專利名稱：一種絲狀真菌培養基，其制備方法及利用該培養基培養絲狀真菌的方法
技術領域：
本發明屬于絲狀真菌培養技術領域，具體涉及一種適于培養用于惡臭氣體的生物處理的絲狀真菌的培養基，該培養基的制備方法以及利用該培養基培養絲狀真菌的方法。
背景技術：
目前，惡臭氣體的生物處理因為具有設備簡單、造價低、無二次污染等特點而廣受關注。微生物的快速培養及馴化是生物除臭設備運行的關鍵。降解臭味物質的微生物種類包括細菌和真菌。常規的生物濾池中微生物以細菌為主，因此要求生物濾池中保持潮濕的環境。惡臭氣體的去除可以劃分為三個階段有機物從 氣相轉移到液相、在液相中遷移并被微生物吸收、被微生物降解。對于水溶性好的污染物，會迅速從氣相轉移到細菌表面的水層中，并被細菌所降解。但是，對于在水中溶解度低或疏水性物質，細菌表面的水層將阻礙其傳質速率，導致處理效率降低。此外，濾床的酸化及干化常常使以細菌為主的生物濾池的處理效果變差。而以絲狀真菌為主的生物濾池可以很好的去除掉疏水性惡臭氣體，絲狀真菌的快速培養及馴化也就是這類生物除臭設備保持良好除臭效果的關鍵。微生物培養基是人工合成供微生物等生長的人工配制的營養物質。微生物培養基一般都含有碳水化合物、含氮物質、無機鹽(包括微量元素)以及維生素和水等。不同營養類 型的微生物需要采用不同的培養基。有的培養基還含有抗菌素和色素，用于單種微生物培養和鑒定。培養基由于配制的原料不同，使用要求不同，而貯存保管方面也稍有不同。一般培養基在受熱、吸潮后，易被細菌污染或分解變質，因此一般培養基必須防潮、避光、陰涼處保存。對一些需嚴格滅菌的培養基(如組織培養基)，較長時間的貯存，必須放在2飛。C的冰箱內。常見的微生物培養基包括
I)薩氏培養基
該培養基的組份包括蛋白胨IOg ;瓊脂20g ;麥芽糖40g ;水IOOOml ；
該培養基的制作方法為先把蛋白胨、瓊脂加水后，加熱，不斷攪拌，待瓊脂溶解后，力口A 40g麥芽糖(或葡萄糖)，攪拌，使它溶解，然后分裝，滅菌。)馬鈴薯糖瓊脂培養基
該培養基的組份包括馬鈴薯200g ;瓊脂IOg ;糖20g ;水1000ml。該培養基的制作方法為把馬鈴薯洗凈去皮，取200g切成小塊，加水1000ml，煮沸半小時后，補足水分，在濾液中加入IOg瓊脂，煮沸溶解后加糖20g，補足水分，分裝，滅菌，備用。培養基的PH值調到7. 2 7. 4。)豆芽汁培養基
該培養基的組份包括黃豆芽IOOg ;瓊脂15g ;葡萄糖20g ;水1000ml。
該培養基的制作方法為洗凈黃豆芽，加水煮沸30分鐘，用紗布過濾，濾液中加入瓊脂，加熱溶解后放入葡萄糖，攪拌使它溶解，補足水分到IOOOml，分裝，滅菌。)豌豆瓊脂培養基
該培養基的組份包括豌豆IOOg;瓊脂25g;水1000ml。該培養基的制作方法為取IOOg干豌豆加水，煮沸I小時，用紗布過濾后，在濾液中加入瓊脂，煮沸到溶解，分裝，滅菌。這些常見的微生物培養基在進行絲狀真菌培養時，絲狀真菌的生長速度較慢，而且其他微生物如細菌等也常常會造成污染，從而影響絲狀真菌的大規?？焖偕L。

發明內容
