染色體Xp11.22區(qū)段多態(tài)性檢測(cè)特異性引物和液相芯片的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明公開(kāi)了一種染色體Xp11.22區(qū)段多態(tài)性檢測(cè)液相芯片和特異性引物，該液相芯片主要包括有：每種由5’端的tag序列和3’端針對(duì)目的基因突變位點(diǎn)的特異性引物序列組成的ASPE引物，所述特異性引物序列為：針對(duì)A65G位點(diǎn)的SEQ?ID?NO.7及SEQ?ID?NO.8，針對(duì)G121A位點(diǎn)的SEQ?ID?NO.9及SEQ?ID?NO.10，和/或針對(duì)C162T位點(diǎn)的SEQ?ID?NO.11及SEQ?ID?NO.12；有anti-tag序列包被的微球；擴(kuò)增引物。本發(fā)明所提供的檢測(cè)液相芯片的檢測(cè)結(jié)果與測(cè)序法的吻合率高達(dá)100％，能實(shí)現(xiàn)多個(gè)突變位點(diǎn)的野生型和突變型單獨(dú)和并行檢測(cè)。
【專利說(shuō)明】染色體Xp11.22區(qū)段多態(tài)性檢測(cè)特異性引物和液相芯片
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于分子生物學(xué)領(lǐng)域，涉及醫(yī)學(xué)和生物技術(shù)，具體的是涉及一種染色體Xpll.22區(qū)段多態(tài)性檢測(cè)特異性引物和液相芯片。
【背景技術(shù)】
[0002]染色體Xpll.22區(qū)域?qū)σ恍┥窠?jīng)發(fā)育障礙來(lái)說(shuō)是一個(gè)基因豐富的區(qū)域，目前已確認(rèn)了染色體Xpll.22罕見(jiàn)間質(zhì)性微缺失的身份，顱面異形和/或唇裂/腭裂，以及這個(gè)區(qū)域內(nèi)的PHF8基因截?cái)嗤蛔儯旧wXpll.22區(qū)域內(nèi)具有語(yǔ)言和認(rèn)知能力的基因，這有助于自閉癥表型的研究，雖然兩者之間的關(guān)系并沒(méi)有得到系統(tǒng)的證明，但是染色體Xpll.22區(qū)域大量的缺失，包括FAM120C和WNK3基因，可能與自閉癥的發(fā)病機(jī)理有關(guān)聯(lián)。另外染色體Xpll.22區(qū)域的遺傳突變與前列腺癌的發(fā)生存在相關(guān)性。
[0003]目前，染色體Xpll.22區(qū)段突變檢測(cè)方法主要有:基質(zhì)輔助激光解吸電離飛行時(shí)間質(zhì)譜(MALD1-TOF MS)技術(shù)，熒光定量PCR技術(shù)，Illumina光纖微珠芯片技術(shù)和SNPlex基因分型技術(shù)?；|(zhì)輔助激光解析電離時(shí)間飛行質(zhì)譜技術(shù)是一種軟電離技術(shù)，在蛋白質(zhì)等生物大分子的檢測(cè)中有著強(qiáng)大而成熟的功能，但是在核酸檢測(cè)領(lǐng)域，由于核酸分子本身的特殊性，檢測(cè)受到一定的限制。熒光定量PCR技術(shù)具有靈敏度高、特異性強(qiáng)、自動(dòng)化程度高的特點(diǎn)，但也存在樣品易污染、假陽(yáng)性率高的缺點(diǎn)，且每次只能檢測(cè)一種突變類型。Illumina光纖微珠芯片技術(shù)雖然是高靈敏度和精確性的高通量檢測(cè)系統(tǒng)，但是自動(dòng)化程度低，手工操作比較多，也不能滿足實(shí)際應(yīng)用的需要。而SNPlexTM System技術(shù)對(duì)SNP序列特異性要求較高，不能隨意地分析所選擇的單核苷酸多態(tài)性位點(diǎn)，難以應(yīng)用于臨床檢測(cè)診斷，而且該方法操作比較復(fù)雜，不能滿足實(shí)際應(yīng)用的需要。
