專利名稱：一種檢測轉基因玉米品系Mon88017的試劑盒和寡核苷酸的制作方法
技術領域：
本發明涉及一種檢測轉基因玉米品系Mon88017的試劑盒和寡核苷酸，屬生物技術領域。
背景技術：
現如今，轉基因技術在提高產量、改善品質、緩解糧食危機等方面作出了巨大貢獻，同時，也為公眾帶來關于轉基因生物安全的憂慮。在諸多爭論中，轉基因技術在作物種植中的應用仍迅猛發展，成為應用較快的農業新技術。隨著轉基因品系越來越多和轉基因作物的種植面積逐年擴大，有關轉基因技術的爭議和質疑越來越多，我國也對轉基因生物安全問題越來越重視。我國規定自2002年3月20日起，所有轉基因農作物及其副產品都 應加以標志，這時候就需要一種行之有效的檢測方法來對相關產品進行檢測。環介導等溫擴增法(loop-mediatedisothermal amplification, LAMP)是一種全新的核酸擴增方法，其特點是針對靶基因的6個區域設計4種特異引物，在一種鏈置換DNA聚合酶的作用下，等溫條件保溫60分鐘，即可完成核酸擴增反應。具有簡單、快速、特異性強的特點。該技術在靈敏度、特異性和檢測范圍等指標上能媲美甚至優于PCR技術，不依賴任何專門的儀器設備實現現場高通量快速檢測，檢測成本與檢測所需時間遠低于熒光定量PCR0目前國內外均未見利用-LAMP技術對轉基因產品進行檢測的相關報道。

發明內容
本發明要解決的技術問題是提供一組特異性強、靈敏度高的用于檢測轉基因玉米品系Mon88017的LAMP寡核苷酸。本發明要解決的另一個技術問題是提供一種操作簡單、結果準確的檢測轉基因玉米品系Mon88017的試劑盒。為實現上述目的，本發明采用以下技術方案本發明提供了一組檢測轉基因玉米品系Mon88017的寡核苷酸,其為利用PrimerExplorer V4. 0在線軟件(http://primerexplorer. jp/elamp4. 0. 0/index, html)設計的一組LAMP引物，由序列表SEQ ID No. I至序列表SEQ ID No. 5所示堿基序列的寡核苷酸組成；其中SEQ ID No. I為外側上游引物，SEQ ID No. 2為外側下游引物，SEQ ID No. 3為內側上游引物，SEQ ID No. 4為內側下游引物，SEQ ID No. 5為環狀下游引物。詳見表I。表I引物序列
權利要求
1.一組檢測轉基因玉米品系Mon88017的寡核苷酸，其特征在于由序列表SEQ IDNo. I至序列表SEQ ID No. 5所示堿基序列的寡核苷酸組成；其中SEQ ID No. I為外側上游引物，SEQ ID No. 2為外側下游引物，SEQ ID No. 3為內側上游引物，SEQ ID No. 4為內側下游引物，SEQ ID No. 5為環狀下游引物。
2.一種檢測轉基因玉米品系Mon88017的試劑盒，其特征在于，由以下試劑組成 (1)LAMP反應液，其包括=ThermoPol緩沖液、甜菜堿、dNTPs、MgSO4、外側上游引物、夕卜偵嚇游引物、內側上游引物、內側下游引物、環狀下游引物； 其中所述外側上游引物是序列表SEQ ID No. I所示的核苷酸序列，外側下游引物是序列表SEQ ID No. 2所示的核苷酸序列，內側上游引物是序列表SEQ ID No. 3所示的核苷酸序列，內側下游引物是序列表SEQ ID No. 4所示的核苷酸序列，環狀下游引物是序列表SEQID No. 5所示的核苷酸序列； (2)Bst DNA 聚合酶；· (3)DEPC 7jC ； (4)陰性對照=DEPC水； (5)陽性對照轉基因玉米品系Mon88017的標準品； (6)顯色液SYBRGreen I染料。
3.根據權利要求2所述的試劑盒，其特征在于，所述LAMP反應液中各種成分的使用終濃度為 IXThermoPol 緩沖液、I. 0 M 甜菜堿、I. 4 mM dNTPs,4. 0 mM MgS04、0. 2 u M外側上游引物、0.2 PM外側下游引物、I. 6 PM內側上游引物、I. 6 PM內側下游引物、0.8 yM環狀下游引物。
全文摘要
本發明公開了一種檢測轉基因玉米品系Mon88017的試劑盒和寡核苷酸，具體涉及一組檢測轉基因玉米品系Mon88017的寡核苷酸，其具有序列表SEQIDNo.1至SEQIDNo.5所示的寡核苷酸序列，及含有這些寡核苷酸的試劑盒及其檢測方法，本發明所述的試劑盒靈敏度高、特異性強、成本低、操作簡便。
文檔編號C12Q1/68GK102747161SQ201210253539
公開日2012年10月24日 申請日期2012年7月20日 優先權日2012年7月20日
發明者張蕾, 張西萌, 曾靜, 馬丹, 魏海燕 申請人:北京出入境檢驗檢疫局檢驗檢疫技術中心