)元分化，具有潛在的臨床應(yīng)用價(jià)值。
文檔編號(hào)C12N5/0793GK103031274SQ20111029114
公開(kāi)日2013年4月10日 申請(qǐng)日期2011年9月30日 優(yōu)先權(quán)日2011年9月30日
發(fā)明者田杰 申請(qǐng)人:北京清美聯(lián)創(chuàng)干細(xì)胞科技有限公司