本發明所要解決的技術問題是克服現有技術的不足，提供一種可快速培養出具有 絕對優勢菌種的絲狀真菌的液體培養基。本發明同時提供一種絲狀真菌培養基的制備方法和利用絲狀真菌培養基培養絲狀真菌的方法。為解決上述技術問題，本發明采用如下技術方案
一種絲狀真菌培養基，其由碳源、氮源、磷酸氫二鉀、七水硫酸鎂、九水硝酸亞鐵、硝酸鋅、氯化鉀、氯化鎂、PH調節劑以及水組成，其pH值為3 5，其中碳源為蔗糖或玉米淀粉水解糖或二者的組合；氮源為硝酸鈉，絲狀真菌培養基中碳源的含量為2(T70g/L，氮源的含量為2 5g/L，磷酸氫二鉀的含量為I 4 g/L，七水硫酸鎂的含量為2 5 g/L，九水硝酸亞鐵的含量為4 6 g/L，硝酸鋅的含量為I 3 g/L，氯化鉀的含量為3 8 g/L，氯化鎂的含量為3 8 g/L，所述pH調節劑為選自硫酸、碳酸或磷酸中的一種或多種的組合。根據本發明的一個具體方面，碳源為蔗糖，絲狀真菌培養基中碳源的含量為20 50g/L。根據本發明的又一具體方面，碳源為玉米淀粉水解糖，絲狀真菌培養基中碳源的含量為40 70g/L。根據本發明，所述絲狀真菌培養基的pH優選為4 4. 2，最優選為4. I。本發明采取的又一技術方案是一種上述的絲狀真菌培養基的制備方法，具體如下選用耐高溫可加塞玻璃容器，準確量取純凈水加入，然后分別準確稱量配方量的蔗糖，硝酸鈉，磷酸氫二鉀，七水硫酸鎂，九水硝酸亞鐵，硝酸鋅，氯化鉀，氯化鎂，依次加入玻璃容器，充分振蕩均勻后，加入PH調節劑進行pH的調節，最后用透氣棉線塞封口玻璃容器，高溫滅菌，即得所述絲狀真菌培養基。根據本發明制備方法的一個具體和優選方面，加入的pH調節劑為稀硫酸或濃度為10￥丨% 50￥丨％的磷酸水溶液。其中，所述的稀硫酸濃度優選為10wt% 25wt%。本發明還采取的方案是一種絲狀真菌的培養方法，取絲狀真菌的新鮮斜面培養物，制備成菌液，接種至上述的絲狀真菌培養基中，在27°C 29°C下恒溫培養5 10天，測定絲狀真菌的繁殖和生長量。優選地，所述的絲狀真菌為用于惡臭氣體的生物處理的絲狀真菌，包括頂孢頭孢霉、文氏曲霉、?，F青霉菌、宛氏擬青霉等。由于上述技術方案的采用，本發明與現有技術相比具有如下特點本發明的培養基特別適合用于惡臭氣體的生物處理的絲狀真菌如頂孢頭孢霉、文氏曲霉、?，F青霉菌、宛氏擬青霉等的快速培養，且同時可以抑制絲狀真菌之外的其它真菌以及絕大多數細菌的生長，因此，可以培養出為絕對優勢菌種的絲狀真菌。由本發明所培養的除臭絲狀真菌可以快速接種至除臭生物反應器，具有非常好的除疏水性惡臭氣體效果。此外，本發明的培養基稀釋5 10倍后還可以作為除臭生物反應器的營養液；而除碳源或氮源或含硫組分后則可作為除臭生物反應器的營養液。
具體實施例方式實施例I 本實施例提供一種絲狀真菌培養基，其制備方法如下選用耐高溫2000毫升可加塞玻璃容器，首先準確量取1000毫升純凈水加入，然后分別準確稱量蔗糖45克，硝酸鈉3克，磷酸氫二鉀2克，七水硫酸鎂4克，九水硝酸亞鐵5克，硝酸鋅2克，氯化鉀6克，氯化鎂5克，依次加入玻璃容器，充分振蕩均勻，加入30wt%磷酸水溶液調整pH值至4. 1，透氣棉線塞封口玻璃容器，高溫滅菌后獲得絲狀真菌培養基。取宛氏擬青霉variotii )的新鮮斜面培養物制備成菌液,接種至上述培養基后，28°C恒溫培養試驗。培養5天后測定其繁殖體的數量為4*109CFU/1。實施例2
