專利名稱：真菌代謝產物橋南霉素及其制備方法和應用的制作方法
技術領域：
本發明涉及抗腫瘤壞死因子的一種新結構化合物的分離純化方法和應用，屬于藥物學范疇。
背景技術：
腫瘤壞死因子-alpha(TNF-a )的過表達是導致目前臨床上尚不能完全醫治的多種疾病，如內風濕性關節炎、g羅恩病、腦細胞缺血性壞死等的一個重要原因。目前，針對這類疾病采取的治療方式是延緩和阻止疾病的進展、減輕疾病造成的疼痛，包括采用糖皮質激素(如強的松)、非甾體抗炎藥(如C0X-2抑制劑)和免疫抑制劑(如阿貝西普)等，但這類藥物均不能根治疾病。針對TNF-α的蛋白質性質開發出的抗體類拮抗劑類藥物，如依那西普^tanerc印t)、英夫利昔(Infliximab)、阿達木單抗(Adalimumab)等，能利用抗原-抗體相互結合的特性與過量表達的TNF-α結合，起到拮抗TNF-α的作用。但這類生物拮抗劑價格昂貴，一年的治療費用約需1萬美元，而且只能采取注射的方式給藥，這給患者帶來諸多不便。小分子的可口服的TNF-α抑制劑藥物，具有TNF-α生物拮抗劑那樣作用靶點明確的優點，又沒有給藥不便的弊病，是目前亟待開發的新型藥物，但到目前為止，尚沒有一個針對TNF-α過表達的小分子藥物問世。中國專利CN101^9161公開一種PET顯像劑前體異喹啉甲酰胺衍生物的合成方法，屬于穩定同位素標記前體的合成領域，該發明采用a)甘氨酸與適量摩爾比的鄰氯苯甲酰氯在堿性環境下酰化反應得到2-氯馬尿酸；b)使(a)中得到的2-氯馬尿酸與苯甲醛在適宜的溫度下環化反應，再加入適量的催化劑分子重排得到1-(2-氯苯基)異喹啉-3-甲酸；c)使1-(2-氯苯基)異喹啉-3-甲酸與鹵代試劑反應后氨解得到通式為(I)的化合物。該合成工藝縮短了合成路線，降低了合成成本，并且簡便實用，具有較高的收率。中國專利CN102099352A公開一種含有式(I)所示的喹啉甲酰胺衍生物或其藥理學上可接受的鹽作為有效成分的STAt3抑制劑，式中，W表示鍵或亞烷基鏈，X表示0、S、NR34，Rl R8和R34表示H、鹵素、烷基、苯基、呋喃基、噻吩基等。

發明內容
本發明的目的是提供一種真菌代謝產物橋南霉素及其制備方法和應用。所述真菌代謝產物橋南霉素為新結構化合物QR，9S)-4’ -hydroxy-2-methyl-3—oxo—l， 3,3',9a-tetrahydro-2H-spiro-oxazolo[3,2-a]indole-9,2' -pyrrolo[2,3-b]quinoline]-3’-carboxamide，，分子式為C22H18N4O4,分子量為402，命名為橋南霉素；其結構
式如下
權利要求
1.真菌代謝產物橋南霉素，其特征在于為化合物OR，9S)-4’-hydrOXy-2-methyl-3-oxo-1’ 3,3',9a-tetrahydro-2H-spiro-oxazolo[3,2~a]indoie_9，2' -pyrro丄ο[2，3~b]quinoline]_3，-carboxamide，，分子式為 C22H18N4O4,分子量為 402 ；其結構式如下
2.如權利要求1所述的真菌代謝產物橋南霉素的制備方法，其特征在于包括以下步驟1)發酵生成制作種子平板，以劃線方式接種真菌，將真菌發酵培養；2)分離純化(1)將真菌以固體PDA平板發酵，收集菌體，以乙酸乙酷、甲醇溶液浸提，合并提取液， 減壓濃縮得到浸膏，將浸膏分別用KOAc水溶液、MeOH與石油醚溶液處理，分別保留KOAc 相和MeOH相，丟棄水相和石油醚相，處理后的粗提物過中壓RP-18反相層析柱，依次以H20、 30% MeOH,50% MeOH和100% MeOH洗脫，其中50% MeOH洗脫的組分按200mL/管收集，以薄層層析TLC檢查，合并含有橋南霉素的不同組份；(2)將含有橋南霉素的組份再次通過RP-18中壓反相柱層析分離，以40%MeOH和45% MeOH兩個梯度洗脫，分部收集，合并有橋南霉素的組份，再通過一次以石油醚/丙酮為洗脫劑的硅膠層析柱即可純化出真菌代謝產物橋南霉素。
3.如權利要求2所述的真菌代謝產物橋南霉素的制備方法，其特征在于在步驟1)中， 所述發酵采用葡萄糖-土豆-瓊脂斜面，配方為葡萄糖20g，瓊脂15g，土豆200g，自來水定容至1し
4.如權利要求2所述的真菌代謝產物橋南霉素的制備方法，其特征在于在步驟1)中， 所述以劃線方式是將種子平板用無菌小刀劃成3mmX3mm的小塊，每個直徑IOmm的發酵平板上放置3個小塊。
5.如權利要求2所述的真菌代謝產物橋南霉素的制備方法，其特征在于在步驟1)中， 所述發酵培養的條件為在觀で的培養箱中發酵培養5天。
6.如權利要求2所述的真菌代謝產物橋南霉素的制備方法，其特征在于在步驟2)第 (1)部分中，所述乙酸乙酯與甲醇的體積比為85 15。
7.如權利要求2所述的真菌代謝產物橋南霉素的制備方法，其特征在于在步驟2)第 (1)部分中，所述浸提的次數為3次。
8.如權利要求2所述的真菌代謝產物橋南霉素的制備方法，其特征在于在步驟2)第(1)部分中，所述KOAc水溶液中的KOAc與H2O的體積比為KOAc H2O = 1 1 ；所述 MeOH與石油醚的體積比可為MeOH 石油醚=1 1。
9.如權利要求2所述的真菌代謝產物橋南霉素的制備方法，其特征在于在步驟2)第(2)部分中，所述石油謎/丙酮的體積比為20 1。
10.如權利要求1所述真菌代謝產物橋南霉素在制備抗炎癥藥物或其他具有生物活性的先導物中的應用。
全文摘要
真菌代謝產物橋南霉素及其制備方法和應用，涉及抗腫瘤壞死因子的一種新結構化合物的分離純化方法和應用。所述真菌代謝產物橋南霉素為C22H18N4O4，分子量為402，屬于喹啉甲酰胺的衍生物，白色粉末，比旋光度[α]D＝-27.9(C＝0.43，in MeOH)，易溶于甲醇，難溶于氯仿等低極性溶劑。該化合物的結構至今未見報道。在TNF-α拮抗劑篩選的細胞模型上，該化合物表現出很好的拮抗活性，所述真菌代謝產物橋南霉素可用于制備抗炎癥藥物或其他具有生物活性的先導物。先發酵生成，再分離純化所述真菌代謝產物橋南霉素可用于制備抗炎癥藥物或其他具有生物活性的先導物。
文檔編號C12R1/66GK102584852SQ201110458140
公開日2012年7月18日 申請日期2011年12月30日 優先權日2011年12月30日
發明者劉軍亮, 徐慶妍, 胡志鈺, 鄭忠輝, 黃耀堅 申請人:廈門大學