專利名稱：一種米曲霉及其應(yīng)用于制備醬香風(fēng)味呈味料的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種米曲霉及其應(yīng)用于制備呈味料的方法，特別是一種用于可用于制備醬香型呈味料的方法。
背景技術(shù)：
我國咸味香精經(jīng)過近30年的發(fā)展已經(jīng)形成獨立的產(chǎn)業(yè)，年銷售額超過100億元人民幣，所應(yīng)用的領(lǐng)域包括方便面、肉制品、速凍食品、雞精、方便小食品等行業(yè)，應(yīng)用領(lǐng)域的年產(chǎn)值超過I萬億人民幣。目前，肉類呈味料主要采用原料(肉類)蒸煮、絞肉、外加商業(yè)酶制劑酶解(蛋白酶)、美拉德反應(yīng)、添加輔料(麥芽糊精等)、干燥(噴霧干燥或微波干燥等)、風(fēng)味后修飾(添加液體肉類香精等)等エ藝制備而成。此エ藝具有生產(chǎn)エ藝相對成熟、省時等
優(yōu)點；但也存在生產(chǎn)成本高(酶制劑成本占產(chǎn)品總成本的15%以上)、產(chǎn)品香氣不足(需經(jīng)后續(xù)添加化學(xué)合成肉類香精補充，并進一步增加生產(chǎn)成本)及所添加化學(xué)合成肉類香精可能帶來安全隱患等缺點。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是提供一種高產(chǎn)蛋白酶、能產(chǎn)生濃郁的醬香風(fēng)味物質(zhì)的米曲霉，于2012年7月I日保藏于中國典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏編號為CCTCCNO. M2012265。本發(fā)明要解決的另一個技術(shù)問題是提供一種應(yīng)用所述米曲霉制備醬香風(fēng)味呈味料的方法。本實驗室在對現(xiàn)有肉類香精生產(chǎn)エ藝和所用原料及酶制劑分析的基礎(chǔ)上，結(jié)合現(xiàn)代發(fā)酵エ藝和微生物代謝控制原理，提出以協(xié)同發(fā)酵法生產(chǎn)肉類呈味料的新エ藝。此エ藝以實驗室篩選保藏的米曲霉(CCTCC NO. M2012265)為主要發(fā)酵菌種和設(shè)定的獨特原料配方、エ藝條件，使生產(chǎn)的產(chǎn)品具有天然的濃郁醬香風(fēng)味和較低的成本(比同類產(chǎn)品成本降低20%以上)。本發(fā)明主要包括步驟如下I)將鮮肉去除脂肪，絞肉機將肉絞碎，蒸煮鍋內(nèi)加肉重量0. 1-1.0倍的水，蒸煮
0.3-2. 0h，溫度降至常溫打碎備用。將肉重量0. 1-0. 5倍的脫脂豆柏和麩皮潤水(脫脂豆柏和麩皮質(zhì)量的0. 5-1. 0倍)30min后進行常壓蒸煮20_60min，降至常溫打碎后備用。2)將一定量的篩選米曲霉和其他曲霉的孢子與適量的面粉進行充分混合，與步驟I)中的物料進行充分混合，米曲霉和其他曲霉的接種量分別為IO7-IO8個/g和IO6-IO7個/g干物料。在溫度23-28°C、相対濕度60-100%下進行固態(tài)發(fā)酵1-5天，所得大曲打碎備用。3)將步驟2)制備的大曲加入I. 0-4. 0倍水中進行酶解，酶解溫度35-55で、酶解PH4-8、酶解時間1-3天、攪拌速度30-150rpm。4)步驟3)酶解結(jié)束后，升溫至90-120°C反應(yīng)30-120min，降溫至90°C時加入適量的輔料(食鹽、蔗糖、味精、麥芽糊精、TBHQ和變性淀粉),750C保溫10-40min，過膠體磨，噴霧干燥制得醬香風(fēng)味呈味料。