本實施例提供一種絲狀真菌培養基，其制備方法如下選用耐高溫2000毫升可加塞玻璃容器，首先準確量取1000毫升純凈水加入，然后分別準確稱量蔗糖30克，硝酸鈉4克，磷酸氫二鉀3克，七水硫酸鎂4克，九水硝酸亞鐵5克，硝酸鋅2克，氯化鉀5克，氯化鎂5克，依次加入玻璃容器，充分振蕩均勻，加入30wt%磷酸水溶液調整pH值至4. 1，透氣棉線塞封口玻璃容器，高溫滅菌后獲得絲狀真菌培養基。取宛氏擬青霉variotii )的新鮮斜面培養物制備成菌液,接種至上述培養基后，28°C恒溫培養試驗。培養5天后測定其繁殖體的數量為3. 9X 109CFU/1。實施例3
本實施例提供一種絲狀真菌培養基，其制備方法如下選用耐高溫2000毫升可加塞玻璃容器，首先準確量取1000毫升純凈水加入，然后分別準確稱量蔗糖20克，硝酸鈉5克，磷酸氫二鉀I克，七水硫酸鎂3克，九水硝酸亞鐵5克，硝酸鋅2克，氯化鉀3克，氯化鎂6克，依次加入玻璃容器，充分振蕩均勻，加入20wt%稀硫酸調整pH值至4. I，透氣棉線塞封口玻璃容器，高溫滅菌后獲得絲狀真菌培養基。取宛氏擬青霉variotii )的新鮮斜面培養物制備成菌液,接種至上述培養基后，28°C恒溫培養試驗。培養5天后測定其繁殖體的數量為3. 9X 109CFU/1。實施例4
本實施例提供一種絲狀真菌培養基，其制備方法如下選用耐高溫2000毫升可加塞玻璃容器，首先準確量取1000毫升純凈水加入，然后分別準確稱量蔗糖20克，硝酸鈉5克，磷酸氫二鉀I克，七水硫酸鎂3克，九水硝酸亞鐵5克，硝酸鋅2克，氯化鉀3克，氯化鎂6克，依次加入玻璃容器，充分振蕩均勻，加入20wt%稀硫酸調整pH值至4. 5，透氣棉線塞封口玻璃容器，高溫滅菌后獲得絲狀真菌培養基。取宛氏擬青霉variotii )的新鮮斜面培養物制備成菌液,接種至上述培養基后，28°C恒溫培養試驗。培養5天后測定其繁殖體的數量為3. 7X 109CFU/1。實施例5
本實施例提供一種絲狀真菌培養基，其制備方法如下選用耐高溫2000毫升可加塞玻璃容器，首先準確量取1000毫升純凈水加入，然后分別準確稱量蔗糖20克，硝酸鈉5克，磷酸氫二鉀I克，七水硫酸鎂3克，九水硝酸亞鐵5克，硝酸鋅2克，氯化鉀3克，氯化鎂6克，依次加入玻璃容器，充分振蕩均勻，加入20wt%稀硫酸調整pH值至3. 5，透氣棉線塞封口玻璃容器，高溫滅菌后獲得絲狀真菌培養基。取宛氏擬青霉variotii )的新鮮斜面培養物制備成菌液,接種至上述培養基后，28°C恒溫培養試驗。培養5天后測定其繁殖體的數量為3. 5X 109CFU/1。實施例6
本實施例提供一種絲狀真菌培養基，其制備方法如下選用耐高溫2000毫升可加塞玻璃容器，首先準確量取1000毫升純凈水加入，然后分別準備稱量玉米淀粉水解糖60克，硝酸鈉3克,磷酸氫二鉀2克，七水硫酸鎂4克，九水硝酸亞鐵5克,硝酸鋅2克，氯化鉀6克，氯化鎂5克，依次加入玻璃容器，充分振蕩均勻，50被％磷酸調整pH值至4. I，透氣棉線塞封口玻璃容器，高溫滅菌后獲得絲狀真菌培養基。