[0004]本發(fā)明目標(biāo)檢測(cè)的染色體Xpll.22區(qū)段突變位點(diǎn)，如表所示:
[0005]
【權(quán)利要求】
1.一種染色體Xpl1.22區(qū)段多態(tài)性檢測(cè)液相芯片，其特征是，包括有 (A).針對(duì)染色體Xpll.22區(qū)段不同突變位點(diǎn)分別設(shè)計(jì)的野生型和突變型的ASPE引物對(duì):每條ASPE引物由5’端的tag序列和3’端針對(duì)目的基因突變位點(diǎn)的特異性引物序列組成，所述特異性引物序列為:針對(duì)A65G位點(diǎn)的SEQ ID N0.7及SEQ ID N0.8，針對(duì)G121A位點(diǎn)的 SEQ ID N0.9 及 SEQ ID N0.10，和 / 或針對(duì) C162T 位點(diǎn)的 SEQ ID N0.11 及 SEQ IDN0.12 ;所述 tag 序列選自 SEQ ID N0.1 ~SEQ ID N0.6 ； (B).有anti-tag序列包被的、具有不同顏色編碼的微球,所述anti-tag序列與微球連接中間還設(shè)有間隔臂序列；所述anti-tag序列選自SEQ ID N0.13~SEQ ID N0.18，且所述anti-tag序列能相應(yīng)地與(A)中所選的tag序列互補(bǔ)配對(duì)； (C).用于擴(kuò)增出需要檢測(cè)的、具有相應(yīng)突變位點(diǎn)的目標(biāo)序列的引物。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的染色體Xpll.22區(qū)段多態(tài)性檢測(cè)液相芯片，其特征是，所述擴(kuò)增引物為針對(duì)A65G位點(diǎn)的SEQ ID N0.19及SEQ ID N0.20，針對(duì)G121A位點(diǎn)的SEQ IDN0.21 及 SEQ ID N0.22，和 / 或針對(duì) C162T 位點(diǎn)的 SEQ ID N0.23 及 SEQ ID N0.24。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的染色體Xpll.22區(qū)段多態(tài)性檢測(cè)液相芯片，其特征是，所述ASPE引物為:針對(duì)A65G位點(diǎn)的由SEQ ID N0.1和SEQ ID N0.7組成的序列及由SEQ IDN0.2和SEQ ID N0.8組成的序列，針對(duì)G121A位點(diǎn)的由SEQ ID N0.3和SEQ ID N0.9組成的序列及由SEQ ID N0.4和SEQ ID N0.10組成的序列，和/或針對(duì)C162T位點(diǎn)的由SEQ IDN0.5和SEQ ID N0.11組成的序列及由SEQ ID N0.6和SEQ ID N0.12組成的序列。
4.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的染色體Xpl1.22區(qū)段多態(tài)性檢測(cè)液相芯片，其特征是，所述間隔臂為5 — 10個(gè)T。
5.用于染色體Xpll.22區(qū)段多態(tài)性檢測(cè)的特異性引物，其特征是，所述特異性引物為針對(duì) A65G 位點(diǎn)的 SEQ ID N0.7 及 SEQ ID N0.8，針對(duì) G121A 位點(diǎn)的 SEQ ID N0.9 及 SEQ IDN0.10，和 / 或針對(duì) C162T 位點(diǎn)的 SEQ ID N0.11 及 SEQ ID N0.12。
【文檔編號(hào)】C12N15/11GK103571926SQ201210251301
【公開(kāi)日】2014年2月12日 申請(qǐng)日期:2012年7月18日 優(yōu)先權(quán)日:2012年7月18日
【發(fā)明者】許嘉森, 吳詩(shī)揚(yáng) 申請(qǐng)人:益善生物技術(shù)股份有限公司