專利名稱：一種利用金色鏈霉菌生長期條件選育優勝菌株的方法
技術領域：
本發明屬于生物技術領域，尤其是一種利用金色鏈霉菌生長期條件選育優勝菌株的方法。
背景技術：
金霉素(Chlortetracycline)，又稱氯四環素，屬四環素類中衍生物的一種。化學名:6~ 甲基 ~4~ 二甲氣基 _3,6,10,12,12a-五輕基-1，11- _-氧代 ~7~ 氣-1,4,4a, 5, 5a, 6，11，12a-八氫-2-并四苯甲酰胺。分子量:478.8 ;分子式=C22H23ClN2O8。金霉素抗菌譜廣，對陽性菌、陰性菌、螺旋體、立克次氏體、支原體、衣原體、某些原蟲等均可產生抑制作用。金霉素的抗菌作用主要在于抑制細菌的生長，在其較高濃度時具有殺菌作用，其作用機制是干擾蛋白質的合成。適用于雞白痢、傷寒、豬細菌性腸炎以及禽類副傷寒、霍亂等疾病。同時，作為理想的飼料添加劑它還具有預防潛在感染、改善消化代謝、抑制腸道內有害微生物，促進有益微生物生長、提高飼料效能等。在全球范圍內，金霉素是所有飼料藥物添加劑中使用量最大的品種，是國際上重要的獸用抗生素之一。金色鏈霉菌(Streptomyces aureofaciens)為鏈霉菌科,鏈霉菌屬，孢子絲長,5-8圈螺旋形。孢子呈球形、卵圓形、長圓形，表面略崎嶇不平。菌落呈金黃色。在30°C以下時，合成金霉素的能力較強，當溫度超過35°C時，則只合成四環素而不合成金霉素。菌種保藏的目的在于盡可能保持其原有性狀和活力的穩定，確保菌種不死亡、不變異、不被污染，以便于研究、交換和使用。在實際生產實踐過程中，菌種經過長期人工培養或保藏，由于自發突變的作用而出現負突變引起某些優良特性變弱或消失，這種變異的結果往往導致菌種的退化，而金色鏈霉菌生產過程中的自然變異往往會出現正突變，產生優良菌株。

發明內容
本發明的目的在于利用金色鏈霉菌生長期條件選育優勝菌株，提供一種以微生物的自然突變為基礎的菌種選育方法。本發明的目的是通過以下技術方案實現的:(I)生產前期發酵液培養；(2)平皿分離培養；(3)挑單菌落接種試管斜面培養；(4)搖瓶初篩、復篩，效價鑒定；(5)砂土管保存；(6)生產應用；本發明的優點和有益效果為:1、本發明利用生產前期的金色鏈霉菌，通過平皿分離培養、試管斜面培養、搖瓶初復篩得到優勝菌株，應用生產，提高效價和產量，具有顯著的經濟效益。同時，為菌種選育提供新的思維方式和方法。2、本發明確定了利用金色鏈霉菌生產前期條件篩選優勝菌株的方法和條件，為進一步研究和開發生產資源，以及在滿足畜牧業需求、促進飼料工業發展等方面提供重要的現實意義。
具體實施例方式下面結合實施例，對本發明進一步說明，下述實施例是說明性的，不是限定性的，不能以下述實施例來限定本發明的保護范圍。實施例1:一種利用金色鏈霉菌生長期條件選育優勝菌株的方法，其步驟為:(I)選取生產至29h的金色鏈霉菌發酵液，接種至分離平皿。(2)平皿分離培養:32°C條件下培養3-5天至成熟備用。(3)試管斜面培養:從培養好的平皿中挑取單菌落，接種試管斜面，32°C，培養3-5
天。 (4)搖瓶初篩、復篩，效價鑒定:將試管斜面接種至搖瓶種子培養基，28°C下培養17h,接種搖瓶發酵培養基，280C，培養7天，測效價，挑選本批效價/正常生產效價> 105%或接近105%的菌株進行復篩。(5)砂土管保存。(6)生產應用:將RC2-196應用于生產中，最終效價和總億分別比正常生產批次提高了 5%和 16%。實施例2:一種利用金色鏈霉菌生長期條件選育優勝菌株的方法，其步驟為:(I)選取生產至29h的金色鏈霉菌發酵液，接種至分離平皿。(2)平皿分離培養:32°C條件下培養3-5天至成熟備用。(3)試管斜面培養:從培養好的平皿中挑取單菌落，接種試管斜面，32°C，培養3-5天。(4)搖瓶初篩、復篩，效價鑒定:將試管斜面接種至搖瓶種子培養基，28°C下培養17h,接種搖瓶發酵培養基，280C，培養7天，測效價，挑選本批效價/正常生產效價> 105%或接近105%的菌株進行復篩。(5)砂土管保存。(6)生產應用:將RC2-185應用于生產中，最終效價和總億分別比正常生產批次提高了 6%和1%。
權利要求
1.一種利用金色鏈霉菌生長期條件選育優勝菌株的方法，包括:(1)選取金霉素生產前期發酵液；(2)平皿分離培養；(3)試管斜面培養；(4)搖瓶初篩、復篩，效價鑒定；(5)砂土管保存；(6)工業生產應用。
2.根據權利要求1所述的一種利用金色鏈霉菌生長期條件選育優勝菌株的方法，其特征在于:分離平皿、試管斜面在溫度32°C條件下培養3-5天至成熟后備用。
3.根據權利要求1所述的一種利用金色鏈霉菌生長期條件選育優勝菌株的方法，其特征在于:將試管斜面接種于事先經滅菌的搖瓶種子培養基上，在28°C下培養17小時，接種于事先滅菌的搖瓶發酵培養基上。經接種的發酵培養基在溫度28°C下培養7天，測效價，挑選本批效價/正常生產效價≥ 105%或接近105%的菌株進行復篩。
4.根據權利要求1所述的一種利用金色鏈霉菌生長期條件選育優勝菌株的方法，其特征在于:將需要保存的菌種斜面孢子，在無菌條件下接入砂土中，攪拌混勻，棉塞封口，做好標記，置于放有干燥劑的真空干燥器內，用真空泵8h內抽成真空狀態。將接好的砂土管放置于放有干燥劑的廣口瓶 內，蓋緊密封，置0-10°C冰箱內保存備用。
全文摘要
本發明涉及到一種利用金色鏈霉菌生長期條件選育優勝菌株的方法，包括取得處于生長旺盛期的金色鏈霉菌，經過平皿分離培養，選擇優勢菌落至斜面培養，再經搖瓶初篩、復篩鑒定后，選出優勝菌株。優勝菌株的生物學穩定性經過多次復篩確定后，進行低溫純種保存；同時，在工業生產中進行試用，以達到穩定或提高菌種的工業生產能力。本發明通過一系列篩選，得到三株菌株RC2-88、RC2-185和RC2-196。應用于生產后，效價和產量均有不同程度的提高。與出發菌株相比，其工業生產效能提高了1％-16％。本發明豐富了菌種選育的方法，提高了產量，具有顯著的經濟效益和社會效益。
文檔編號C12N1/20GK103074244SQ20121029927
公開日2013年5月1日 申請日期2012年8月22日 優先權日2012年8月22日
發明者李書至, 朱曉麗, 李亞峰, 張雪崢 申請人:駐馬店華中正大有限公司