取常現青霉菌 iPenicillium frequentans')、文氏熱霉(AspergiIIus wentH)、枯草桿歲{Bacillus subtil is)等的混合菌液接種至上述培養基,28°C恒溫培養觀察。試驗證實?，F青霉菌等絲狀真菌在該培養基生長迅速,成為優勢菌種；而枯草桿菌■ /況i7is)等細菌在該培養基的生長受到抑制。培養期間(7d)未檢測到枯草桿菌菌落，而青霉菌和文氏曲霉的繁殖體的數量分別達到3. 8X 109CFU/1以上。實施例7
本實施例提供一種絲狀真菌培養基，其制備方法如下選用耐高溫2000毫升可加塞玻璃容器，首先準確量取1000毫升純凈水加入，然后分別準備稱量玉米淀粉水解糖40克，硝酸鈉4克,磷酸氫二鉀4克，七水硫酸鎂2克，九水硝酸亞鐵5克,硝酸鋅2克，氯化鉀6克，氯化鎂5克，依次加入玻璃容器，充分振蕩均勻，加磷酸調整pH值至4. I，透氣棉線塞封口玻璃容器，高溫滅菌后獲得絲狀真菌培養基。
取常現青霉菌iPenicillium文氏曲霉(Aspergillus wentH)、枯草桿
歲{Bacillus subtil is)等的混合菌液接種至上述培養基,28°C恒溫培養觀察。試驗證實?，F青霉菌等絲狀真菌在該培養基生長迅速,成為優勢菌種；而枯草桿菌■ /況i7is)等細菌在該培養基的生長受到抑制。培養期間(7d)未檢測到枯草桿菌菌落，而青霉菌和文氏曲霉的繁殖體的數量分別達到3. 8X 109CFU/1以上。實施例8
本實施例提供一種絲狀真菌培養基，其制備方法如下選用耐高溫2000毫升可加塞玻璃容器，首先準確量取1000毫升純凈水加入，然后分別準備稱量玉米淀粉水解糖40克，硝酸鈉4克,磷酸氫二鉀4克，七水硫酸鎂2克，九水硝酸亞鐵5克,硝酸鋅2克，氯化鉀6克，氯化鎂5克，依次加入玻璃容器，充分振蕩均勻，加磷酸調整pH值至4. I，透氣棉線塞封口玻璃容器，高溫滅菌后獲得絲狀真菌培養基。取常現青霉菌iPeniciIlium frequentans)、文氏曲霉(AspergiIlus wentii )、枯草桿菌iBacillus sy況i/is)等的混合菌液接種至上述培養基,28°C恒溫培養觀察。試驗證實常現青霉菌QPenicillium frequentans)等絲狀真菌在該培養基生長迅速,成為優勢菌種；而枯草桿菌■ /況i7is)等細菌在該培養基的生長受到抑制。培養期間(7d)未檢測到枯草桿菌菌落，而青霉菌和文氏曲霉的繁殖體的數量分別達到3. 8X 109CFU/1以上。

上述實施例的目的在于讓熟悉此項技術的人士能夠了解本發明的內容并據以實施，并不能以此限制本發明的保護范圍。凡根據本發明精神實質所作的等效變化或修飾，都應涵蓋在本發明的保護范圍之內。
權利要求