所述輔料是食鹽、蔗糖、味精、麥芽糊精、TBHQ和變性淀粉中的一種或其混合物，粒度40-100目；所述鮮肉是牛肉、豬肉、雞肉、羊肉、魚肉中的一種或者幾種的混合物；所述變性淀粉可以為氧化淀粉、辛烯基琥珀酸酯化淀粉、羥丙基變性淀粉中的一種或者幾種的混合物。本發(fā)明的優(yōu)點和特點a.與同類產(chǎn)品相比，本產(chǎn)品具有濃郁的天然醬香、ロ感飽滿醇厚、余味綿長的優(yōu)點；b.與同類產(chǎn)品相比，本產(chǎn)品具有降低20%以上成本的優(yōu)點；c.與同類產(chǎn)品相比，本產(chǎn)品具有天然、安全性更高的特點(通過降低化學(xué)合成香精實現(xiàn))。生物材料保藏本發(fā)明提供的米曲霉，于2012年7月I日保藏于中國典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏編號為CCTCC N0.M2012265，保藏地址為中國武漢武漢大學(xué)。
具體實施例方式實施例I :(I)取IOkg新鮮牛肉(除脂肪)，經(jīng)螺桿絞肉機絞碎，加水3kg蒸煮2. 0h，冷卻至常
溫備用。(2) 2. Okg脫脂豆柏與0. 5kg麩皮混合后潤水(2. 0kg) 30min,常壓蒸煮50min,冷
卻至常溫備用。(3)將米曲霉(CCTCC NO. M2012265)和黑曲霉ATCC16404分別連續(xù)接種于豆汁斜面培養(yǎng)基活化3-5代，然后接種于經(jīng)121°C、15min滅菌的麩皮培養(yǎng)基(含水量40-45%)上，分別于28°C、相対濕度95%的環(huán)境培中養(yǎng)40h，制備米曲霉和黑曲霉種曲備用。(4)取一定量的米曲霉和黑曲霉種曲與2. 5kg面粉充分混合均勻，使米曲霉和黑曲霉孢子數(shù)分別達到2. OX IO8和6. 6 X IO7個孢子/g物料。(5)將物料4分別依次與(2)和(I)進行充分混合。(6)將物料(5)放置于28°C、相対濕度95%的環(huán)境進行培養(yǎng)，至溫度上升至35°C進行第一次翻曲，2h后進行第二次翻曲，培養(yǎng)至48h時結(jié)束，大曲粉碎后備用。(7)將(6)在2倍重量的水中進行常溫浸泡30min，攪拌速度30rpm，升溫至45で、NaOH溶液調(diào)節(jié)pH6. 8-7. 2、攪拌速度50rpm，酶解3h，然后用鹽酸溶液調(diào)節(jié)至pH4. 0-4. 5、攪拌速度50rpm,酶解9h。(8)將(7)升溫至105°C美拉德反應(yīng)2. Oh。(9)上述(8)降溫至90で時加入食鹽1.01^、糖0.81^、味精1.01^、18即3. Og反應(yīng)15min，溫度降至85°C添加麥芽糊精2. Okg (DE < 20)、辛烯基琥珀酸酯化變性淀粉0. 5kg、羥丙基變性淀粉0. 3kg，充分?jǐn)嚢杈鶆颉?10)反應(yīng)液過膠體磨。(11)反應(yīng)液進行噴霧干燥，制備得到具有醇厚ロ感、余味綿長、醬香濃郁的牛肉呈味料。
實施例2 (I)取IOkg新鮮豬肉(除脂肪)，經(jīng)螺桿絞肉機絞碎，加水3kg蒸煮I. 5h，冷卻至常
溫備用。(2) I. 5kg脫脂豆柏與0. 5kg麩皮混合后潤水(I. 6kg) 30min,常壓蒸煮50min,冷
卻至常溫備用。(3)將米曲霉(CCTCC NO. M2012265)和黑曲霉ATCC16404分別連續(xù)接種于豆汁斜面培養(yǎng)基活化3-5代，然后接種于經(jīng)121°C、15min滅菌的麩皮培養(yǎng)基(含水量40-45%)上，分別于28°C、相対濕度95%的環(huán)境培養(yǎng)40h，制備米曲霉和黑曲霉種曲備用。
·
