專利名稱：小鼠脂肪干細胞培養液的制作方法
小鼠脂肪干細胞培養液本發明涉及干細胞的培養液，尤其涉及一種小鼠脂肪干細胞培養液。 [背景技術]脂肪干細胞具有多向分化的潛能，在體外可定向分化為脂肪、成骨、軟骨、肝臟、心肌細胞等，在人源方面，相比于骨髓干細胞，其具有取材容易、獲取量大、減少供體取材時痛苦的優點，因此在再生醫學上具有重要的意義。小鼠作為一個重要的模式動物，在基礎研究方面有著廣泛的應用，但是較好維持小鼠脂肪干細胞的體外長期培養卻一直是個難題，雖然目前也有報道的培養液，但是除了基礎成分外，額外添加的小因子成分復雜，有關文獻報道其添加的小因子有表皮生長因子 (EGF)、亞油酸-牛血清白蛋白、β-巰基乙醇、胰島素、轉鐵蛋白、亞硒酸、血小板衍生因子 (PDGF)等成分，而且造成了很高的成本。本發明要解決的技術問題是提供一種成分簡單、成本較低的小鼠脂肪干細胞培養液。為了解決上述技術問題，本發明采用的技術方案是，一種小鼠脂肪干細胞培養液， 其組成成分為胎牛血清20%，青霉素100IU/ml，鏈霉素100 μ g/ml，L-谷氨酰胺2mmol/L， 堿性成纖維細胞生長因子lOng/ml，維生素C 50 μ g/ml, DMEM/F12補足到100%。在小鼠脂肪干細胞體外培養的過程中，常常遇到的問題是細胞在較低代數時即出現老化，綜合影響老化的的相關因素，最終決定從以下兩方面著手來改善這種狀況第一個方面是促增殖。老化與增殖是兩個相偏離的過程，若一種因子可以很好的促進細胞的增殖，那么在一定程度上也許會延緩細胞的老化，考慮到這一點，我們首先想到的是添加堿性成纖維生長因子(bFGF)，人源bFGF是含155個氨基酸的促有絲分裂的陽離子多肽，是重要的促有絲分裂因子，也是形態發生和分化的誘導因子，體外作用十分強烈，對成纖維細胞、骨細胞、軟骨細胞、血管內皮細胞、腎上腺皮質和髓質細胞、神經元和神經膠質細胞等具有很強的促細胞分裂增殖活性，因此認為其對脂肪干細胞的增殖也有很好的促進作用。其次便是提高血清濃度，血清濃度的提高在一定程度上也能促進細胞的增殖，但是血清濃度要把握得當，否則易造成細胞的分化，不利于細胞干性的維持。第二個方面是抗氧化。氧化損傷在細胞的老化中起著重要的作用，為此想到了添加抗氧化劑，在細胞培養方面常用的是巰基乙醇，但是借鑒中科院廣州生物醫藥與健康研究院裴端卿教授2010年在細胞生物學知名雜志Cell stemcell上發表的《Vitamin C Enhances the Generation of Mouse and Human InducedPluripotent Stem Cells〉〉文章， 我們想到維生素C在干細胞培養方面所起的作用可能不僅僅是抗氧化如此簡單，還有一些 “未知”的機制在干細胞培養方面起著重要的作用，考慮到這一點，我們放棄β -巰基乙醇而選擇了維生素C，同時對其有效濃度也做了探索，這也是與之前報道的體系中在抗氧化劑的選擇方面最主要的差別。本發明的有益效果是1.培養液成分簡單、成本低。2.能夠有效維持小鼠脂肪干細胞在體外的長期增殖3.能夠很好的維持脂肪干細胞的生物學特性。本實施例按以下步驟對小鼠脂肪干細胞培養液進行篩選試驗。一、在相同的分離條件下，分別用高糖培養基、低糖培養基和小鼠胚胎干細胞培養基培養原代分離的細胞。配方分別如下(1)高糖培養基(50ml)
權利要求
1. 一種小鼠脂肪干細胞培養液，其特征在于，組成成分為胎牛血清20%，青霉素 100IU/ml，鏈霉素100μ g/ml，L-谷氨酰胺2mmol/L，堿性成纖維細胞生長因子lOng/ml，維生素 C 50μ g/ml, DMEM/F12 補足到 100%。
全文摘要
本發明公開了一種小鼠脂肪干細胞培養液，其組成成分為胎牛血清20％，青霉素100IU/ml，鏈霉素100μg/ml，L-谷氨酰胺2mmol/L，堿性成纖維細胞生長因子10ng/ml，維生素C 50μg/ml，DMEM/F12補足到100％。本發明培養液成分簡單、成本低；能夠有效維持小鼠脂肪干細胞在體外的長期增殖；能夠很好的維持脂肪干細胞的生物學特性。
文檔編號C12N5/0775GK102433298SQ20111036607
公開日2012年5月2日 申請日期2011年11月17日 優先權日2011年11月17日
發明者劉星, 吳蓉花, 周娜汝, 張宇, 張運海, 李運生, 章孝榮, 陳建文, 陶佳, 魏超 申請人:安徽農業大學