1.一種絲狀真菌培養基，其特征在于所述絲狀真菌培養基由碳源、氮源、磷酸氫二鉀、七水硫酸鎂、九水硝酸亞鐵、硝酸鋅、氯化鉀、氯化鎂、pH調節劑以及水組成，且其pH值為3 5，其中所述的碳源為蔗糖或玉米淀粉水解糖或二者的組合；所述氮源為硝酸鈉，所述絲狀真菌培養基中碳源的含量為2(T70g/L，氮源的含量為2 5g/L，磷酸氫二鉀的含量為I 4 g/L，七水硫酸鎂的含量為2 5 g/L，九水硝酸亞鐵的含量為4 6 g/L，硝酸鋅的含量為I 3 g/L，氯化鉀的含量為3 8 g/L，氯化鎂的含量為3 8 g/L，所述pH調節劑為選自硫酸、碳酸或磷酸中的一種或多種的組合。
2.根據權利要求I所述的絲狀真菌培養基，其特征在于所述碳源為蔗糖，所述絲狀真菌培養基中碳源的含量為20 50g/L。
3.根據權利要求I所述的絲狀真菌培養基，其特征在于所述碳源為玉米淀粉水解糖，所述絲狀真菌培養基中碳源的含量為40 70g/L。
4.根據權利要求I所述的絲狀真菌培養基，其特征在于所述絲狀真菌培養基的PH為4 4. 2。
5.根據權利要求4所述的絲狀真菌培養基，其特征在于所述絲狀真菌培養基的pH為4.I。
6.—種如權利要求I至5中任一項權利要求所述的絲狀真菌培養基的制備方法，其特征在于選用耐高溫可加塞玻璃容器，準確量取純凈水加入，然后分別準確稱量配方量的蔗糖，硝酸鈉，磷酸氫二鉀，七水硫酸鎂，九水硝酸亞鐵，硝酸鋅，氯化鉀，氯化鎂，依次加入玻璃容器，充分振蕩均勻后，加入PH調節劑進行pH的調節，最后用透氣棉線塞封口玻璃容器，高溫滅菌，即得所述絲狀真菌培養基。
7.根據權利要求6所述的絲狀真菌培養基的制備方法，其特征在于加入的pH調節劑為稀硫酸或濃度為10wt°/T50wt%的磷酸水溶液。
8.根據權利要求7所述的絲狀真菌培養基的制備方法，其特征在于所述的稀硫酸濃度為 10wt% 25wt%。
9.一種絲狀真菌的培養方法，其特征在于取絲狀真菌的新鮮斜面培養物，制備成菌液，接種至權利要求I飛所述的絲狀真菌培養基中，在27°C 29°C下恒溫培養5 10天，測定所述絲狀真菌的繁殖和生長量。
10.根據權利要求9所述的絲狀真菌的培養方法，其特征在于所述的絲狀真菌為用于惡臭氣體的生物處理的絲狀真菌。
全文摘要
本發明涉及絲狀真菌培養基，其制備方法及培養絲狀真菌的方法，培養基由碳源、氮源、磷酸氫二鉀、七水硫酸鎂、九水硝酸亞鐵、硝酸鋅、氯化鉀、氯化鎂、pH調節劑以及水組成，其pH值為3~5，其中碳源為蔗糖或玉米淀粉水解糖或二者的組合；氮源為硝酸鈉，絲狀真菌培養基中碳源的含量為20~70g/L，氮源的含量為2～5g/L，磷酸氫二鉀的含量為1～4g/L，七水硫酸鎂的含量為2～5g/L，九水硝酸亞鐵的含量為4～6g/L，硝酸鋅的含量為1～3g/L，氯化鉀的含量為3～8g/L，氯化鎂的含量為3～8g/L，pH調節劑為選自硫酸、碳酸或磷酸中的一種或多種的組合。本發明培養基可快速培養出具有絕對優勢菌種的絲狀真菌。
文檔編號C12R1/79GK102757902SQ201210252489
公開日2012年10月31日 申請日期2012年7月20日 優先權日2012年7月20日
發明者劉立貴, 朱國營, 杜永祥, 王家驊, 馬楫, 黃東 申請人:江蘇蘇凈集團有限公司, 蘇州蘇凈環保科技有限公司