(4)取一定量的米曲霉和黑曲霉種曲與2. 5kg面粉充分混合均勻，使米曲霉和黑曲霉孢子數(shù)分別達到1.0X108和3. 3X IO7個孢子/g物料。(5)將物料4分別依次與(2)和(I)進行充分混合。(6)將物料(5)放置于28°C、相対濕度95%的環(huán)境進行培養(yǎng)，至溫度上升至35°C進行第一次翻曲，2h后進行第二次翻曲。培養(yǎng)至48h時結(jié)束，大曲粉碎后備用。(7)將(6)在2倍重量的水中進行常溫浸泡30min，攪拌速度30rpm，升溫至45で、NaOH溶液調(diào)節(jié)pH6. 8-7. 2、攪拌速度50rpm，酶解2. 5h，然后用鹽酸溶液調(diào)節(jié)pH4. 0-4. 5、攪拌速度50rpm,酶解7. 5h。(8)將(7)升溫至100°C美拉德反應(yīng)I. 5h。(9)上述(8)降溫至90で時加入食鹽1.01^、糖0.81^、味精1.01^、18即3. Og反應(yīng)15min，溫度降至85°C添加麥芽糊精2. Okg (DE < 20)、辛烯基琥珀酸酯化變性淀粉0. 5kg，充分?jǐn)嚢杈鶆颉?10)反應(yīng)液過膠體磨。(11)反應(yīng)液進行噴霧干燥，制備得到具有ロ感醇厚飽滿、醬香濃郁的豬肉呈味料。實施例3 ( I)取IOkg新鮮雞胸肉，經(jīng)螺桿絞肉機絞碎，加水3kg蒸煮I. Oh,冷卻至常溫備用。(2)其余步驟同實施例2，最終值得具有濃郁醬香風(fēng)味的雞肉呈味料。實施例4 (I)取IOkg新羊肉(除脂肪)，經(jīng)螺桿絞肉機絞碎，加水3kg蒸煮I. 0h，冷卻至常溫備用。(2)其余步驟同實施例2，最終值得具有濃郁醬香風(fēng)味的羊肉呈味料。實施例5 (I)取IOkg新鮮魚肉，經(jīng)螺桿絞肉機絞碎，加水3kg蒸煮0. 5h，冷卻至常溫備用。(2) I. 5kg脫脂豆柏與0. 5kg麩皮混合后潤水(I. 6kg) 30min,常壓蒸煮50min,冷
卻至常溫備用。(3)將米曲霉(CCTCC NO. M2012265)和黑曲霉ATCC 16404分別連續(xù)接種于豆汁斜面培養(yǎng)基活化3-5代，然后接種于經(jīng)121°C、15min滅菌的麩皮培養(yǎng)基(含水量40-45%)上，分別于28°C、相対濕度95%的環(huán)境中培養(yǎng)40h，制備米曲霉和黑曲霉種曲備用。(4)取一定量的米曲霉和黑曲霉種曲與2. 5kg面粉充分混合均勻，使米曲霉和黑曲孢子數(shù)分別達到I. OX IO8和3. 3 X IO7個孢子/g物料。(5)將物料4分別依次與(2)和(I)進行充分混合。
(6)將物料(5)放置于28°C、相対濕度95%的環(huán)境進行培養(yǎng)，至溫度上升至35°C進行第一次翻曲，2h后進行第二次翻曲。培養(yǎng)至48h時結(jié)束，大曲粉碎后備用。(7)將(6)在2倍重量的水中進行常溫浸泡30min，攪拌速度30rpm，升溫至45で、NaOH溶液調(diào)節(jié)pH6. 8-7. 2、攪拌速度50rpm，酶解2. 0h，然后用鹽酸溶液調(diào)節(jié)pH4. 0-4. 5、攪拌速度50rpm，酶解6. Oh。酶解液過100目篩網(wǎng)除魚刺。(8)將(7)升溫至95°C美拉德反應(yīng)I. Oh。(9)上述(8)降溫至90°C時加入食鹽I. 0kg、糖0. 8kg、味精I. 2kg、TBHQ 3. Og反應(yīng)15min，溫度降至85°C添加麥芽糊精2. Okg(DE < 20)、氧化淀粉0. 3kg、辛烯基琥珀酸酷化變性淀粉0. 5kg，充分?jǐn)嚢杈鶆颉?10)反應(yīng)液過膠體磨。(11)反應(yīng)液進行噴霧干燥，制備得到具有ロ感鮮美、醬香濃郁的魚肉呈味料。以上所述僅是本發(fā)明較佳的實施例，并非對本發(fā)明的技術(shù)方案做任何形式上的限制。凡是依據(jù)本發(fā)明的技術(shù)實質(zhì)對以上實施例所做的任何形式的修改、等同變化與修飾，均屬于本發(fā)明的技術(shù)方案的范圍內(nèi)。
權(quán)利要求
1.一種米曲霉(Aspergillus oryzae)G-79，于2012年7月I日保藏于中國典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏編號為CCTCC N0.M2012265。
2.權(quán)利要求I所述的米曲霉，其特征在于其高產(chǎn)蛋白酶、能產(chǎn)生濃郁的醬香風(fēng)味物質(zhì)。
3.應(yīng)用權(quán)利要求I或2所述米曲霉制備醬香風(fēng)味呈味料的方法，其特征在于包括下列步驟 1)將鮮肉去除脂肪，絞肉機將肉絞碎，蒸煮鍋內(nèi)加肉重量O.I -1. O倍的水，蒸煮O.3-2. 0h，溫度降至常溫打碎備用；將肉重量O. 1-0. 5倍的脫脂豆柏和麩皮潤水30min后進行常壓蒸煮20-60min，降至常溫打碎后備用； 2)接種權(quán)利要求I所述米曲霉和其他曲霉的孢子與步驟I)中的物料進行充分混合，米曲霉和其他曲霉的接種量分別為IO7-IO8個/g和IO6-IO7個/g干物料；在溫度23-28°C、相對濕度60-100%下進行固態(tài)發(fā)酵1-5天，所得大曲打碎備用； 3)將步驟2)制備的大曲加入I.0-4. O倍水中進行酶解，酶解溫度35-55°C、酶解pH4-8、酶解時間1-3天、攪拌速度30-150rpm ； 4)步驟3)酶解結(jié)束后，升溫至90-120°C反應(yīng)30-120min，降溫至90°C時加入輔料，75°C保溫10_40min，過膠體磨，噴霧干燥制得醬香風(fēng)味呈味料。
4.權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于所述輔料是食鹽、蔗糖、味精、麥芽糊精、TBHQ和變性淀粉中的一種或其混合物，粒度40-100目。
5.權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于所述鮮肉是牛肉、豬肉、雞肉、羊肉、魚肉中的一種或者幾種的混合物。
6.權(quán)利要求4所述的方法，其特征在于所述變性淀粉為氧化淀粉、辛烯基琥珀酸酯化淀粉、羥丙基變性淀粉中的一種或者幾種的混合物。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種米曲霉及其應(yīng)用于制備醬香風(fēng)味呈味料的方法，所述米曲霉于2012年7月1日保藏于中國典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏編號為CCTCC NO.M2012265。應(yīng)用本發(fā)明提供的米曲霉與黑曲霉進行混合發(fā)酵，控制發(fā)酵條件，利用兩種曲霉所產(chǎn)的酶系對原料進行可控酶解，獲得含有豐富小分子量肽(1-5kDa)、氨基酸和醬香類風(fēng)味物質(zhì)的酶解液，最終獲得醬香濃郁的肉類呈味料。與傳統(tǒng)直接添加商業(yè)酶制劑法制備的肉類呈味料相比，本發(fā)明制備的肉類呈味料具有成本低、口感醇厚、醬香濃郁、天然安全等優(yōu)勢。
文檔編號A23L1/231GK102787079SQ20121027695
公開日2012年11月21日 申請日期2012年8月6日 優(yōu)先權(quán)日2012年8月6日
發(fā)明者閆爽, 陸健, 高獻禮 申請人:江南大學(xué)